麥麗萍　麥志周

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聯(lián)合檢測(cè)血漿中BIRC5、MYC的自身抗體水平在宮頸癌診斷中價(jià)值分析*

麥麗萍①麥志周②

【摘要】目的：探討聯(lián)合檢測(cè)血漿中BIRC5、MYC的自身抗體水平在宮頸癌診斷中的價(jià)值，以期尋找早期診斷宮頸癌的新型腫瘤標(biāo)志物。方法：選取2014年2月-2015年7月本院收治的宮頸癌患者91例作為宮頸癌組，另選取同期在本院體檢的86例健康女性作為對(duì)照組。采用ELISA法檢測(cè)兩組外周血中BIRC5、MYC及BIRC5與MYC混合抗原的自身抗體水平，并進(jìn)行組間比較。結(jié)果：宮頸癌組外周血中BIRC5、MYC自身抗體水平均高于對(duì)照組，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；兩組BIRC5 與MYC混合抗原的自身抗體水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；ROC分析結(jié)果顯示，BIRC5自身抗體檢測(cè)的曲線下面積（AUC）、特異性、敏感性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值依次為0.680、91.28%、21.05%、66.48%、52.49%；MYC自身抗體檢測(cè)的AUC、特異性、敏感性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值依次為0.662、89.64%、8.14%、44.65%、49.52%；BIRC5與MYC混合抗原的自身抗體水平檢測(cè)的AUC、特異性、敏感性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值依次為0.752、92.34%、28.43%、73.58%、55.50%。結(jié)論：BIRC5、MYC自身抗體均與宮頸癌具有一定的相關(guān)性，BIRC5與MYC混合抗原的自身抗體檢測(cè)診斷宮頸癌的敏感性和特異性明顯優(yōu)于單一抗原自身抗體檢測(cè)，聯(lián)合檢測(cè)可提高檢測(cè)效率。

【關(guān)鍵詞】宮頸癌； BIRC5； MYC； 混合抗原； 診斷

①?gòu)V東省佛山市順德區(qū)第一人民醫(yī)院附屬杏壇醫(yī)院 廣東佛山 528325

②廣東省佛山市第一人民醫(yī)院禪城醫(yī)院

First author’s address：Xingtan Hospital Affliated to Shunde District First People’s Hospital of Foshan City，F(xiàn)oshan 528325，China

1　資料與方法

1.1一般資料 選取2014年2月-2015年7月本院收治的宮頸癌患者91例作為宮頸癌組，年齡34~64歲，平均（50.18±5.83）歲；其中Ⅰ期44例，Ⅱ期47例。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）首次經(jīng)臨床表現(xiàn)、體征、細(xì)胞學(xué)檢查、陰道鏡檢查及病理組織學(xué)檢查確診為宮頸癌患者，國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO）分期為Ⅰ~Ⅱ期；（2）未曾接受過(guò)化學(xué)治療、放射治療等抗腫瘤治療，無(wú)宮頸手術(shù)史。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并自身免疫性甲狀腺疾病、強(qiáng)制性脊柱炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等嚴(yán)重自身免疫系統(tǒng)疾病史或合并其他惡性腫瘤；（2）器官移植，需長(zhǎng)期應(yīng)用免疫抑制劑；（3）有嚴(yán)重宮頸炎癥性疾病。另選取同期在本院體檢的86例健康女性作為對(duì)照組，年齡31~62歲，平均（49.87±6.05）歲。兩組一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批，所有納入對(duì)象均對(duì)本研究相關(guān)事項(xiàng)了解，并簽署書(shū)面知情同意書(shū)。

1.2方法 所有研究對(duì)象均于清晨無(wú)菌采集空腹肘靜脈血2~3 mL，于室溫下靜置，待血細(xì)胞和血漿自然分層后離心（2500 r/min）10 min，取上層清液于離心管中，并置于-20 ℃冰箱中保存待測(cè)。所有檢測(cè)操作均于冰浴條件下進(jìn)行。將新合成的抗原采用抗原包被緩沖液稀釋至適宜濃度（BIRC5 10 μg/mL，MYC 10 μg/mL，BIRC5與MYC混合抗原15 μg/mL，對(duì)照抗原20 μg/mL），按照棋盤(pán)法設(shè)計(jì)96孔酶標(biāo)板，每孔加入100 μL的抗原工作液。采用封板膜將96孔酶標(biāo)板封閉，搖勻后置于4 ℃條件下孵育過(guò)夜。摘除封板膜，將包被緩沖液和殘留液體棄掉后置于自動(dòng)洗板機(jī)中進(jìn)行洗滌。每孔加入100 μL含有血漿樣本的分析緩沖液（血漿樣本：分析緩沖液=1∶200），封板膜封閉，搖勻后置于20 ℃條件下孵育1.5 h。摘除封板膜，將分析緩沖液和殘留液體棄掉后置于自動(dòng)洗板機(jī)中進(jìn)行洗滌。每孔加入100 μL稀釋于分析緩沖液的辣根過(guò)氧化物標(biāo)記的羊抗人抗體（酶標(biāo)抗體：分析緩沖液=1∶25000），封板膜封閉，搖勻后置于20 ℃條件下孵育1.0 h。摘除封板膜，將分析緩沖液和殘留液體棄掉后置于自動(dòng)洗板機(jī)中進(jìn)行洗滌。每孔加入100 μL的TMB顯色液，搖勻后置于25 ℃、避光條件下孵育20 min。每孔加入50 μL硫酸（10.9%）終止顯色反應(yīng)。利用酶標(biāo)儀檢測(cè)光密度值，計(jì)算抗原與抗體的特異結(jié)合指數(shù)（SBI），即血漿中抗原自身抗體水平。以健康對(duì)照組第95百分位數(shù)的SBI值作為陽(yáng)性閾值，統(tǒng)計(jì)陽(yáng)性率。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)均經(jīng)SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料用（±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用率（%）表示，比較采用Χ2檢驗(yàn)，采用受試者工作曲線（ROC曲線）分析抗原自身抗體水平檢測(cè)價(jià)值，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1兩組外周血中BIRC5、MYC及BIRC5與MYC混合抗原自身抗體水平比較 宮頸癌組外周血中BIRC5、MYC自身抗體水平均高于對(duì)照組，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；兩組BIRC5與MYC混合抗原的自身抗體水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見(jiàn)表1。

表1 兩組外周血中BIRC5、MYC及BIRC5與MYC混合抗原自身抗體水平比較（±s）

表1 兩組外周血中BIRC5、MYC及BIRC5與MYC混合抗原自身抗體水平比較（±s）

組別　BIRC5　MYC　BIRC5+MYC宮頸癌組（n=91）1.301±0.192　1.400±0.241　0.872±0.098對(duì)照組（n=86）　1.172±0.211　1.288±0.269　0.857±0.087 t值　4.258　2.921　1.075 P值　0.001　0.006　0.089

2.2血漿中BIRC5、MYC及BIRC5與MYC混合抗原自身抗體檢測(cè)診斷宮頸癌的ROC曲線分析 ROC分析結(jié)果顯示，BIRC5與MYC混合抗原的自身抗體檢測(cè)診斷宮頸癌的敏感性和特異性明顯優(yōu)于單一抗原自身抗體檢測(cè)，見(jiàn)表2及圖1。

表2 血漿中BIRC5、MYC及BIRC5與MYC混合抗原自身抗體檢測(cè)診斷宮頸癌的ROC分析

圖1 血漿中BIRC5、MYC及BIRC5與MYC混合抗原身抗體檢測(cè)診斷宮頸癌的ROC曲線

3　討論

研究證實(shí)，腫瘤相關(guān)抗原可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生自身抗體，可否以腫瘤相關(guān)抗原的自身抗體作為腫瘤標(biāo)志物已成為臨床研究熱點(diǎn)之一[4-6]。BIRC5是一種癌基因，在正常生理狀態(tài)下，其表達(dá)受P53抑制，故當(dāng)P53發(fā)生突變時(shí)，其表達(dá)水平異常升高，進(jìn)而通過(guò)阻斷細(xì)胞凋亡信號(hào)通路，促進(jìn)細(xì)胞增殖和細(xì)胞轉(zhuǎn)化，最終導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生[7-9]。MYC是一種定位于人體的第8號(hào)染色體上的原癌基因，編碼與細(xì)胞增殖相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子，其異常表達(dá)可導(dǎo)致細(xì)胞增殖和凋亡調(diào)控紊亂，導(dǎo)致細(xì)胞過(guò)度增殖，最終導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[10-12]。

本研究在傳統(tǒng)的ELISA法的基礎(chǔ)上對(duì)腫瘤相關(guān)抗原自身抗體檢測(cè)方法進(jìn)行改進(jìn)，通過(guò)導(dǎo)入與人類無(wú)同源性的山羊抗原作為對(duì)照抗原，以重復(fù)孔OD值的離散度和質(zhì)控血的OD值判斷結(jié)果的穩(wěn)定性，同時(shí)優(yōu)化結(jié)果評(píng)價(jià)公式，可有效降低非特異性信號(hào)的干擾，提高外周血BIRC5、MYC及BIRC5 與MYC混合抗原的自身抗體的檢測(cè)效率。本研究結(jié)果顯示宮頸癌患者外周血中BIRC5、MYC自身抗體水平明顯高于健康女性，而B(niǎo)IRC5與MYC混合抗原的自身抗體水平無(wú)明顯差異，與國(guó)外多項(xiàng)研究結(jié)果一致[13-15]。利用ROC曲線分析外周血BIRC5、MYC及BIRC5與MYC混合抗原的自身抗體檢測(cè)在宮頸癌診斷中的應(yīng)用價(jià)值，結(jié)果顯示宮頸癌BIRC5、 MYC及BIRC5與MYC混合抗原的自身抗體檢測(cè)的AUC分別為0.680、0.662、0.752，且BIRC5、BIRC5與MYC混合抗原的自身抗體檢測(cè)的特異性、敏感性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值尚可，與自身抗體檢測(cè)一般水平相匹配，故BIRC5、BIRC5與MYC混合抗原的自身抗體檢測(cè)均具備一定的宮頸癌診斷價(jià)值，而MYC自身抗體檢測(cè)的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值均較低，故其在宮頸癌診斷中有待進(jìn)一步改善和提高。此外，本研究結(jié)果表明，BIRC5與MYC混合抗原的自身抗體檢測(cè)宮頸癌的敏感性和特異性均明顯優(yōu)于單一抗原自身抗體檢測(cè)，提示聯(lián)合檢測(cè)BIRC5、MYC自身抗體可提高診斷效率，利于宮頸癌早期診斷。

綜上所述，BIRC5、MYC自身抗體均與宮頸癌具有一定的相關(guān)性，BIRC5與MYC混合抗原自身抗體檢測(cè)宮頸癌的敏感性和特異性明顯優(yōu)于單一抗原自身抗體檢測(cè)，聯(lián)合檢測(cè)可提高檢測(cè)效率。由于血漿成分復(fù)雜，未能完全避免非特異性交叉結(jié)合，仍存在非特異性干擾，且本研究樣本量較少，導(dǎo)致腫瘤相關(guān)抗原自身抗體的檢測(cè)效率較低，故在臨床工作中仍需總結(jié)經(jīng)驗(yàn)，進(jìn)一步優(yōu)化ELISA法，以改善并提高特異性結(jié)合的信號(hào)強(qiáng)度，同時(shí)增加樣本數(shù)量，提高檢測(cè)效率。

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*基金項(xiàng)目：佛山市醫(yī)學(xué)類科技攻關(guān)項(xiàng)目（201208229）

通信作者：麥麗萍

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2016.10.003宮頸癌是女性較為常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，具有發(fā)病率高、復(fù)發(fā)率高和預(yù)后不佳等特點(diǎn)，近年來(lái)其發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，已成為嚴(yán)重威脅女性身心健康的重要疾病。早期宮頸癌經(jīng)有效治療后可完全治愈，而隨著疾病進(jìn)展，其治愈率逐漸降低，故宮頸癌早期診斷并予以有效治療對(duì)提高宮頸癌治愈率具有十分重要的臨床意義[1]。近年來(lái)，甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原（CEA）等多種腫瘤相關(guān)抗原已逐漸應(yīng)用于惡性腫瘤早期診斷與預(yù)測(cè)中，但臨床實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)上述抗原在惡性腫瘤早期診斷和預(yù)測(cè)中缺乏特異性和敏感性[2]。有研究表明，腫瘤相關(guān)抗原自身抗體的檢測(cè)具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、檢測(cè)速度快、操作簡(jiǎn)便等特點(diǎn)[3]。故本研究采用ELISA法檢測(cè)宮頸癌患者和健康女性外周血中BIRC5、MYC 及BIRC5與MYC混合抗原的自身抗體水平，分析三者在早期宮頸癌診斷中的檢測(cè)效果，以期尋找早期診斷宮頸癌的新型腫瘤標(biāo)志物，現(xiàn)報(bào)道如下。

收稿日期：（2015-11-27） （本文編輯：王利）

Value Analysis of Combined Detection of BIRC5，MYC Autoantibody Levels in the Diagnosis of Cervical Cancer/MAI Li-ping，MAI Zhi-zhou.//Medical Innovation of China，2016，13（10）：008-011

【Abstract】Objective：To discuss the combined detection of BIRC5，MYC autoantibody levels in the diagnosis of cervical cancer in order to find a new type of tumor markers for early diagnosis of cervical cancer. Method：91 cases of patients with cervical cancer in our hospital from February 2014 to July 2015 were selected as cervical cancer group，and 86 cases of healthy women who took physical examination in our hospital at the same period were selected as control group.The plasma levels of BIRC5，MYC and BIRC5 mixed MYC（mixed antigen）autoantibody were detected and compared between the two groups.Result：Compared with the control group，the plasma levels of BIRC5，MYC autoantibody of the cervical cancer group were higher，the differences were statistically significant（P<0.05），and there was no statistically significant difference in the autoantibody level of mixed antigen between the two groups（P>0.05）.ROC analysis showed that the AUC，specificity，sensitivity，positive predictive value，negative predictive value of BIRC5 autoantibody were 0.680，91.28%，21.05%，66.48%，52.49%，MYC autoantibody were 0.662，89.64%，8.14%，44.65%，49.52% and mixed antigen were 0.752，92.34%，28.43%，73.58%，55.50%.Conclusion：BIRC5，MYC autoantibody are correlated with cervical cancer.Combined detection of BIRC5，MYC autoantibody in the diagnosis of cervical cancer has better specificity and sensitivity than a single antigen，it can improve detection efficiency.

【Key words】Cervical cancer； BIRC5； MYC； Mixed antigen； Diagnosis