梁澤鑫　柯軍　劉淋蕊　楊立峰

1 廣東省醫(yī)療器械質(zhì)量監(jiān)督檢驗所?。◤V州　510663）

2 廣州金域醫(yī)學(xué)檢驗中心有限公司?。◤V州　510330）

pH值對殼聚糖創(chuàng)傷敷料抑菌性能影響探討

梁澤鑫1柯軍1劉淋蕊2楊立峰1

1 廣東省醫(yī)療器械質(zhì)量監(jiān)督檢驗所（廣州510663）

2 廣州金域醫(yī)學(xué)檢驗中心有限公司（廣州510330）

內(nèi)容提要： 本文研究了殼聚糖創(chuàng)傷敷料在不同pH值PBS緩沖溶液中對微生物的抑制作用。結(jié)果表明：在pH值6.7的PBS緩沖溶液中，殼聚糖創(chuàng)傷敷料對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和白色念珠菌均具有較強的抑制作用，抑菌率分別達98%、99%、58%，而在pH6.2和pH7.2的PBS緩沖溶液中，殼聚糖創(chuàng)傷敷料對白色念珠菌的抑菌作用明顯下降，抑菌率分別為29%和0%。結(jié)論：殼聚糖創(chuàng)傷敷料抑菌性能受pH影響較大，該產(chǎn)品發(fā)揮抑菌作用的最佳pH為6.7。

殼聚糖抑菌作用pH值

0.概述

殼聚糖作為高分子海洋活性多糖，以其優(yōu)良的成膜性、可降解性、對人體無毒無害性、生物相容性、抑菌性等優(yōu)點，廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥衛(wèi)生、食品化工等領(lǐng)域。近年來，隨著人們對安全無毒的天然防腐劑越來越重視，殼聚糖因其優(yōu)良的抑菌活性成為研究熱點。關(guān)于殼聚糖抑菌性能方面的研究很多，例如，應(yīng)用于皮膚創(chuàng)傷面［1］及預(yù)防尿路感染［2］的殼聚糖抗菌成膜噴劑，均顯現(xiàn)出明顯的抑菌效果，而對于殼聚糖抑菌作用穩(wěn)定性的研究則少見報道?！吨腥A人民共和國藥典》（2015年版）抑菌效力檢查法中指出，pH值對抑菌劑的活性影響很大。本文研究了殼聚糖創(chuàng)傷敷料在不同pH值PBS緩沖溶液中對微生物的抑制作用。

1.材料與方法

1.1試驗材料

主要儀器：生物安全柜、恒溫振蕩搖床

試驗菌株及培養(yǎng)基：金黃色葡萄球菌（ATCC 6538）、大腸桿菌（ATCC 25922）、白色念珠菌（ATCC 10231）；營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、沙氏瓊脂培養(yǎng)基。

試劑：0.03mol/L磷酸鹽緩沖液（pH6.2、6.7、7.2）。

試驗用殼聚糖創(chuàng)傷敷料是一種以海蟹殼為原料，經(jīng)提取、分離、純化和改性加工工藝制成的傷口敷料。

1.2試驗方法

抑菌性能試驗方法，參照GB15979-2002《一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標準》附錄C5試驗方法進行。

1.2.1菌液制備

取菌株第3代的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（沙氏瓊脂培養(yǎng)基）斜面新鮮培養(yǎng)物（18～24h），用5mL 0.03mol/L磷酸鹽緩沖液（以下簡稱PBS）洗下菌苔，使菌懸浮均勻后用上述PBS稀釋至所需濃度。

1.2.2稱量、染菌、培養(yǎng)、計數(shù)

稱取被試樣片（剪成1.0cm×1.0cm）0.75分裝包好。將0.75g重樣片放入一個250mL的三角燒瓶中，分別加入70mLPBS和5mL菌懸液，使菌懸液在PBS中的濃度為1×104～9×104cfu/mL。

將三角燒瓶固定于振蕩搖床上，以300r/min振搖1h。

取0.5mL振搖后的樣液，活用PBS做適當(dāng)稀釋后的樣液，以瓊脂傾注法接種平皿，進行菌落計數(shù)。同時設(shè)對照樣片組（以純棉布作為對照）和不加樣片組，對照樣片組的對照樣片與被試樣片同樣大小但不含抗菌成分。其他操作均與被試樣片組相同，不加樣片組分別取5mL菌懸液和70mLPBS加入一個250mL三角燒瓶中，混勻，分別于0h時間和振蕩1h后，各取0.5mL菌懸液與PBS的混合液做適當(dāng)稀釋，然后進行菌落計數(shù)。試驗重復(fù)3次，按下述公式計算抑菌率。

式中：X——抑菌率，%

A——被試樣品振蕩前平均菌落數(shù)；

B——被試樣品振蕩后平均菌落數(shù)。

1.2.3評價標準

不加樣片組的菌落數(shù)在1×104～9×104cfu/mL之間，且樣品振蕩前后平均菌落數(shù)差值在10%以內(nèi)，試驗有效；被試樣片組抑菌率與對照樣片組抑菌率的差值＞26%，產(chǎn)品具有抗菌作用。

2.結(jié)果

表1. 不同pH條件下，測試樣品對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和白色念珠菌抑菌率

選用pH分別為6.2、6.7、7.2的PBS緩沖溶液，按照上述試驗方法對試樣抑菌性能進行測試，結(jié)果表明，殼聚糖創(chuàng)傷敷料抑菌性能受pH影響較大，在pH為6.7的PBS緩沖溶液中，該產(chǎn)品對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、白色念珠菌的抑菌率達到最大。試驗結(jié)果如表1所示。

3.討論

由表1結(jié)果得知，在pH7.2的PBS緩沖溶液中，殼聚糖創(chuàng)傷敷料僅對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌具有抑菌作用，對白色念珠菌無抑菌作用。在pH6.7的PBS緩沖溶液中，殼聚糖創(chuàng)傷敷料對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、白色念珠菌均具有較明顯抑菌作用。在pH6.2的PBS緩沖溶液中，殼聚糖創(chuàng)傷敷料對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、白色念珠菌的抑菌作用有所減弱，仍表現(xiàn)有抑菌作用。由試驗結(jié)果表明，pH值對殼聚糖創(chuàng)傷敷料抑菌活性影響較明顯。在GB15979-2002《一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標準》附錄C5試驗方法中所用PBS的pH值為7.2，這導(dǎo)致某些廠家送檢的殼聚糖創(chuàng)傷敷料產(chǎn)品，在采用GB15979-2002附錄C5測試方法時，對白色念珠菌抑菌性能檢測不合格的情況時有發(fā)生。殼聚糖作為甲殼素的脫乙酰基衍生物，由于其分子量、分子結(jié)構(gòu)、生產(chǎn)工藝等各種因素的影響，其抑菌性能會有一定程度的不穩(wěn)定性［3，4］。本實驗室在對殼聚糖類產(chǎn)品的檢測過程中，還發(fā)現(xiàn)溫度也是影響其抑菌性能穩(wěn)定性的一大因素。本文通過pH值對殼聚糖創(chuàng)傷敷料抑菌性能影響探討，希望殼聚糖類抗菌產(chǎn)品的抑菌性能穩(wěn)定性受到企業(yè)、科研單位等機構(gòu)的重視，在開發(fā)殼聚糖類產(chǎn)品時應(yīng)該重視產(chǎn)品的穩(wěn)定性能研究，開發(fā)出抑菌性能優(yōu)良且穩(wěn)定性良好的新產(chǎn)品。

［1］ 梁澤鑫，苗曉琳，柯軍等.一種殼聚糖抗菌成膜噴劑殺（抑）菌效果的試驗觀察［J］.中國消毒學(xué)雜志，2014，31（10）：15-19.

［2］ 劉美芹，朱桂嬌，卞軍.今福生殼聚糖抗菌成膜噴劑預(yù)防老年男性患者留置導(dǎo)尿管并發(fā)尿路感染的作用［J］.現(xiàn)代臨床護理，2013，12（4）∶34-36.

［3］ 張維穎、朱基千、徐政，等.影響水溶性羧甲基殼聚糖穩(wěn)定性的外界因素［J］.生物醫(yī)學(xué)工程雜志，2005，22（4）∶745-748.

［4］ 張雨菲，李友良，姚遠，等.殼聚糖納米銀溶液的穩(wěn)定性及在織物抗菌整理上的應(yīng)用［J］.高等學(xué)校化學(xué)學(xué)報，2012，33（8）∶1860-1865.

Investigation on the bacteriostatic effect of chitosan wound dressing by pH

LIANG Ze-xin1KE Jun1LIU Lin-rui2YANG Li-feng1
1 Institute of Guangdong Medical Equipment Quality Supervision and Inspection（Guangzhou510663）
2 Guangzhou Jinyu Medical Inspection Center Co. Ltd（Guangzhou510330）

The bacteriostatic effect of chitosan wound dressing in different pH values PBS was investigated. The results showed that a good antimicrobial effect on Staphylococcus aureus ，E. coli and Candida albicans by chitosan wound dressing was observed in pH 6.7 PBS， where the antibacterial values were respectively 98%， 99% and 58%. The antimicrobial effect on Candida albicans by chitosan wound dressing was badly infuenced in pH 6.2 and 7.2 PBS， where the antibacterial values were 29% and 0%. As a result，the bacteriostatic effect of chitosan wound dressing is infuenced by pH and the best pH value of bacteriostatic effect is pH 6.7.

chitosan，bacteriostatic effect，pH value

1006-6586（2016）09-0057-03

R318.08

A

2016-05-11

梁澤鑫，碩士研究生，工程師，主要從事醫(yī)療器械微生物檢驗工作。

《廣東省醫(yī)療產(chǎn)品生物安全評價科技服務(wù)平臺》項目編號：2012B011000003。