黃鳳蕓　靳朝東　陳曉雨

[摘 要] 目的：建立伊潘立酮起始原料中1，2-二氯乙烷殘留溶劑的測(cè)定方法。方法：采用頂空進(jìn)樣毛細(xì)管氣相色譜法。色譜柱：Agilent DB-624毛細(xì)管柱（30m×0.53mm×3.0?m）；程序升溫；檢測(cè)器：電子捕獲檢測(cè)器（ECD），溫度：250℃；恒壓：2.5psi；載氣為高純氮?dú)?。結(jié)果：1，2-二氯乙烷在0.55～2.00μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.9999），平均回收率為101.1%；定量限為2.75ppm；檢測(cè)限為0.75ppm。結(jié)論：建立的方法操作簡(jiǎn)便、靈敏度高，結(jié)果準(zhǔn)確，可有效檢測(cè)伊潘立酮起始原料中一類溶劑1，2-二氯乙烷的殘留量。

[關(guān)鍵詞] 伊潘立酮起始原料；1，2-二氯乙烷；頂空氣相色譜法

中圖分類號(hào)：O657 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：2095-5200（2016）03-067-03

[Abstract] Objective： To establish the method for the determination of 1，2-dichloroethane in iloperidonestarting material. Methods： Headspace capillary gas chromatography. The determination was performed on Agilent DB-624 capillary column by temperature programming.The temperature of electron capture detector was set at 250℃，steady pressure was set at 2.5psiand high purity N2was used as carrier gas. Results： The good linear range of 1，2-dichloroethane organic solvent had been obtained at 0.55μg / ml ～ 2.00μg / ml concentration range（r=0.9999）with average recovery of 101.1%.The limit of quantification was2.75ppm. The limit of detection was0.75ppm. Conclusion： The established method is simple， sensitive， accurate，and it can be effectively used in the determination of 1，2-dichloroethanein iloperidonestarting material.

[Key words] Iloperidonestarting material；1，2-dichloroethane；headspace gas chromatography

伊潘立酮（Iloperidone）為口服非典型精神抑制藥物，是5-羥色胺、多巴胺D2受體拮抗劑，能夠明顯減輕精神分裂患者陽(yáng)性和陰性癥狀[1-3]且副作用少。伊潘立酮起始原料在合成過(guò)程中使用了鹵代烴1，2-二氯乙烷（CH2ClCH2Cl）[4-8]，其屬于一類有機(jī)溶劑，有劇毒，對(duì)人體健康危害較大，因此在制訂質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)必須考察該起始原料中1，2-二氯乙烷殘留問(wèn)題。按照2010年版《中國(guó)藥典》（二部）附錄Ⅷ P殘留溶劑測(cè)定方法[9]和人用藥品注冊(cè)技術(shù)要求國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)（ICH）[10]制定的相關(guān)要求，本文采用頂空氣相色譜法對(duì)其進(jìn)行測(cè)定，并對(duì)測(cè)定方法進(jìn)行了驗(yàn)證，結(jié)果表明本文建立方法操作簡(jiǎn)便、靈敏度高，結(jié)果準(zhǔn)確，從而為伊潘立酮質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制訂提供依據(jù)。

1 儀器試劑

Agilent6890N，Agilent7890A氣相色譜儀（美國(guó)Agilent 公司）；Agilent 7694E自動(dòng)頂空進(jìn)樣器（美國(guó)Agilent 公司）；電子捕獲檢測(cè)器（ECD）；純水氫氣發(fā)生器（濟(jì)南浩偉實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）；HV-3靜音無(wú)油空壓機(jī)（濟(jì)南浩偉實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）。

伊潘立酮起始原料（天津藥物研究院，自制，批號(hào)：080306，090107，含量>99.50%）；

1，2-二氯乙烷，分析純（天津市化學(xué)試劑二廠，含量：>99.0%）；N，N-二甲基甲酰胺，分析純（天津市康科德科技有限公司，含量：>99.0%）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent DB-624毛細(xì)管柱（30m×0.53mm ×3.0?m）；升溫程序：80℃保持20min，以100℃/min速率升溫至200℃，保持5min；電子捕獲檢測(cè)器，檢測(cè)器溫度：250℃；載氣：高純N2，恒壓：2.5psi；進(jìn)樣口溫度：250℃，分流比：1∶1。采用頂空進(jìn)樣法測(cè)定，頂空平衡溫度為120℃，平衡時(shí)間為15min，進(jìn)樣量：3mL。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品貯備溶液 精密稱取1，2-二氯乙烷2.0mg置于盛有適量N，N-二甲基甲酰胺200mL容量瓶中，加入N，N-二甲基甲酰胺溶液稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備溶液。

2.2.2 對(duì)照品溶液 精密量取上述對(duì)照品貯備溶液10mL，置于100mL容量瓶中，加入N，N-二甲基甲酰胺溶液稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液。

2.2.3 空白溶液 精密量取N，N-二甲基甲酰胺2mL置于頂空進(jìn)樣瓶中，加蓋密封，作為空白溶液。

2.2.4 供試品溶液 精密稱取伊潘立酮起始原料樣品約400mg置于頂空進(jìn)樣瓶中，加入2mL的N，N-二甲基甲酰胺溶液，溶解密封，作為供試品溶液。

3 方法學(xué)驗(yàn)證

3.1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

在2.1項(xiàng)色譜條件下，取對(duì)照品溶液（2.2.2）進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，對(duì)照品溶劑色譜圖見圖1A。結(jié)果表明與相鄰溶劑峰（6.155min）之間分離度大于1.5，符合分離要求。

3.2 空白干擾試驗(yàn)

在2.1項(xiàng)色譜條件下，取空白溶液進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，空白溶劑色譜圖見圖1B。結(jié)果表明空白溶劑對(duì)樣品測(cè)定無(wú)干擾，符合溶劑要求。

3.3 定量限試驗(yàn)

取2.2.1項(xiàng)下對(duì)照品溶液用N，N-二甲基甲酰胺逐步稀釋成一系列低濃度溶液，分別取2mL，置于頂空進(jìn)樣瓶中，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖。將信噪比S/N約為10時(shí)相應(yīng)溶液確定為定量限溶液，在該濃度水平下重復(fù)測(cè)定6次，6次所得色譜圖溶劑峰面積RSD值小于10%，結(jié)果見表1。

3.4 檢測(cè)限試驗(yàn)

取定量限濃度溶液用N，N-二甲基甲酰胺逐步稀釋成一系列低濃度溶液，分別取2mL，置于頂空進(jìn)樣瓶中，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖。信噪比S/N約為3相應(yīng)溶液確定為檢測(cè)限溶液，結(jié)果見表1。

3.5 線性關(guān)系及范圍

分別精密量取對(duì)照品貯備溶液（2.2.1）0.80mL、1.00mL、1.20mL、1.50mL、2.00mL，置于10mL量瓶中，加入N，N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻。另外取定量限溶液作為最低濃度溶液。各取上述溶液2mL，置于頂空進(jìn)樣瓶中，按2.1項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣。以1，2-二氯乙烷質(zhì)量濃度（c）為橫坐標(biāo)、峰面積（A）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其線性關(guān)系見表2。

表2 1，2-二氯乙烷線性關(guān)系試驗(yàn)結(jié)果

殘留溶劑 線性范圍（μg/ml） 線性方程 相關(guān)系數(shù)（r）

1，2-二氯乙烷 0.55～2.00 A=100.28c-0.3308 0.9999

由表2可知，1，2-二氯乙烷在0.55～2.00μg/mL濃度范圍內(nèi)，與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系，表明該方法線性關(guān)系良好。

3.6 精密度試驗(yàn)

3.6.1 重復(fù)性試驗(yàn) 精密量取對(duì)照品溶液2mL至10mL頂空進(jìn)樣瓶中，平行6份，密封。按2.1項(xiàng)下色譜條件，進(jìn)樣，記錄色譜圖，結(jié)果峰面積RSD為1.56%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

3.6.2 中間精密度試驗(yàn) 精密量取對(duì)照品溶液2mL至10mL頂空進(jìn)樣瓶中，平行6份，密封。第二天由另一操作人員在Agilent7890A氣相色譜儀上進(jìn)行試驗(yàn)，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖。結(jié)果峰面積RSD為1.13%（n=12），表明方法中間精密度良好。

3.7 回收率試驗(yàn)

精密量取對(duì)照品貯備溶液4mL、5mL、6mL分別至50mL容量瓶中，用N，N-二甲基甲酰胺溶液稀釋至刻度，分別得對(duì)照品溶液濃度80%、100%、120%溶液。精密稱取樣品約（批號(hào)：090107）400mg至10mL頂空進(jìn)樣瓶中，共11份，其中2份加入2mL N，N-二甲基甲酰胺溶液溶解密封，作為供試品溶液。其余9份加入以上三種濃度溶液各2mL，各平行3份，作為加樣供試品溶液。以2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液作為對(duì)照，按2.1項(xiàng)下色譜條件，分別進(jìn)樣，計(jì)算回收率，1，2-二氯乙烷平均回收率為101.1%，回收率RSD為3.16%?？芍?，2-二氯乙烷回收率符合要求，表明方法準(zhǔn)確度良好。

3.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密量取對(duì)照品溶液2mL至10mL頂空進(jìn)樣瓶中，在不同時(shí)間點(diǎn)，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖。結(jié)果在75h內(nèi)峰面積RSD為1.75%，表明1，2-二氯乙烷在N，N-二甲基甲酰胺溶液中穩(wěn)定。

3.9 耐用性試驗(yàn)

精密量取對(duì)照品溶液2mL至10mL頂空進(jìn)樣瓶中，平行18份，依據(jù)方法色譜條件，對(duì)壓力（±0.1psi）、初始柱溫（±2℃）、頂空平衡溫度（±2℃）及平衡時(shí)間（±1min）進(jìn)行微小改變，在初始色譜條件及各變動(dòng)條件下分別進(jìn)樣，每個(gè)條件下各進(jìn)樣2份，記錄色譜圖。結(jié)果在壓力各個(gè)條件下，峰面積RSD為4.19%；初始柱溫各個(gè)條件下，峰面積RSD為3.40%；頂空平衡溫度各個(gè)條件下，峰面積RSD為2.96%；頂空平衡時(shí)間各個(gè)條件下，峰面積RSD為4.02%。說(shuō)明該方法耐用性良好。

3.10 樣品測(cè)定

精密量取對(duì)照品溶液2mL于10mL頂空瓶中，平行2份。稱取2批樣品約400mg于10mL頂空瓶中，加入2mL N，N-二甲基甲酰胺溶液，溶解密封，各平行2份。按2.1項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果見表3。

4 討論

測(cè)定藥物中殘留溶劑對(duì)于控制藥品質(zhì)量、保證用藥安全具有重要意義。用本文建立氣相色譜法檢測(cè)藥品中殘留溶劑，結(jié)果完全符合2010年版《中國(guó)藥典》（二部）附錄Ⅷ P中有機(jī)溶劑殘留量測(cè)定要求[9]。

4.1 檢測(cè)器選擇

使用電子捕獲檢測(cè)器和氫火焰離子化檢測(cè)器均可檢測(cè)1，2-二氯乙烷。相比而言，電子捕獲檢測(cè)器對(duì)于含有鹵素1，2-二氯乙烷響應(yīng)值更高，便于對(duì)樣品中微量溶劑準(zhǔn)確測(cè)定。

4.2 溶劑選擇

伊潘立酮起始原料在二甲基亞砜和N，N-二甲基甲酰胺中溶解性均較好，但是伊潘立酮起始原料與二甲基亞砜會(huì)發(fā)生反應(yīng)，生成未知雜質(zhì)峰，故不選用。在本色譜條件下N，N-二甲基甲酰胺出峰與1，2-二氯乙烷峰互不干擾，而且1，2-二氯乙烷在N，N-二甲基甲酰胺中能互相溶解。所以選擇N，N-二甲基酰胺作溶劑。

4.3 頂空平衡條件選擇

頂空平衡溫度120℃和130℃相比，峰面積基本不再改變，因此選用頂空瓶加熱（平衡）溫度為120℃；并對(duì)頂空平衡時(shí)間進(jìn)行篩選，結(jié)果發(fā)現(xiàn)平衡時(shí)間30min與15min相比，峰面積基本不再增加，表明溶液在15min時(shí)氣-液兩相已達(dá)到平衡。因此選擇在平衡溫度120℃條件下平衡15min。

4.4 柱溫選擇

分別選擇柱溫為80℃、100℃進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果顯示在100℃時(shí)，1，2-二氯乙烷與空白溶液中4.9min雜質(zhì)峰未分開，故選擇80℃作為初始溫度。

經(jīng)過(guò)驗(yàn)證，建立方法定量限、檢測(cè)限、精密度、線性及范圍、回收率、穩(wěn)定性、耐用性等試驗(yàn)結(jié)果均較好，能夠準(zhǔn)確地檢測(cè)出伊潘立酮起始原料中殘留1，2-二氯乙烷，對(duì)于保障藥品質(zhì)量及用藥安全具有重要意義。

參 考 文 獻(xiàn)

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