洪志林　柯風(fēng)蘭

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卡介苗多糖核酸與308 nm準(zhǔn)分子激光對(duì)白癜風(fēng)患者外周血Th17細(xì)胞亞群的影響*

洪志林①柯風(fēng)蘭①

【摘要】目的：探討卡介苗多糖核酸與308 nm準(zhǔn)分子激光對(duì)白癜風(fēng)患者外周血Th17細(xì)胞亞群的影響。方法：選取2013年1月-2015年1月本院皮膚性病科白癜風(fēng)患者192例作為研究對(duì)象，采用隨機(jī)數(shù)字表法將其分為研究組與對(duì)照組，每組96例，對(duì)照組采用308 nm準(zhǔn)分子激光治療，研究組在對(duì)照組基礎(chǔ)上采用卡介苗多糖核酸治療，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)外周血Th17細(xì)胞亞群變化，比較兩組臨床療效及不良反應(yīng)發(fā)生情況。結(jié)果：治療后，研究組治療總有效率明顯高于對(duì)照組，其中同組進(jìn)展期白癜風(fēng)患者治療總有效率明顯高于穩(wěn)定期患者，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。治療前，兩組外周血Th17細(xì)胞亞群比例比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；治療后，觀察組外周血Th17細(xì)胞亞群比例明顯低于治療前與對(duì)照組，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。兩組不良反應(yīng)發(fā)生率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論：308 nm準(zhǔn)分子激光對(duì)進(jìn)展期白癜風(fēng)患者的臨床療效較為顯著；卡介苗多糖核酸通過提高機(jī)體免疫功能，從而改善白癜風(fēng)患者的臨床療效，且藥物安全性較高，值得臨床推廣應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】卡介苗多糖核酸； 308 nm準(zhǔn)分子激光； 白癜風(fēng)； 外周血Th17細(xì)胞亞群

①中信惠州醫(yī)院 廣東 惠州 516006

First author’s address：Zhongxin Huizhou Hospital，Huizhou 516006，China

白癜風(fēng)是常見的皮膚性病科疾病，是一種獲得性皮膚黏膜色素脫失性皮膚病，平均發(fā)生率約為1%~2%，其主要與自身免疫系統(tǒng)有關(guān)，且與性別、年齡無明顯相關(guān)性，其中面頸部白癜風(fēng)嚴(yán)重影響患者的形象與生活質(zhì)量[1]。臨床上尚缺乏對(duì)白癜風(fēng)的特效治療手段，導(dǎo)致大部分白癜風(fēng)患者喪失治療信心。大量文獻(xiàn)證實(shí)，Th17細(xì)胞亞群參與白癜風(fēng)發(fā)生與發(fā)展的過程，通過提高機(jī)體免疫力，降低Th17細(xì)胞亞群表達(dá)對(duì)白癜風(fēng)的治療具有重要的意義[2]。目前，關(guān)于卡介苗多糖核酸與308 nm準(zhǔn)分子激光對(duì)白癜風(fēng)患者外周血Th17細(xì)胞亞群的影響研究罕見，本文就這一問題展開研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料 選取2013年1月-2015年1月本院皮膚性病科白癜風(fēng)患者192例作為研究對(duì)象，采用隨機(jī)數(shù)字表法將其分為研究組與對(duì)照組。研究組96例，其中男46例，女50例；年齡1~60歲，平均（32.15±10.25）歲；病程1個(gè)月~20年，平均（4.25±1.02）年；疾病分型：局限型40例，散在型46例，泛發(fā)型10例；疾病分期：穩(wěn)定期46例，進(jìn)展期50例；皮損面積0.5 cm×3 cm~4 cm×13 cm，平均（18.54±5.12）cm2。對(duì)照組96例，其中男48例，女48例，年齡1~60歲，平均（32.09±10.33）歲；病程2個(gè)月~21年，平均（4.33±1.07）年；疾病分型：局限型38例，散在型46例，泛發(fā)型12例；疾病分期：穩(wěn)定期50例，進(jìn)展期46例；皮損面積0.5 cm×4 cm~4 cm×14 cm，平均（18.49±5.09）cm2；兩組性別、年齡、病程、疾病分型、疾病分期及皮損面積等一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2診斷、納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1診斷標(biāo)準(zhǔn) 參照《白癜風(fēng)臨床分型及療效標(biāo)準(zhǔn)》中關(guān)于白癜風(fēng)的診斷標(biāo)準(zhǔn)：（1）后天發(fā)病，原因不明的色素脫失白斑，呈乳白色，形態(tài)大小各異；（2）白斑分布可局限于某部位或散在、泛發(fā)全身，并沿皮神經(jīng)節(jié)支配區(qū)分布；（3）根據(jù)病情程度將其分為穩(wěn)定期與進(jìn)展期。原白斑范圍未見擴(kuò)大，未見新白斑皮損出現(xiàn)者為穩(wěn)定期，白斑范圍逐漸擴(kuò)大，邊界模糊，新白斑皮損出現(xiàn)者為進(jìn)展期；（4）病程緩慢，無自覺臨床癥狀。（5）排除其他病因造成的色素脫失或色素減退造成的白斑[3]。

1.2.2納入標(biāo)準(zhǔn) 符合白癜風(fēng)的診斷標(biāo)準(zhǔn)，皮損≥2處，受累面積<20%體表面積，對(duì)本研究知情同意并簽署知情同意書。

1.2.3排除標(biāo)準(zhǔn) 合并自發(fā)色素再生史，合并嚴(yán)重心肺功能不全，嚴(yán)重肝腎功能衰竭，免疫功能低下，采用免疫抑制劑藥物治療，采用皮質(zhì)類固醇激素治療，合并糖尿病、高血壓、慢性內(nèi)科疾病，妊娠期與哺乳期婦女，對(duì)卡介苗多糖核酸、紫外線過敏，合并精神性疾病患者。

1.3方法

1.3.1治療方法 對(duì)照組采用308 nm準(zhǔn)分子激光皮膚光療儀（美國(guó)XTRACAL7000公司）照射治療，調(diào)節(jié)參數(shù)：工作氣體為氯化氙，波長(zhǎng)308 nm，光斑直徑10/20/25 mm，單脈沖能量150 mJ/cm2，脈寬60 ns，頻率200 Hz，再根據(jù)皮損反應(yīng)適當(dāng)調(diào)整照射劑量，治療2次/周，1周為1個(gè)療程，總療程10周，共20次。研究組在對(duì)照組基礎(chǔ)上采用卡介苗多糖核酸（商品名：治療用卡介苗，生產(chǎn)企業(yè)：成都生物制品研究所有限責(zé)任公司，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字S19983036，規(guī)格：1 mL/支）治療，2 mL肌注，每2天1次，總療程10周。

1.3.2檢測(cè)方法 治療前后采集新鮮抗凝外周血5 mL，采用2000 r/min密度梯度離心15 min，分離淋巴細(xì)胞，采用PBS緩沖液漂洗，采用含胎牛血清BPMI1640培養(yǎng)液重懸，滴加50 μg/L佛波酯、500μg/L離子霉素與0.67 mg/L莫能霉素于37 ℃孵育4 h，PBS緩沖液漂洗，滴加1 μg CD4-FITC抗體，4 ℃孵育0.5 h，PBS緩沖液漂洗，滴加250 μL破膜固定液，4 ℃孵育20 min，采用1 mL破膜液漂洗2次，分為3管，分別加入IL-17-PE 1 μg，室溫避光孵育0.5 h，破膜液漂洗2次，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)外周血Th17細(xì)胞亞群變化。

1.4觀察指標(biāo) 比較兩組臨床療效及不良反應(yīng)（疼痛性紅斑、眼瞼水腫、局部瘙癢等）發(fā)生情況，比較兩組不同疾病分期臨床療效的差異，比較兩組患者治療前后外周血Th17細(xì)胞亞群的變化。

1.5療效判定標(biāo)準(zhǔn) 參照中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)會(huì)關(guān)于《白癜風(fēng)臨床療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)》評(píng)定白癜風(fēng)的臨床療效，其中白斑徹底消退，100%皮損面積恢復(fù)正常膚色者評(píng)估為治愈；部分白斑消退，白斑范圍逐漸縮小，50%~99%皮損面積恢復(fù)正常膚色者評(píng)定為顯效；部分白斑消退，白斑范圍逐漸縮小，10%~49%皮損面積恢復(fù)正常膚色者評(píng)定為有效；小部分白斑消退，白斑范圍逐漸縮小，0~9%皮損面積恢復(fù)正常膚色，或白斑范圍逐漸擴(kuò)大者評(píng)定為無效，總有效率=治愈率+顯效率+有效率。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 本研究數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以（±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用Χ2檢驗(yàn)，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1兩組臨床療效比較 治療后，研究組治療總有效率明顯高于對(duì)照組，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ Χ2=9.26，P<0.05），見表1。

表1 兩組臨床療效比較 例（%）

2.2兩組不同疾病分期臨床療效比較 治療10周時(shí)，研究組進(jìn)展期患者治療總有效率明顯高于同組穩(wěn)定期患者，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ Χ2=9.38，P<0.05）；對(duì)照組進(jìn)展期患者治療總有效率明顯高于同組穩(wěn)定期患者，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ Χ2=5.34，P<0.05），見表2。

表2 兩組不同疾病分期臨床療效比較

2.3兩組治療前后外周血Th17細(xì)胞亞群比較 治療前，兩組外周血Th17細(xì)胞亞群比例比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；治療后，觀察組外周血Th17細(xì)胞亞群比例明顯低于治療前及對(duì)照組，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表3。

表3 兩組治療前后外周血Th17細(xì)胞亞群比較（±s） %

表3 兩組治療前后外周血Th17細(xì)胞亞群比較（±s） %

*與同組治療前比較，t=40.24，P<0.05

組別　治療前　治療后研究組（n=96）　4.06±0.61　1.48±0.15*對(duì)照組（n=96）　3.98±0.62　3.85±0.49 t值　0.56　45.31 P值　>0.05　<0.05

2.4兩組不良反應(yīng)發(fā)生情況比較 兩組不良反應(yīng)發(fā)生率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ Χ2=0.00，P>0.05），見表4。

表4 兩組不良反應(yīng)發(fā)生情況比較

3　討論

白癜風(fēng)是由于皮膚色素代謝障礙導(dǎo)致的疾病，該病治療難度較大，治療療程較長(zhǎng)。白癜風(fēng)的發(fā)生機(jī)制與以下因素具有密切的關(guān)系：（1）自身免疫系統(tǒng)；（2）皮膚黏膜色素細(xì)胞脫失；（3）內(nèi)分泌系統(tǒng)；（4）銅離子、酪氨酸相對(duì)缺乏；（5）遺傳；（6）藥物、精神刺激、手術(shù)刀傷、燙傷、砸傷、擦傷、碰撞等；（7）環(huán)境因素。白癜風(fēng)治療原則主要為促進(jìn)皮損處色素沉著與白斑范圍逐漸縮小，改善外觀及皮膚對(duì)光照的耐受程度[4]。白癜風(fēng)治療主要采用局部整體相結(jié)合、中西醫(yī)相結(jié)合的治療方案，其中主要包括手術(shù)治療與非手術(shù)治療。白癜風(fēng)的非手術(shù)治療方案包括窄譜中波紫外線（NB-UVB）、比較光化學(xué)療法（PUVA）及糖皮質(zhì)激素治療等[5]。308 nm準(zhǔn)分子激光具有促進(jìn)黑素細(xì)胞增殖、黏附與遷移的作用，可促進(jìn)白癜風(fēng)皮損邊緣、毛囊處黑素細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)黑素新生細(xì)胞遷移至白斑部位，促進(jìn)皮損處色素沉著與白斑范圍逐漸縮小，308 nm準(zhǔn)分子激光照射療法有助于抑制皮膚抗原提呈細(xì)胞，降低朗格漢斯細(xì)胞功能與數(shù)量，抑制免疫功能，促進(jìn)角朊細(xì)胞合成白介素，增強(qiáng)網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞及其補(bǔ)體的吞噬功能，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫效應(yīng)[6]。大量文獻(xiàn)證實(shí)，308 nm準(zhǔn)分子激光治療白癜風(fēng)患者的起效時(shí)間短、療效佳、不良反應(yīng)較低，可明顯改善白癜風(fēng)兒童與白癜風(fēng)成人患者的病情活動(dòng)程度，且治療依從性高，可明顯改善白癜風(fēng)兒童與成人患者的生活質(zhì)量[7]?？ń槊缍嗵呛怂崾强ń槊缍嗵呛怂犷愄崛∥?，其通過激活巨噬細(xì)胞，可增強(qiáng)T、B細(xì)胞介導(dǎo)的體液免疫與細(xì)胞免疫功能[8]。經(jīng)臨床研究與實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)，卡介苗多糖核酸對(duì)Th17相關(guān)因子具有重要的調(diào)節(jié)作用[9]。Th17細(xì)胞亞群及其相關(guān)因子在介導(dǎo)免疫細(xì)胞因子釋放，促進(jìn)免疫性疾病中具有重要的意義[10]。但關(guān)于卡介苗多糖核酸與308 nm準(zhǔn)分子激光對(duì)白癜風(fēng)患者外周血Th17細(xì)胞亞群的影響研究尚少。

本研究結(jié)果顯示，卡介苗多糖核酸與308 nm準(zhǔn)分子激光結(jié)合治療的總有效率由單純308 nm準(zhǔn)分子激光治療的66.67%提高至85.42%，提示卡介苗多糖核酸在白癜風(fēng)患者的治療中具有重要的價(jià)值?？ń槊缍嗵呛怂崤c308 nm準(zhǔn)分子激光結(jié)合療法或單純308 nm準(zhǔn)分子激光療法對(duì)患者進(jìn)展期治療總有效率更高，提示308 nm準(zhǔn)分子激光療法對(duì)進(jìn)展期白癜風(fēng)患者的臨床療效更佳，可能由于：（1）308 nm準(zhǔn)分子激光屬于中波紫外線，可直接誘導(dǎo)與間接誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞的凋亡，且每周1次308 nm準(zhǔn)分子激光照射治療的效果較為理想；（2）進(jìn)展期黑素細(xì)胞損傷尚未完全，且仍暴露部分的黑素細(xì)胞，而穩(wěn)定期色素脫失完全，病程較長(zhǎng)，其對(duì)308 nm準(zhǔn)分子激光照射治療敏感性均造成一定的負(fù)面影響[11-12]?？ń槊缍嗵呛怂崤c308 nm準(zhǔn)分子激光結(jié)合治療，患者外周血Th17細(xì)胞亞群比例由單純308 nm準(zhǔn)分子激光治療的（3.85±0.49）%降低至（1.48±0.15）%，揭示了卡介苗多糖核酸通過顯著下調(diào)白癜風(fēng)患者外周血Th17細(xì)胞亞群比例，從而發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)的作用，間接反映了卡介苗多糖核酸通過改善機(jī)體免疫功能，從而達(dá)到治療白癜風(fēng)的目的[13]。最后，卡介苗多糖核酸與308 nm準(zhǔn)分子激光結(jié)合治療并不增加白癜風(fēng)患者的不良反應(yīng)發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，與相關(guān)研究報(bào)道結(jié)果一致[14-15]。

綜上所述，308 nm準(zhǔn)分子激光對(duì)進(jìn)展期白癜風(fēng)患者的臨床療效較為顯著，其中卡介苗多糖核酸通過提高機(jī)體免疫功能，從而改善白癜風(fēng)患者的臨床療效，且藥物安全性較高，值得臨床推廣應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

[1]王素環(huán)，宋維芳，林炳基，等.自體表皮移植治療白癜風(fēng)120例臨床觀察及其影響因素分析[J].中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志，2015，29（6）：591-592.

[2]盛國(guó)榮，謝勇，嚴(yán)霞，等.NB-UVB聯(lián)合退白湯治療尋常型白癜風(fēng)的療效及對(duì)Th17相關(guān)因子的調(diào)節(jié)作用[J].中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志，2015，29（5）：517-520.

[3]朱龍飛，田軍，堅(jiān)哲，等.過表達(dá)NF-E2相關(guān)因子2對(duì)白癜風(fēng)黑素細(xì)胞PIG3V線粒體生物合成和功能的影響[J].中華皮膚科雜志，2015，48（6）：373-377.

[4]劉濤.臨床特征和皮膚CT特征判定白癜風(fēng)分期[J].中華皮膚科雜志，2015，48（6）：404-407.

[5]孟麗亞，王逸飛，張春敏.CO2點(diǎn)陣激光聯(lián)合308 nm準(zhǔn)分子激光治療穩(wěn)定期白癜風(fēng)的臨床觀察[J].中華皮膚科雜志，2014，47（12）：894-896.

[6]唐志銘，翟曉翔，荊夢(mèng)晴.308 nm準(zhǔn)分子激光聯(lián)合他扎羅汀凝膠治療斑塊狀銀屑病的療效觀察[J].中華皮膚科雜志，2015，48（4）：233-236.

[7]葛一平.308 nm準(zhǔn)分子激光治療成人面部節(jié)段型白癜風(fēng)的療效[J].江蘇醫(yī)藥，2015，41（8）：915-917.

[8]李建英，劉津民，曹海育，等.卡介菌多糖核酸對(duì)白癜風(fēng)的免疫調(diào)節(jié)作用[J].中華臨床醫(yī)師雜志（電子版），2015，9 （12）：136-138.

[9]陸小娟，李其林.兩種免疫調(diào)節(jié)劑對(duì)白癜風(fēng)患者細(xì)胞免疫的影響及療效[J].中華全科醫(yī)師雜志，2014，13（8）：684-686.

[10]孫曉燕，牛妍艷，張美芳，等.白癜風(fēng)患者外周血Th17/Treg細(xì)胞免疫失衡的檢測(cè)[J].中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志，2014，28 （7）：684-686.

[11]吳波，朱顏俊，瓦慶彪，等.308 nm準(zhǔn)分子激光聯(lián)合驅(qū)蟲斑鳩菊注射液治療白癜風(fēng)60例臨床觀察[J].中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志，2014，28（11）：1209-1210.

[12] Byun J W，Moon J H，Bang C Y，et al.Effectiveness of 308-nm excimer laser therapy in treating alopecia areata，determined by examining the treated sides of selected alopecic patches[J]. Dermatology，2015，231（1）：70-76.

[13]黃應(yīng)波，唐雪梅，張宇，等.復(fù)方甘草酸苷對(duì)兒童過敏性紫癜Th17/Treg細(xì)胞免疫的影響[J].重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，39（7）：990-994.

[14] Zhan L，Xiong X，Wang L.Treatment of BCG polysaccharide nucleic acid combined with CO2laser reduces Th17 cells and their related cytokines in cutaneous lesion of vitiligo patients[J]. Journal of Cellular and Molecular Immunology，2014，30（12）：1300-1303.

[15]殷現(xiàn)鵬，韓冰，郭鈺琪.卡介苗多糖核酸輔助治療白癜風(fēng)的療效及對(duì)T淋巴細(xì)胞亞群的影響[J].濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，33（3）：167-169.

*基金項(xiàng)目：惠州市科技計(jì)劃項(xiàng)目（20140810）

通信作者：洪志林

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2016.10.004

收稿日期：（2015-10-09） （本文編輯：王利）

Effect of BCG-polysaccharide Nucleic Acid and 308 nm Excimer Laser on Peripheral Blood Th17 Cell Subsets of Vitiligo Patients/HONG Zhi-lin，KE Feng-lan.//Medical Innovation of China，2016，13（10）：011-014

【Abstract】Objective：To investigate the effect of BCG-polysaccharide nucleic acid and 308 nm excimer laser on peripheral blood Th17 cell subsets of vitiligo patients.Method：192 cases of vitiligo patients in STD Dermatology of our hospital from January 2013 to January 2015 were selected as the research objects.Using the random number table method，all patients were divided into study group and control group，with 96 cases in each group.The control group was treated with 308 nm excimer laser，the study group was treated with BCG nucleic acid on the basis of the control group.Peripheral blood Th17 cell subsets were detected by flow cytometry.The clinical curative effect and the incidence of adverse reactions were compared between the two groups.Result：After treatment，the total effective rate of the study group was significantly higher than that of the control group，the total effective rate of advanced stage was significantly higher than that of stable stage in the same group，the differences werestatistically significant（P<0.05）.Before treatment，the difference in peripheral blood Th17 cell subsets between the two groups was not statistically significant（P>0.05）.After treatment，the peripheral blood Th17 cell subsets of the observation group was significantly lower than pre-therapy and that of the control group，the differences were statistically significant（P<0.05）.There was no statistically significant difference in the incidence rate of adverse reactions between the two groups（P>0.05）.Conclusion：308 nm excimer laser has more significant clinical curative effect for advanced vitiligo.BCG nucleic acid improves the clinical curative effect by improving the organism immune function for vitiligo，its drug safety is high，which is worthy of clinical application.

【Key words】BCG-polysaccharide nucleic acid； 308 nm excimer laser； Vitiligo； Peripheral blood Th17 cell subsets