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乳腺癌腫大腋窩淋巴結(jié)中BCSCs相關(guān)基因表達(dá)與腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的關(guān)系

2016-06-20 07:31:45余天霧龔建平
重慶醫(yī)學(xué) 2016年9期
關(guān)鍵詞:乳腺腫瘤干細(xì)胞

余天霧,龔建平,郭 丹,周 健

(1.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬永川醫(yī)院普外3科 402160;2.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二臨床學(xué)院肝膽外科 400010;3.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二臨床學(xué)院三腺外科 400010)

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乳腺癌腫大腋窩淋巴結(jié)中BCSCs相關(guān)基因表達(dá)與腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的關(guān)系

余天霧1,龔建平2△,郭丹3,周健1

(1.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬永川醫(yī)院普外3科402160;2.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二臨床學(xué)院肝膽外科400010;3.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二臨床學(xué)院三腺外科400010)

[摘要]目的探索乳腺癌干細(xì)胞(BCSCs)相關(guān)基因 CD44、Twist1、OCT4在乳腺癌患者癌組織、腋窩腫大淋巴結(jié)中的表達(dá)與乳腺癌轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)的關(guān)系。方法以免疫組化法和組織免疫熒光聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)分別檢測(cè)乳腺癌患者癌組織、腋窩淋巴結(jié)中BCSCs相關(guān)因子CD44、CD24、Twist1和OCT4的基因和抗原表達(dá)。結(jié)果在術(shù)前和術(shù)中確診為乳腺癌的14例患者中均有癌細(xì)胞腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。免疫組化法測(cè)得乳腺癌癌組織、腋窩腫大淋巴結(jié)BCSCs相關(guān)因子CD44、Twist1和OCT4抗原陽性過表達(dá),而CD24呈低表達(dá);RT-PCR檢測(cè)乳腺癌組織、腋窩淋巴結(jié)中BCSCs相關(guān)因子CD44、Twist1和OCT4的基因表達(dá)增強(qiáng)(P<0.05),CD24基因低表達(dá)(P>0.05)。結(jié)論乳腺癌伴腋窩淋巴結(jié)腫大者BCSCs相關(guān)因子CD44、Twist1和OCT4的基因、抗原表達(dá)明顯增高,可能表明BCSCs相關(guān)因子與乳腺癌細(xì)胞易早期轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)有關(guān)。

[關(guān)鍵詞]乳腺腫瘤;干細(xì)胞;CD44;Twist1;OCT4

乳腺癌標(biāo)本或乳腺腫瘤細(xì)胞系中乳腺癌干細(xì)胞(BCSCs)的鑒別主要是基于腫瘤細(xì)胞表面的分子表型如CD44+CD24-/low或ALDH+。除了CD44,與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)有關(guān)的因素還包括BCSCs 的其他相關(guān)基因的過表達(dá),如OCT4和Twist1。在腫瘤細(xì)胞中或表達(dá)OCT4的細(xì)胞株中像腫瘤干細(xì)胞樣的細(xì)胞只是很少的一部分,它是轉(zhuǎn)錄因子POU家族中的一個(gè),在胚胎干細(xì)胞中維持多能和增殖的作用。正常乳腺組織的OCT4的過度轉(zhuǎn)導(dǎo)作用導(dǎo)致?lián)碛姓T發(fā)腫瘤和腫瘤侵襲能力的細(xì)胞系產(chǎn)生。臨床研究表明,與低級(jí)別和OCT4低表達(dá)的腫瘤相比,腫瘤干細(xì)胞分子OCT4過表達(dá)的乳腺腫瘤與病情進(jìn)一步惡化、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和生存期更短密切相關(guān)[1]。具有螺旋-環(huán)-螺旋基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)錄因子Twist1已被報(bào)道在腫瘤細(xì)胞血液播散、轉(zhuǎn)移方面有強(qiáng)大的促進(jìn)作用,也為臨床的研究、有效的治療干預(yù)提供了理想的標(biāo)靶。Twist1能促使細(xì)胞的表皮間質(zhì)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),能使癌細(xì)胞之間失去細(xì)胞黏附和腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移[2]。對(duì)于上皮惡性腫瘤來說,EMT是癌細(xì)胞血液播散的關(guān)鍵事件[3],同時(shí)認(rèn)為它有助于腫瘤干細(xì)胞分子表型的形成[4]。尤其是EMT促進(jìn)了癌細(xì)胞從原發(fā)灶脫離并且通過喪失細(xì)胞極性和黏附能力來促進(jìn)癌細(xì)胞的遷徙[5]。進(jìn)一步闡明Twist1促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移的機(jī)制和Twist1功能調(diào)節(jié)子的識(shí)別有助于制訂出抑制EMT和腫瘤轉(zhuǎn)移的新策略。乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(lymph nodes metastasis,LNM)表明淋巴結(jié)內(nèi)含有侵襲力強(qiáng)的分子表型的癌細(xì)胞而且EMT調(diào)節(jié)子的水平表達(dá)上調(diào)[6]。試驗(yàn)?zāi)P吞峁┑淖C據(jù)進(jìn)一步解釋了原發(fā)腫瘤具有發(fā)展到腫瘤細(xì)胞播散和促進(jìn)生長(zhǎng)因子表達(dá)增加的可能。因而,LNM可以作為原發(fā)性乳腺腫瘤侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移潛能的替代性分子標(biāo)志[6]。目前BCSCs在乳腺癌患者腋窩淋巴結(jié)、血液循環(huán)和骨髓存在情況與乳腺癌轉(zhuǎn)移的關(guān)系所知甚少,而且缺乏有效的檢測(cè)方法。本課題擬以BCSCs為細(xì)胞平臺(tái),CD44、Twist1、OCT4干細(xì)胞基因表達(dá)為BCSCs檢測(cè)依據(jù),以免疫熒光聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)CD44、Twist1、OCT4干細(xì)胞基因的表達(dá),初步探索BCSCs與乳腺癌復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的相關(guān)性。

1材料與方法

1.1材料本研究選取14例2013年乳腺癌術(shù)后患者,病理診斷明確。14例均為女性,年齡38~69歲,中位年齡53.5歲。本院乳腺癌患者術(shù)中切下的乳腺癌組織、腫大腋窩淋巴結(jié)(14例)均經(jīng)病理檢查結(jié)果證實(shí);所有這些操作均遵守科學(xué)實(shí)驗(yàn)倫理道德委員會(huì)管理章程。

1.2試劑抗體CD44、CD24、Twist1、OCT4購于Santa公司,RT-PCR試劑盒、CD44、CD24、Twist1及OCT4 primer購于TakaRa公司;免疫熒光二抗抗體(驢抗兔IgG-FITC和羊抗兔PE抗體購于SA (USA)公司;磷酸鹽緩沖液(PBS,0.01 mol/L,pH7.4)購于南京生物試劑公司。

1.3方法

1.3.1免疫熒光和激光共聚焦操作過程將手術(shù)中取下的乳腺癌灶組織、腋窩淋巴結(jié)、正常乳腺組織進(jìn)行脫水、冰凍切片固后定于載玻片。PBS浸洗切片3 min后滴加3% H2O2及山羊血清封閉組織,在濕盒中37 ℃封閉15 min(室溫30 min也可)。再滴加CD44抗體(以0.01 mol/L,pH7.4的PBS稀釋1∶100)覆蓋標(biāo)本切片。置濕盒中4 ℃孵育過夜(37 ℃ 1~2 h許),再用PBS浸洗3 min,重復(fù)5次,洗去一抗后濾紙擦去標(biāo)本液體。滴加熒光二抗置濕盒中,37 ℃避光孵育1 h,再以PBS浸洗3 min,反復(fù)5次洗去二抗。以50%甘油封片后立即在熒光顯微鏡下觀察。以同樣方法操作CD24、Twist1、OCT4免疫熒光激光共聚焦檢查。

1.3.2RT-PCR檢測(cè)乳腺癌灶組織、腋窩淋巴結(jié)、正常乳腺組織CD44、CD24、Twist1、OCT4的基因表達(dá)先以超聲波碎掉冰凍的乳腺組織、乳腺癌組織和腋窩淋巴結(jié)。再用Trizol提取總RNA,紫外分光光度計(jì)檢測(cè)質(zhì)量與含量。采用TaKaRa公司反轉(zhuǎn)錄試劑盒,嚴(yán)格按照試劑盒操作說明反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA。CD44:5′-GCC CAA TGC CTT TGA TGG ACC-3′ (Sense primer),3′-GCA GGG ATT CTG TCT GTG CTG-5′ (Anti-sense primer);CD24:5′-ATG GGC AGA GCA ATG GTG GCC A-3′(Sense primer),3′-TCA AGA GAA GCA CCA GAG TGA GA-5′ (Anti-sense primer);Twist1:5′-CAA GAA GTC TGC GGG CTG TG-3′(Sense primer),5′-TCG TTC AGC GAC TGG GTG C-3′(Anti-sense primer);OCT4:5′-CAA ACG ACC ATC TGC CGC T-3′(Sense primer),5′-CAG GTT GCC TCT CAC TCG GTT-3′(Anti-sense primer)。退火條件:56 ℃。常規(guī)PCR 操作,10 g/L瓊脂糖凝膠電泳,Alpha Innotech Coporation凝膠成像系統(tǒng)觀察并拍照。

2結(jié)果

2.1臨床病理資料本研究共收集了14例原發(fā)性侵襲性乳腺癌患者,每例腫瘤標(biāo)本均經(jīng)有經(jīng)驗(yàn)的病理醫(yī)生確認(rèn),每例患者均經(jīng)國(guó)際抗癌協(xié)會(huì)TNM標(biāo)準(zhǔn)分級(jí)。乳腺腫瘤小于或等于2 cm占42.8%(6例),腫瘤大于2 cm占57.2% (8例)。根據(jù)Elston和 Ellis方法將腫瘤標(biāo)本行組織學(xué)分級(jí):1~2級(jí)占42.8%(6例),3級(jí)占57.2%(8例);在所有腫瘤標(biāo)本中11例為侵襲性導(dǎo)管癌(IDC),而其余的3例為髓樣癌或乳腺小葉癌。為了便于分析資料,筆者還收集了患者標(biāo)本的部分免疫組化指標(biāo)如孕激素受體(PR)、雌激素受體(ER)、人表皮生長(zhǎng)因子受體-2(HER2)、CEA和BCA225。當(dāng)10%的細(xì)胞核陽性表達(dá)時(shí)判定為PR或ER過表達(dá)。根據(jù)Herceptest評(píng)分系統(tǒng)使用單克隆抗體對(duì)HER2進(jìn)行評(píng)分。0:無細(xì)胞膜反應(yīng)或不足10%細(xì)胞有反應(yīng);1:超過10%細(xì)胞存在不全性細(xì)胞膜反應(yīng);2:超過10%細(xì)胞有弱至中等強(qiáng)度的完全包膜反應(yīng);3:超過10%細(xì)胞強(qiáng)烈的完全包膜反應(yīng)。14例中有12例BCA225血清抗原高于75 μg/L,2例血清抗原低于75 μg/L。有11例患者CEA血清抗原高于7 ng/L,3例患者CEA血清抗原低于7 ng/L。

A:正常乳腺組織中的CD44抗原;B:乳腺癌組織中的CD44抗原;C:轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中的CD44抗原;D、E:RT-PCR檢測(cè)。

圖1CD44 在鄰近正常的乳腺組織、乳腺癌組織和轉(zhuǎn)移的腋窩淋巴結(jié)中的表達(dá)

A:正常乳腺組織中的CD24抗原;B:乳腺癌組織中的CD24抗原;C:轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中的CD24抗原;D、E:RT-PCR檢測(cè)。

圖2CD24在鄰近正常的乳腺組織、乳腺癌組織和轉(zhuǎn)移的腋窩淋巴結(jié)中的表達(dá)

A:正常乳腺組織中的OCT4;B:乳腺癌組織中的OCT4;C:轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中的OCT4;D、E:RT-PCR檢測(cè)。

圖3OCT4 在鄰近正常的乳腺組織、乳腺癌組織和轉(zhuǎn)移的腋窩淋巴結(jié)中的表達(dá)

2.2CD44、CD24抗體檢測(cè)遂行組織冰凍切片CD44和CD24抗體染色、激光共聚焦檢測(cè)。激光共聚焦掃描顯示:CD44抗原盡管也表達(dá)于正常乳腺組織(圖1A),但主要存在于腫瘤細(xì)胞膜上,細(xì)胞間質(zhì)內(nèi)也有少量表達(dá);乳腺癌組織(圖1B)和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中(圖1C)CD44的表達(dá)要明顯強(qiáng)于鄰近正常的乳腺組織。RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示:在乳腺癌組織和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中CD44基因表達(dá)均明顯強(qiáng)于鄰近正常的乳腺組織(圖1D、E),而CD44在腫瘤組織和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中的過表達(dá)。RT-PCR結(jié)果顯示乳腺癌組織和轉(zhuǎn)移的腋窩淋巴結(jié)中的CD44 mRNA 表達(dá)明顯強(qiáng)于鄰近正常的乳腺組織(P<0.05),在乳腺癌組織和轉(zhuǎn)移的腋窩淋巴結(jié)之間的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。CD24在正常乳腺組織、原發(fā)癌灶內(nèi)和淋巴結(jié)中皆少量表達(dá)或不表達(dá)(圖2),差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.3OCT4檢測(cè)原發(fā)乳腺癌組織和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中的OCT4具有自我更新和促使癌細(xì)胞增殖的功能,OCT4抗原主要表達(dá)于腫瘤細(xì)胞膜上和細(xì)胞基質(zhì)內(nèi);它可表達(dá)于正常乳腺組織上皮細(xì)胞核內(nèi)(圖3A),乳腺癌組織(圖3B)和轉(zhuǎn)移的腋窩淋巴結(jié)中(圖3C),明顯強(qiáng)于鄰近正常的乳腺組織(圖3A)。RT-PCR結(jié)果顯示:在乳腺癌組織和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中OCT4基因表達(dá)均明顯強(qiáng)于正常的乳腺組織(圖3D、E)。RT-PCR檢測(cè),乳腺癌組織和轉(zhuǎn)移的腋窩淋巴結(jié)中的OCT4 mRNA 表達(dá)明顯強(qiáng)于鄰近正常的乳腺組織(P<0.05), 在乳腺癌組織和轉(zhuǎn)移的腋窩淋巴結(jié)之間的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

A:正常乳腺組織中的Twist1;B:乳腺癌組織中的Twist1;C:轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中的Twist1;D、E:RT-PCR檢測(cè)。

圖4Twist1在鄰近正常的乳腺組織、乳腺癌組織和轉(zhuǎn)移的腋窩淋巴結(jié)中的表達(dá)

2.4Twist1檢測(cè)原發(fā)性乳腺癌和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中Twist1的過表達(dá)可能有助于癌細(xì)胞的遷徙、侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移分別以激光共聚焦、RT-PCR對(duì)3種組織中的Twist1的表達(dá)狀態(tài)進(jìn)行了檢測(cè)。激光共聚焦照片顯示:乳腺導(dǎo)管癌上皮的基底層的細(xì)胞核內(nèi)和細(xì)胞間質(zhì)內(nèi),而且正常乳腺組織內(nèi)小管上皮基底層的細(xì)胞核內(nèi)也可見少量表達(dá)(圖4A)。然而正常乳腺組織Twist1較原發(fā)乳腺癌組織(圖4B)和轉(zhuǎn)移的腋窩淋巴結(jié)組織(圖4C)的熒光強(qiáng)度弱得多。RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示乳腺癌組織和轉(zhuǎn)移腋窩淋巴結(jié)中Twist1基因的表達(dá)較正常乳腺組織中的表達(dá)要強(qiáng)很多(圖4D、E),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),然而在后二者中差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

3討論

3.1乳腺癌組織和腋窩淋巴結(jié)中BCSCs分子標(biāo)志物CD44的高表達(dá)是癌細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵環(huán)節(jié)第1個(gè)被確認(rèn)的實(shí)體腫瘤干細(xì)胞來源于乳腺癌,那些具有CD44+CD24-標(biāo)志物的一小撮細(xì)胞亞群(僅100個(gè)那樣少)能再生為一個(gè)腫瘤實(shí)體,反之,不具有這種生物標(biāo)志的眾多腫瘤細(xì)胞卻具有該功能[7]。試驗(yàn)結(jié)果表明CD44分子在原發(fā)乳腺癌和轉(zhuǎn)移的腋窩淋巴結(jié)中高表達(dá)而在正常乳腺組織中低表達(dá)。而CD24在腫瘤組織、腋窩淋巴結(jié)和正常組織中均低表達(dá),這與以前的研究相符合。Li等[8]報(bào)道到了乳腺癌腫瘤干細(xì)胞是由高水平的透明質(zhì)酸受體CD44和對(duì)熱穩(wěn)定的低表達(dá)的CD24分子為特征的細(xì)胞。這表明乳腺癌干細(xì)胞主要在形成的初始階段其主要作用并維持這種趨勢(shì)。乳腺癌干細(xì)胞CD44+CD24-也保持干細(xì)胞的多種特性如自我更新、增殖和促進(jìn)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移等。進(jìn)一步研究表明,以透明質(zhì)酸誘導(dǎo)為基礎(chǔ)的這類腫瘤細(xì)胞的標(biāo)志包括高聚集的CD44+CD24-為特征的腫瘤侵襲性細(xì)胞,細(xì)胞連接蛋白如鈣黏素和封閉素下調(diào),以及豐富的表皮間質(zhì)化標(biāo)志物如強(qiáng)烈的淋巴細(xì)胞侵襲和對(duì)化療產(chǎn)生抵制的分子表型過表達(dá)[9]。因而以CD44為標(biāo)靶可以干預(yù)乳腺癌干細(xì)胞的分化、自我更新和腫瘤的侵襲。

3.2乳腺癌干細(xì)胞OCT4的高表達(dá)維系了癌細(xì)胞的自我更新并增加了對(duì)治療的抵制和復(fù)發(fā)的概率正常組織中的OCT4,尤其是孕期,具有多重功能如乳腺上皮細(xì)胞的自我更新、增殖,以及環(huán)境誘導(dǎo)的多重特性[10-11]。正常乳腺組織中OCT4一旦變異,他的轉(zhuǎn)導(dǎo)就會(huì)導(dǎo)致具有侵襲、克隆能力的腫瘤細(xì)胞系產(chǎn)生。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明和正常組織相比,乳腺組織和受累腋窩淋巴結(jié)內(nèi)OCT4的基因和蛋白均為過表達(dá)。這表明OCT4與細(xì)胞的產(chǎn)生和分化狀態(tài)密切相關(guān)。而且當(dāng)正常組織內(nèi)OCT4呈高表達(dá)時(shí)賦予了腫瘤發(fā)生的能力。臨床研究已表明:與組織內(nèi)OCT4呈中低程度表達(dá)相比,COT4干性分子高表達(dá)的腫瘤與疾病進(jìn)展、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)期更短的生存期有關(guān)[1]。OCT4預(yù)后差與腫瘤干細(xì)胞耐藥增多導(dǎo)致腫瘤患者化療失敗率高有密切關(guān)系[12]。

CD44+CD24-/low乳腺癌干細(xì)胞中Twist1的過表達(dá)由于使上皮間質(zhì)化而促進(jìn)了腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移。盡管Twist1在其他上皮類腫瘤細(xì)胞的核內(nèi)表達(dá)是低頻率事件,但是在乳腺癌細(xì)胞核內(nèi)表達(dá)卻具有重要的臨床意義。試驗(yàn)結(jié)果顯示Twist1主要表達(dá)在乳腺癌和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中CD44+CD24-/low癌細(xì)胞核內(nèi),同時(shí)正常組織內(nèi)也有少量表達(dá)。這表明Twist1可能主要在腫瘤的起始和促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移方面起作用。更重要的是,筆者發(fā)現(xiàn)在Ⅰ~Ⅳ級(jí)的乳腺癌組織和腋窩淋巴結(jié)內(nèi)發(fā)現(xiàn)Twist1的表達(dá)上調(diào)。表明轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)內(nèi)Twist的高表達(dá)及后者從陰性到陽性的轉(zhuǎn)變可能會(huì)導(dǎo)致更差的預(yù)后。研究證明乳腺上皮中Twist1可能通過CD44的過表達(dá)促進(jìn)乳腺癌干細(xì)胞的產(chǎn)生和醛酸脫氫酶活性的增加使上皮間質(zhì)化[8,13]。另一方面,Twist1誘導(dǎo)了上皮間質(zhì)化,能使上皮腫瘤細(xì)胞具有間質(zhì)化細(xì)胞系的特性如與癌細(xì)胞遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的遷徙和侵襲能力[14]。本研究和文獻(xiàn)報(bào)道表明腫瘤間質(zhì)中的Twist1與腫瘤中陽性ER和PR的狀態(tài)緊密相關(guān)。所有Twist1高表達(dá)的腫瘤細(xì)胞株都顯示了ER基因和蛋白的表達(dá),以及二者在乳腺癌患者中呈反比關(guān)系[15]。

本研究發(fā)現(xiàn)原發(fā)性乳腺癌和轉(zhuǎn)移性腋窩淋巴結(jié)中的CD44、OCT4及Twist1分別較正常乳腺組織高表達(dá),而且在Twist1高表達(dá)患者中ER呈低表達(dá),預(yù)示了這類患者可能預(yù)后更差。

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Relation between expression of BCSCs associated genes from swelling axillary lymph nodes of breast cancer with recurrence and metastasis of tumor

Yu Tianwu1,Gong Jianping2△,Guo Dan3,Zhou Jian1

(1.Third Department of General Surgery,Affiliated Yongchuan Hospital of Chongqing Medical University, Chongqing 402160,China;2.Department of Hepatobiliary Surgery,Second Affiliated Hospital of Chongqing Medical University,Chongqing 400010,China;3.Department of Three Glands Surgery, Affiliated Second Clinical College,Chongqing Medical University,Chongqing 400010,China)

[Abstract]ObjectiveTo explore the relation between the expression of breast cancer stem cells(BCSCs) related gene CD44,OCT4 and Twist1 in breast cancer tissues and swelling axillary lymph nodes with the recurrence and metastasis of breast cancer.MethodsThe genes and antigen expressions of BCSCs relative factors CD44,CD24,OCT4 and Twist1 in th breast cancer tissue and axillary lymph nodes were detected by the immunohistochemical method and RT-PCR.ResultsTotally 14 cases of preoperatively and intraoperatively diagnosed breast cancer had axillary lymph nodes metastasis of cancer cells.The over expression of BCSCs relative factors CD44,OCT4 and Twist1 antigen positive in the breast cancer tissue and axillary lymph nodes were detected by the immunohistochemical method,while CD24 was lowly expressed;the gene expressions of BCSCs relative factors CD44,OCT4 and Twist1 in the breast cancer tissue and axillary lymph nodes were enhanced by the RT-PCR detection (P<0.05),while CD24 gene was lowly expressed(P>0.05).ConclusionThe genes and antigen expression of BCSCs related factors CD44,OCT4 and Twist1 in the patients with breast cancer complicating swelling axillary lymph nodes are significantly increased,which might indicate that the BCSCs related factors are related with easily early metastasis and recurrence of breast cancer cells.

[Key words]breast neoplasms;stem cell;CD44;Twist1;OCT4

doi:論著·臨床研究10.3969/j.issn.1671-8348.2016.09.022

作者簡(jiǎn)介:余天霧(1968―),學(xué)士,主治醫(yī)師,主要從事乳腺腫瘤治療研究?!魍ㄓ嵶髡?,E-mail:674079699@qq.com。

[中圖分類號(hào)]R737.9

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]1671-8348(2016)09-1224-05

(收稿日期:2015-09-29修回日期:2015-12-01)

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