張慧，楊孟妮，胡攀，夏厚林

安息香配伍冰片在人工胃腸液中的成分變化研究

張慧，楊孟妮，胡攀，夏厚林

目的：研究安息香與冰片配伍后其主要成分苯甲酸及總香脂酸在人工胃腸液中的含量變化情況。方法：采用高效液相色譜法（HPLC）研究苯甲酸含量變化，采用紫外分光光度法（UV）研究總香脂酸含量變化。結(jié)果：HPLC測定苯甲酸含量大小為：人工腸液＞水＞人工胃液，配伍冰片組含量大于單味樣品組含量；UV測定總香脂酸含量大小為：人工腸液＞水＞人工胃液；配伍冰片組含量大于單味樣品組含量。結(jié)論：HPLC和UV測定結(jié)果表明安息香在人工腸液中吸收更好，而在人工胃液中吸收較少，表明安息香主要在腸道代謝；與冰片配伍有利于安息香的吸收，體現(xiàn)了冰片與安息香相須相使的作用，表明了配伍的合理性。

HPLC；UV；苯甲酸；總香脂酸；人工胃腸液

安息香［1］為安息香科植物白花樹Styrax tonkinensis （Pierre） Craib ex Hart.的干燥樹脂，是一種芳香開竅藥，具有開竅醒神、行氣活血、止痛的功效。根據(jù)前期研究，安息香主要有效成分總香脂酸發(fā)揮了芳香開竅的作用，其中的苯甲酸［2］發(fā)揮了抗菌防腐的作用。

安息香是芳香開竅藥［3］，麝香，冰片，石菖蒲同屬于開竅藥。為了達到好的療效，開竅藥常配伍使用，已有研究麝香與冰片配伍對腦缺血缺氧小鼠模型的影響［4］，及冰片與石菖蒲的配伍研究［5］等方面的報道。實驗室前期對安息香配伍冰片對小鼠腦缺血缺氧及血腦屏障通透性的影響［6］進行研究后發(fā)現(xiàn)安息香與冰片配伍后能顯著延長小鼠存活時間，結(jié)果表明安息香與冰片有相須相使的配伍關(guān)系。在此基礎(chǔ)上，我們研究安息香與冰片（4∶1）配伍后能否增加了安息香的主要成分在模擬的胃腸液中的溶出量，而使得他們的配伍在小鼠的腦缺血缺氧實驗中發(fā)揮作用。

1 儀器與材料

1.1儀器

BS124S電子分析天平（十萬分之一，賽多利斯科學(xué)儀器，北京有限公司），高效液相色譜儀（Agilent Technologies），空氣浴振蕩器（HZQ-C，中國哈爾濱市東聯(lián)電子技術(shù)開發(fā)有限公司制造），紫外分光光度儀（UV1100 spectrophotometer），W201B恒溫水浴鍋（上海亞榮生化儀器廠），DHG-9075A型電熱鼓風(fēng)干燥箱（上?！憧茖W(xué)儀器有限公司）。

1.2材料

安息香藥材、冰片藥材均購置于成都荷花池中藥材市場，分別經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)盧先明教授鑒定為安息香科植物白花樹Styrax tonkinensis（Pierre）Craib ex Hart的干燥樹脂和龍腦香科植物龍腦香dipterocarpaceae的樹脂和揮發(fā)油加工品提取獲得的結(jié)晶；苯甲酸對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：20141203），水為超純水，胰蛋白酶（1：250，牛胰，T0458 25g，如吉生物科技），胃蛋白酶（上海伯奧生物科技有限公司，130131），實驗所用其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1人工腸液的制備

參照《中華人民共和國藥典》2010版配制，取6.8 g磷酸二氫鉀，加500 mL水使溶解，用0.1 mol·L-1NaOH調(diào)節(jié)pH至6.8；再取胰蛋白酶10 g，加適量水使溶解，將兩液混合后，加水稀釋至1000 mL即得。

2.2人工胃液的制備

參照《中華人民共和國藥典》2010版配制，取16.4 mL稀鹽酸，加約800 mL的水與10 g胃蛋白酶，搖勻后加水稀釋成1000 mL即得。

2.3HPLC測定苯甲酸含量變化

2.3.1對照品溶液的制備 精密稱取苯甲酸對照品10.10 mg，加甲醇定容到10 mL即得（1.01 mg·L-1）。

2.3.2供試品溶液的制備 精密取安息香藥材粉末0.5 g 分別加入水/胃液/腸液300 mL；精密取安息香藥材粉末0.5 g和冰片藥材0.125 g分別加入水/胃液/腸液300 mL（注：安息香藥材與冰片配伍比例根據(jù)本實驗室前期試驗優(yōu)選比例4：1）；精密取冰片0.125 g分別加入水/胃液/腸液300 mL；以上每組做三個平行試驗，總共有9*3=27個供試品。將上述27個樣置于空氣浴振蕩器恒溫震蕩8 h取樣過濾，取續(xù)濾液調(diào)pH 至7，再過微孔濾膜，即得供試品。

2.3.3色譜條件 色譜柱：Inertsil ODS-3，C18柱（4.6*250mm，5μm），流動相：甲醇-0.3％磷酸水（40：60），檢測波長：230 nm，流速：1 mL·min-1，進樣量：20 μL。

2.3.4方法學(xué)考察 取苯甲酸對照品溶液稀釋成3.03 mg·mL-1、9.09 mg·mL-1、30.3 mg·mL-1、90.9 mg ·mL-1、151.5 mg·mL-1的濃度，分別進樣20μL，按“2.3.3”項下色譜條件測定，記錄峰面積。以進樣量（mg）為橫坐標(biāo)，峰面積（mAU）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為y=101.00x+146.17，r=0.9997，結(jié)果表明苯甲酸在3.03～151.5 mg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

取同一批次藥材依法考察，精密度試驗RSD為0.89％；24h內(nèi)穩(wěn)定性試驗人工腸液中RSD為0.60％，水中RSD為1.09％，人工胃液中RSD為為0.85％；加樣回收率試驗人工腸液中平均回收率為93.74％、RSD為1.60％，水中平均回收率為94.28％、RSD為1.51％，人工胃液中平均回收率為94.07％、RSD為1.37％，表明該法可靠性較好。

2.3.5苯甲酸含量測定 照“2.3.1”和“2.3.2”項下供試品的制備方法制備。分別精密吸取對照品和供試品各20 μL，注入液相色譜儀測定，結(jié)果見圖1～圖3、表1。

圖1　苯甲酸對照品色譜圖

圖2　空白胃液色譜圖

圖3　空白腸液色譜圖

表1　苯甲酸含量測定結(jié)果（n=3）

根據(jù)結(jié)果顯示苯甲酸含量大小為：配伍冰片組＞單味安息香組，人工腸液組＞水組＞人工胃液組，單味冰片組不含苯甲酸。

2.4UV測定總香脂酸含量變化

2.4.1對照品溶液的制備 精密稱取20 mg苯甲酸對照品，加飽和碳酸氫鈉溶液溶解，并加碳酸氫鈉飽和溶液定容至5 mL，即得。

2.4.2供試品溶液的制備 照“2.3.2項”下調(diào)pH后加乙醚萃取3次，合并乙醚層液體，再加碳酸氫鈉萃取3次，合并萃取液，取萃取液0.5 mL定容到10 mL即得。

2.4.3方法學(xué)考察 精密吸取對照品溶液10 μL、15 μL、20 μL、25 μL、30 μL、35 μL加水定容至10 mL，于考察波長223 nm下用1 cm比色皿測定吸光度A。以苯甲酸的濃度為橫坐標(biāo)，對應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)得到以下回歸方程y=71.200x-0.0565，r=0.9996，表明苯甲酸的濃度在0.004 mg·mL-1～0.014 mg·mL-1之間線性范圍良好。

取同一批次藥材依法考察，精密度試驗RSD為1.19％；24h內(nèi)穩(wěn)定性試驗人工腸液中RSD為0.60％，水中RSD為1.44％，人工胃液中RSD為為1.52％；加樣回收率試驗人工腸液中平均回收率為94.16％、RSD為0.95％，水中平均回收率為93.78％、RSD為0.75％，人工胃液中平均回收率為94.10％、RSD為1.25％。結(jié)果表明該法可靠性較好。

2.4.4總香脂酸含量測定

表2　總香脂酸含量測定結(jié)果（n=3）

安息香+胃液2.941.28安息香+冰片+胃液3.031.50冰片+腸液0-冰片+水0-冰片+胃液0-

根據(jù)結(jié)果顯示總香脂酸含量大小為：配伍冰片組＞單味安息香組，人工腸液組＞水組＞人工胃液組，單味冰片組不含總香脂酸。

3 討論

3.1本實驗選取苯甲酸與總香脂酸作為研究指標(biāo)，原因是安息香藥材中這兩個指標(biāo)含量最高，也是藥典收載的，這兩個指標(biāo)也是安息香的主要有效成分。

3.2安息香在人工腸液中的吸收比在人工胃液中的吸收強，說明安息香主要在腸液中代謝，由于腸液pH環(huán)境偏堿性，有利于酸性成分苯甲酸和總香脂酸的溶出，而胃液中pH環(huán)境偏酸性，阻礙了酸性成分的溶出，進而影響吸收。表明安息香適合制成腸溶藥物。這個結(jié)論為安息香的藥劑學(xué)提供了依據(jù)。

3.3通過實驗發(fā)現(xiàn)安息香及總香脂酸與冰片配伍后的指標(biāo)比單味使用的指標(biāo)高，說明配伍有利于安息香的吸收，安息香和冰片都是芳香開竅藥，具有功能上的協(xié)同作用，說明了冰片與安息香有相須相使的作用，表明了配伍的合理性，同時也為中醫(yī)藥理論指導(dǎo)用藥提供了參考。

3.4總香脂酸的提取和安息香冰片（4：1）的配伍比都是采用本實驗室前期研究結(jié)論。

3.5本實驗考察了苯甲酸與總香脂酸的溶出度，結(jié)果顯示空氣浴震蕩8h為最佳提取時間。

［1］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典一部［S］. 北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：138.

［2］ 雷玲，王強，鄧文龍，等.安息香的抗炎解熱作用研究［J］. 中藥藥理與臨床，2012，28（2）：109.

［3］ 倪彩霞，曾南，湯奇，等.芳香開竅藥對正常小鼠血腦屏障通透性的影響［J］.江蘇中醫(yī)藥，2011，43（2）：88.

［4］ 王洋，王建，夏厚林，等.麝香與冰片及其配伍對腦缺血缺氧小鼠模型的影響［J］.中藥藥理與臨床，2011，27（2）：96.

［5］ 吳雪，歐陽麗娜，向大位，等.冰片及石菖蒲促進羥基紅花黃色素A透過血腦屏障的實驗研究［J］. 中草藥，2011：42（4）：734.

［6］ 黃萍，夏厚林，賈芳，等. 安息香配伍合成冰片對小鼠腦缺血缺氧及血腦屏障通透性的影響［J］. 中藥藥理與臨床，2013，29（5）：75.

（責(zé)任編輯：李蕓霞）

Research on composition change of Anxixiang after compatibility with Bingpian in artificial gastric and intestinal fluid/

ZHANG Hui， YANG Meng-ni， HU Pan， XIA Hou-lin//（School of Pharmacy， Chengdu University of Traditional Chinese Medicine；Key Laboratory of Standardization for Chinese Herbal Medicine， Ministry of Education； National Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research， Development and Utilization of Chinese Medicine Resources， Chengdu 611137， Sichuan）

Objective: To investigate the content change of main ingredients of Anxixiang （benzoic acid and total balsam acid） after compatibility with Bingpian in artificial gastric and intestinal fluid. Method: High performance liquid chromatography （HPLC） was used to detect benzoic acid content changes. UV spectrophotometry （UV） was used to research balsam acid content changes. Result: HPLC determination results showed that benzoic acid content in artificial intestinal fluid was larger than that in water which was more than in artificial gastric fluid. Bingpian increased benzoic acid content in each fluid. UV determination showed that total balsam content in artificial intestinal fluid was larger than that in water which was more than that in artificial gastric fluid. Bingpian increased total balsam content in each fluid. Conclusion: The HPLC and UV results indicate that Anxixiang absorption in artificial intestinal fluid is better than in artificial gastric fluid which may be caused by intestinal metabolism. Compatibility of Bingpin increases the absorption of Anxixiang which reflects rationality of compatibility.

HPLC； UV； benzoic acid； total balsam acid； artificial gastric intestinal fluid

R 284.1

A

1674-926X（2016）03-018-03

成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 中藥材標(biāo)準(zhǔn)化教育部重點實驗室 四川省中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用重點實驗室省部共建國家重點實驗室培育基地，成都 611137

張慧（1991-），女，藥物分析碩士，主要從事中藥質(zhì)量控制方向研究 Tel：13880459062 Email：zhanghui9101@163.com

夏厚林（1964-），男，教授，博士，主要從事中藥學(xué)、藥物分析學(xué)、物理化學(xué)方向研究Tel：13568899011 Email：XHL64@163.com

2015-07-22