肖芳，黃勤挽，譚茂蘭，范潤勇

·炮制制劑·

酒西五味子與醋西五味子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

肖芳，黃勤挽，譚茂蘭，范潤勇

目的：建立酒西五味子與醋西五味子的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：以五味子甲素為對照品進(jìn)行酒西五味子與醋西五味子的薄層鑒別； 采用HPLC測定酒西五味子與醋五味子中五味子甲素的含量。分別對酒西五味子與醋西五味子水分、總灰分、酸不溶性灰分及水浸出物進(jìn)行檢測。結(jié)果：酒西五味子與醋西五味子薄層色譜分離度好，斑點清晰。根據(jù)樣品測定結(jié)果，建議酒西五味子與醋西五味子水分分別不得超過13.0％、14.0％，總灰分均不得超過7.0％，酸不溶性灰分均不得超過2.0％，水浸出物含量均不得少于30.0％。五味子甲素進(jìn)樣量在0.3984～3.984 μg（r=1）其峰面積積分值與進(jìn)樣量有良好的線性關(guān)系，平均回收率為99.22％，RSD為1.08％，酒西五味子與醋西五味子中五味子甲素含量均不得低于0.2％。結(jié)論：所建方法操作簡單，準(zhǔn)確可靠，可用于評價酒西五味子與醋西五味子的質(zhì)量。

酒西五味子；醋西五味子；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；薄層鑒別；含量測定；五味子甲素

西五味子［1］為木蘭科五味子屬植物翼梗五味子Schisandrahenryi Clarke、紅花五味子Schisandrarubriflora Rehd.et Wils.或柔毛五味子Schisandrapubescens Hemsl.et Wils.的干燥成熟果實。其具有收斂固澀，益氣生津，補(bǔ)腎寧心等功效。酒西五味子多用于腎虛滑精，醋西五味子多用于咳嗽，遺精，泄瀉。五味子甲素為西五味子的主要有效成分之一，具有一定的保肝作用［1］。目前酒西五味子與醋西五味子在《四川省中藥飲片炮制規(guī)范》2002年版有收載，但尚未見其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的相關(guān)文獻(xiàn)報道。本實驗對西五味子的薄層鑒別、檢查（水分、總灰分、酸不溶性灰分、水浸出物） 及五味子甲素含量測定進(jìn)行研究，旨在系統(tǒng)評價西五味子的兩種炮制品質(zhì)量，確保其臨床用藥安全、有效。

1 材料

1.1儀器

1200型高效液相色譜儀（ 美國Agilent）；BSA224S分析天平（德國Sartorius系列）；BP211D十萬分之一電子分析天平（德國Sartorius系列）；SRIX-4-13箱式電阻爐（北京中興儀器偉業(yè)有限公司）；SHZDⅢ型循環(huán)水式多用真空泵 （鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司）；UPH-I-10T優(yōu)普超純水器（成都超純科技有限公司）；RJ-TGL-16C型高速離心機(jī)（無錫瑞江分析儀器有限公司）；ZF-90多功能暗箱式紫外透射儀（上海寶山顧村電光儀器廠）。

1.2試藥與樣品

五味子甲素對照品（供含量測定用），由中國食品藥品檢定研究院提供（批號：110764-201312）；色譜級甲醇、水為超純水；其他試劑均為分析純。在成都荷花池中藥材專業(yè)市場收集3個產(chǎn)地的3批西五味子藥材，分別委托四川新荷花中藥飲片股份有限公司、四川省中藥飲片有限責(zé)任公司生產(chǎn)13批酒西五味子、醋西五味子樣品，詳見表1。

表1　酒西五味子、醋西五味子樣品來源一覽表

*注：樣品1～樣品12購買于成都荷花池中藥材專業(yè)市場，委托四川新荷花中藥飲片股份有限公司、四川省中藥飲片有限責(zé)任公司進(jìn)行酒制、醋制加工。

以上樣品均經(jīng)過四川省食品藥品檢驗檢測院黎躍成主任藥師鑒定，為木蘭科五味子屬植物翼梗五味子SchisandrahenryiCLarke、紅花五味子SchisandrarubrifLora Rehd.et WiLs.或柔毛五味子Schisandrapubescens HemsL.et Wils.的干燥成熟果實。

2 方法與結(jié)果

2.1顯微鑒別

本品粉末棕色。石細(xì)胞單個或成群，表面觀多角形、卵圓形、長橢圓形或不規(guī)則形。果皮表皮細(xì)胞表面觀類多角形，垂周壁略成連珠狀增厚，表面有角質(zhì)紋理。

2.2薄層鑒別

2.2.1供試品溶液和對照品溶液的制備 分別取醋西五味子與酒西五味子品粉末1 g，加三氯甲烷20 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加三氯甲烷1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取五味子甲素對照品，加三氯甲烷制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。

2.2.2TLC 試驗 照薄層色譜法（《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB）試驗，吸取上述兩種溶液各2 μl，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15：5：1）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（254 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。本方法分離效果好，斑點清晰，重復(fù)性好。見圖1。

圖1　酒西五味子、醋西五味子TLC圖

2.3水分

按《中國藥典》2010年版一部附錄ⅨH 水分測定法第一法測定水分。測得6批酒西五味子與7批醋西五味子水分平均值分別為10.7％和11.7％。故暫定酒西五味子水分檢查限度不得超過13.0％，醋西五味子水分檢查限度不得超過14.0％。

2.4總灰分

按《中國藥典》2010年版一部附錄ⅨK 灰分測定法測定灰分。測得6批酒西五味子與7批醋西五味子灰分平均值分別為5.8％和5.7％。故暫定酒西五味子灰分檢查限度不得超過7.0％，醋西五味子灰分檢查限度不得超過7.0％。

2.5酸不溶性灰分

按《中國藥典》2010年版一部附錄ⅨK灰分測定法測定酸不溶性灰分。測得6批酒西五味子與7批醋西五味子酸不溶性灰分平均值分別為1.6％和1.7％。故暫定酒西五味子酸不溶性灰分檢查限度不得超過2.0％，醋西五味子酸不溶性灰分檢查限度不得超過2.0％。

2.6浸出物

按《中國藥典》2010年版一部附錄X A浸出物測定法項下熱浸法測定浸出物含量，以水為溶劑。測得6批酒西五味子與7批醋西五味子水浸出物含量平均值分別為39.6％和41.3％。故暫定酒西五味子水浸出物含量不得少于30.0％，醋西五味子水浸出物含量不得少于30.0％。

2.7含量測定

2.7.1色譜條件 色譜柱：HypersiL C18（10 μm，250×4.6 mm），以甲醇-水（77：23）為流動相，流速：1 mL·min-1，檢測波長為254 nm，柱溫：25℃，進(jìn)樣量10 μl。結(jié)果見圖2。

2.7.2對照品溶液的制備及線性關(guān)系考察 精密稱取五味子甲素對照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.3984 mg的溶液，即得五味子甲素對照品溶液。精密吸取五味子甲素對照品溶液（0.3984 g·L-1）1，2，4，6，8，10 μl，在上述色譜條件下，依次進(jìn)樣，以五味子甲素濃度（X）為橫坐標(biāo)，色譜峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計算線性回歸方程為Y=1776.2X-16.951，r=1，結(jié)果表明五味子甲素在0.3984～3.984 μg范圍內(nèi)，其峰面積與進(jìn)樣量有良好的線性關(guān)系。

2.7.3供試品溶液的制備 分別取酒西五味子與醋西五味子樣品粉末（過三號篩）約1.0 g，精密稱定，精密加入甲醇25 mL，稱定重量，超聲提取30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

圖2　酒西五味子和醋西五味子中五味子甲素HPLC圖

2.7.4精密度試驗 取0.3984 g·L-1的五味子甲素對照品溶液連續(xù)進(jìn)6次，測定峰面積，結(jié)果峰面積值的RSD為0.24％。結(jié)果表明儀器的精密度良好。

2.7.5重復(fù)性試驗 取6份同一批次樣品（批號：20141001）各約1.0 g，精密稱定，按“2.5.3”項下方法制備供試品溶液，結(jié)果測得五味子甲素含量的RSD為2.7％。結(jié)果表明方法的重復(fù)性良好。

2.7.6加樣回收率試驗 稱取已知含量的樣品（批號：20141001）約0.5 g，精密稱定，共6份。分別加入五味子甲素對照品溶液（0.3984g·L-1）2 mL，依次測定，計算含量，并計算回收率，五味子甲素平均回收率為99.22％，RSD為1.08％。結(jié)果表明該方法回收率良好，符合HPLC 含量測定要求，見表2。

表2　加樣回收率試驗

20·5010·6917 0·7968 1·472698·00 30·5000·6879 0·7968 1·483299·81 40·5020·6872 0·7968 1·4862100·3 50·5000·6905 0·7968 1·485699·79 60·5010·6880 0·7968 1·482399·69

2.7.7穩(wěn)定性試驗 取酒西五味子（批號20141001）供試品溶液，分別在0，2，4，6，8，12，24 h ，進(jìn)樣10 μl測定峰面積，計算得RSD為1.2％。結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7.8含量測定 分別取各酒西五味子與醋西五味子樣品粉末1.0 g，按“2.5.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.5.1”項下色譜條件測定并計算百分含量，五味子甲素含量測定結(jié)果見表3、表4。酒西五味子、醋西五味子中五味子甲素平均含量（ 按干燥品計算） 分別為0.22％、0.21％。根據(jù)測定結(jié)果，建議規(guī)定酒西五味子中五味子甲素含量不得低于0.2％，醋西五味子中五味子甲素含量不得低于0.2％。

表3　酒西五味子中五味子甲素含量（n=3）

表4　醋西五味子中五味子甲素含量（n=3）

3 討論

3.1本文參考相關(guān)文獻(xiàn)報道［4～6］，對西五味子中五味子甲素的提取工藝及含量測定所用流動相的選擇進(jìn)行篩選與優(yōu)化。實驗表明，以甲醇作為溶劑超聲提取30 min效果最佳。與以無水乙醇或甲醇作為溶劑水浴回流提取方法相比，該方法更加簡單易行，可操作性強(qiáng)，且含量測定結(jié)果表明，三種提取方法所得五味子甲素含量并無明顯差異，所以選擇該方法作為最佳提取方法。在流動相的選擇上，本文對甲醇-水（85：15）、甲醇-水（90：10）、甲醇-水（77：23）三種流動相系統(tǒng)進(jìn)行篩選，實驗表明，在選用甲醇-水（85：15）與甲醇-水（90：10）作為流動相時，部分樣品在與對照品相同保留時間處具有相應(yīng)的色譜峰，但是部分樣品卻沒有，說明應(yīng)用此兩種流動相系統(tǒng)建立的方法適應(yīng)性不好，而甲醇-水（77：23）效果明顯優(yōu)于上述兩種系統(tǒng)，其可重復(fù)性良好，結(jié)果準(zhǔn)確，所以選擇甲醇-水（77：23）作為西五味子中五味子甲素含量測定所用最佳流動相系統(tǒng)。

3.2實驗所用酒西五味子與醋西五味子均按《四川省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》2002年版炮制項下方法獲得，其炮制工藝大致為：取凈西五味子，分別用黃酒或醋拌勻，蒸至透心，干燥。每100 kg西五味子，用黃酒或醋10 kg。實驗還對西五味子藥材生品與炮制品中五味子甲素含量進(jìn)行比較，結(jié)果表明同一產(chǎn)地的西五味子藥材分別經(jīng)酒炙、醋炙加工后，其兩種炮制品中五味子甲素含量與生品相較并無明顯差異，說明酒炙、醋炙對西五味子中五味子甲素含量并無太大影響。而產(chǎn)自四川天全的西五味子藥材相較其它產(chǎn)地五味子甲素的含量差異較大，產(chǎn)地不同、基原不同皆是影響其含量的因素，但由于單從外觀的性狀鑒別難于將西五味子的3個基原區(qū)分開，為區(qū)分西五味子藥材優(yōu)劣，保證其臨床用藥安全有效，不同基原的西五味子中有效成分含量測定值得進(jìn)一步探究。

［1］ 四川省藥品監(jiān)督管理局.四川省中藥飲片炮制規(guī)范［M］.成都：四川人民出版社，2002：350-351.

［2］ 馬永明，耿亞.淺談南五味子［J］.中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育，2013，11（9）：103-104.

［3］ 潘新，劉霞，蔡敏之.HPLC法測定五味子中五味子甲素含量［J］.廣東化工，2007，6（34）：123-125.

［4］ 倪琳，楊錫. HPLC法同時測定生脈飲中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素［J］.中成藥，2012，34（5）：872-875.

［5］ 梁曉艷，梁旭霞，朱杰民. HPLC測定生脈飲中五味子甲素和五味子乙素的含量［J］.廣西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2010，13（3）：48-49.

［6］ 譚曉虹，王志寶，趙倩. HPLC測定南、北五味子中五味子甲素和五味子乙素的含量［J］.中成藥，2010，32（1）：155-157.

（責(zé)任編輯：胡慧玲）

Study on quality standard for prepared Wuweizi with wine and prepared Wuweizi with vinegar/

XIAO Fang， HUANG Qin-wan， TAN Mao-lan， FAN Run-yong//（School of Pharmacy， Chengdu University of Traditional Chinese Medicine； Key Laboratory of Standardization for Chinese Herbal Medicine， Ministry of Education； National Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research， Development and Utilization of Chinese Medicine Resources， Chengdu 611137， Sichuan）

Objective: To establish the quality standard for prepared Wuweizi with wine and prepared Wuweizi with vinegar. Method: TLC was used to detect deoxyschizandrinin prepared Wuweizi with wine and prepared Wuweizi with vinegar. HPLC was adopted to determine deoxyschizandrin content. Moisture， ash， acid insoluble ash and aqueous extract were also measured. Result: TLC identification had a good resolution with clear spots. According to the measurement results， moisture in prepared Wuweizi with wine and prepared Wuweizi with vinegar should be less than 13.0％ and 14.0％， respectively. The content of total ash should be less than 7.0 ％ and the content of acid insoluble ash should be less than 2.0％. The content of aqueous extract should be above 30.0％. Linear relation of deoxyschizandrin peak area integral to injection volume was good in the range of 0.3984～3.984 μg （r=1）. The average recoveries were 99.22％ with RSD of 1.08％. The contents of deoxyschizandrin were above 0.2％. Conclusion: The established standard is acceptable for quality evaluation of prepared Wuweizi with wine and prepared Wuweizi with vinegar.

Prepared Wuweizi with wine； Prepared Wuweizi with vinegar； quality standard； TLC identification； content determination； deoxyschizandrin

R

A

1674-926X（2016）03-005-04

四川省科技廳支撐計劃（編號：2012FZ0017）；成都市科技局課題（編號：12DXYB310JH）；四川省教育廳青年基金（編號：10ZC051）

成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 中藥材標(biāo)準(zhǔn)化教育部重點實驗室 四川省中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用重點實驗室省部共建國家重點實驗室培育基地，四川 成都 611137

肖芳（1991-），女，在讀碩士，主要從事中藥炮制學(xué)研究Tel：18482177688 Email：329065965@qq.com

黃勤挽（1979-），男，博士，副教授，主要從事中藥炮制學(xué)研究Tel：13982199974 Email：36190587@qq.com

2015-06-30