陳陽靜

(西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院，陜西 西安 710000)

?

血管內(nèi)皮生長因子在鼻咽癌中的表達(dá)及與臨床病理特征的關(guān)系研究

陳陽靜

(西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院，陜西 西安 710000)

[摘要]目的探討血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)表達(dá)與鼻咽癌患者臨床病理特征的關(guān)系，為鼻咽癌診治提供理論依據(jù)。方法收集85例臨床資料完整的鼻咽癌組織切片以及40例正常的鼻咽組織切片，采用免疫組織化學(xué)染色(SP)法檢測標(biāo)本中VEGF的表達(dá)情況，分析鼻咽癌組織切片中VEGF的表達(dá)與年齡、性別、TNM分期及有無復(fù)發(fā)等病理特征的關(guān)系。結(jié)果VEGF陽性表達(dá)主要位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。鼻咽癌組織切片中VEGF陽性表達(dá)72例(85%)，正常鼻咽組織切片中VEGF陽性表達(dá)3例(8%)，鼻咽癌組織中VEGF陽性表達(dá)率明顯高于正常鼻咽組織(P<0.05)。不同年齡及性別鼻咽癌患者VEGF陽性表達(dá)率比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)，而不同TNM分期及復(fù)發(fā)情況患者陽性表達(dá)率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)。結(jié)論VEGF在鼻咽癌切片組織中陽性表達(dá)率較高，其表達(dá)率與腫瘤TNM分期、有無復(fù)發(fā)有明顯的關(guān)系，檢測VEGF表達(dá)情況能為鼻咽癌診治提供理論依據(jù)。

[關(guān)鍵詞]血管內(nèi)皮生長因子；鼻咽癌；血管形成；血管通透性；腫瘤TNM分期

鼻咽癌(NPC)是指發(fā)生于鼻咽腔頂部和側(cè)壁的惡性腫瘤，是我國高發(fā)惡性腫瘤之一，發(fā)病率居耳鼻咽喉惡性腫瘤之首[1]。腫瘤的病因、發(fā)病機制及其預(yù)防措施等是目前醫(yī)學(xué)研究的重點和難點[2]。研究表明，通過抑制血管的形成進(jìn)而抑制腫瘤的生長已經(jīng)成為腫瘤治療的一個新方向[3-4]。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)屬于血小板源生長因子家族[5]，是從黏液細(xì)胞或神經(jīng)母細(xì)胞瘤中提取的特異作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞的血管生成因子，它能夠誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生分裂增生，增強血管通透性，從而促進(jìn)腫瘤的形成與轉(zhuǎn)移[6-7]。本研究觀察了VEGF在鼻咽癌中的表達(dá)情況及與臨床病理特征的關(guān)系，旨在為鼻咽癌的診治提供理論依據(jù)。

1臨床資料

1.1一般資料選取2010—2014年我院收集的病例資料完整的85例患者鼻咽癌組織標(biāo)本，診斷前患者均未接受任何抗癌治療，排除無效組織及組織過小的標(biāo)本，其中男53例，女32例；年齡21～76歲，中位年齡42歲；國際抗癌協(xié)會(UICC)腫瘤TNM分期[8]Ⅰ期9例，Ⅱ期36例，Ⅲ期28例，Ⅳ期12例。選取同期40例健康人正常鼻咽組織標(biāo)本作為對照，男24例，女16例；年齡18～68歲。

1.2方法采用免疫組織化學(xué)染色(SP)法[9]檢測所有標(biāo)本中VEGF陽性表達(dá)情況。將石蠟組織切片在60 ℃恒溫箱中烘烤20 min后，將石蠟切片置于二甲苯中浸泡10 min，更換二甲苯再浸泡10 min，后依次用無水乙醇、95%乙醇、70%乙醇浸泡5 min進(jìn)行脫蠟及水化，將切片浸PBS洗3次，每次5 min；再置于新鮮配制的3% H2O2中以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性，室溫靜置15 min，PBS緩沖液沖洗2～3次，每次5 min。在微波爐里加熱0.01 mol/L枸櫞酸鈉緩沖溶液(pH 6.0)至沸騰后將切片放入，斷電，間隔5～10 min，反復(fù)1～2次進(jìn)行抗原修復(fù)，PBS緩沖液沖洗3次，每次5 min。滴加正常山羊血清封閉液，室溫20 min，封閉非特異性抗原。滴加一抗(VEGF鼠抗人單克隆抗體，美國Sigma公司產(chǎn)品)，4 ℃過夜后在37 ℃復(fù)溫45 min，用PBS洗3次，每次5 min。滴加二抗SP試劑盒(德國羅氏公司產(chǎn)品)，室溫靜置，用PBS緩沖液沖洗。滴加DAB(DAB顯色試劑盒購自北京中山公司)顯色5～10 min，在顯微鏡下掌握染色程度，PBS沖洗10 min，蘇木精復(fù)染2 min，用自來水沖洗10～15 min；二甲苯透明，中性樹膠封片，用BM-37XB倒置生物顯微鏡(上海彼愛姆光學(xué)儀器制造有限公司提供)觀察切片顯色情況，記錄結(jié)果，拍照。

1.3結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)用PBS代替一抗的空白對照，VEGF表達(dá)以免疫組織化學(xué)染色出現(xiàn)棕黃色、褐色顆粒為陽性。每一切片隨機選擇4個視野，在顯微鏡(×400)下計算每個視野中100個細(xì)胞中陽性細(xì)胞的比例，以4個視野的平均百分?jǐn)?shù)作為判定結(jié)果。陽性細(xì)胞比例≤10%為陰性計0分，10%～25%為弱陽性計1 分，25%～50%為陽性計2分，>50%為強陽性計3分。并參照Rodrigo方法對細(xì)胞的著色程度進(jìn)行評定，無色計0分，淡黃色計1分，黃色計2分，棕黃色即3分，棕褐色計4分。兩項合并綜合評分0～1分為陰性，2～3分為弱陽性，4～5分為陽性，6～7分為強陽性。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法釆用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件對本次實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。率的比較采用卡方檢驗。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1VEGF陽性表達(dá)情況在鼻咽癌組織中，VEGF主要在細(xì)胞胞漿內(nèi)表達(dá)，部分在腫瘤間質(zhì)中的纖維細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)，見圖1。正常鼻咽組織中鏡下陽性細(xì)胞極少，細(xì)胞多為無色，見圖2。85例鼻咽癌組織中VEGF陽性表達(dá)72例占率85%，40例正常鼻咽組織中VEGF陽性表達(dá)3例占8%，兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

2.2鼻咽癌患者VEGF表達(dá)情況與臨床病理特征的關(guān)系不同年齡、性別患者鼻咽癌組織中VEGF陽性表達(dá)率比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)，而不同TNM分期和復(fù)發(fā)情況鼻咽癌患者VEGF陽性表達(dá)率比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)。見表2。

圖1　鼻咽癌組織中VEGF表達(dá)情況(×400)

圖2　正常鼻咽組織中VEGF表達(dá)情況(×400)

例(%)

注：①與正常鼻咽組織比較，P<0.05。

表2　鼻咽癌患者VEGF表達(dá)情況與

3討論

鼻咽癌的發(fā)生及發(fā)展是一個復(fù)雜的過程，致病因素有生物因素、遺傳因素及環(huán)境因素[10]。研究鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展機制有利于鼻咽癌的治療，從而提高患者的生存質(zhì)量。VEGF可特異性地促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞生長及血管生成，增加血管的通透性，促進(jìn)血管內(nèi)物質(zhì)的滲漏,為血管內(nèi)皮的遷移和腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移提供基質(zhì)[11]。隨著對VEGF家族研究的深入，發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞不僅分泌VEGF，而且在人體的腫瘤細(xì)胞組織中存在大量VEGF表達(dá)，正常組織卻極少表達(dá)[12-13]；且VEGF作為生長因子，能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的增殖，其在腫瘤的形成及發(fā)展過程很可能有著非常重要的作用，通過阻斷VEGF受體的表達(dá)，有可能達(dá)到抑制腫瘤生長的目的[14-15]。

Wakisaka等[16]及趙素萍等[17]研究報道VEGF的表達(dá)不僅與腫瘤臨床分期有關(guān)，還與鼻咽癌有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)；趙國旗等[18]研究表明血清VEGF表達(dá)升高意味著預(yù)后不良。本研究結(jié)果顯示鼻咽癌組織中VEGF陽性表達(dá)率明顯高于正常鼻咽組織，且不同腫瘤TNM分期及復(fù)發(fā)情況的患者鼻咽癌組織中VEGF陽性表達(dá)率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，鼻咽癌組織中VEGF陽性表達(dá)率隨著腫瘤TNM分期分期的進(jìn)展而增高，有復(fù)發(fā)者VEGF陽性表達(dá)率顯著高于無復(fù)發(fā)者，表明VEGF在鼻咽癌的發(fā)展中起一定作用。

總之，VEGF在鼻咽癌組織中存在高表達(dá)，且與腫瘤TNM分期及有無復(fù)發(fā)密切相關(guān)，抑制VEGF的表達(dá)可能成為有效治療鼻咽癌的途徑之一，有待繼續(xù)研究。

[參考文獻(xiàn)]

[1]Jones PA,Baylin SB. The epigenomics of cancer[J]. Cell,2007,128(4):683-692

[2]吳慧玲,董盛宇,葉耀耀,等. S100蛋白表達(dá)與鼻咽癌臨床關(guān)系的研究[J]. 中國現(xiàn)代醫(yī)藥雜志,2013,15(5):15-18

[3]宋勇春,王平. VEGF、LMP-1在鼻咽癌中的表達(dá)及其與預(yù)后的相關(guān)性[J]. 天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2007,13(4):556-559

[4]張海,王志新. VEGF和MMP-9在鼻咽癌中的表達(dá)及其與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的關(guān)系[J]. 中國腫瘤臨床與康復(fù),2008,15(5):389-393

[5]王曉雪,王光明,潘云,等. VEGF與鼻咽癌的研究現(xiàn)況及其臨床意義[J]. 中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新,2014,11(2):149-151

[6]Leblebisatan G,Antmen B,Samaz I,et al. Vascular endothelial growth factor levels in childhood acute lymphoblastic and myeloblastic leukemia[J]. Indian J Hematol Blood Transfus,2012,28(1):24-28

[7]Jennbacken K,Welén K,Olsson A,et al. Inhibition of metastasis in a castration resistant prostate cancer model by the quinoline-3-carboxamide tasquinimod (ABR-215050)[J]. Prostate,2012,72(8):913-924

[8]朱超綱,趙淑芬,陳新林,等. EB病毒DNA定量測定與鼻咽癌“中國2008TNM分期”的關(guān)系[J]. 中國腫瘤,2011,20(10):772-774

[9]饒潔,趙利容,羅泊濤,等. 鼻咽癌組織中ERK1/2、p-ERK1/2和MMP-9蛋白的表達(dá)變化及其相關(guān)性[J]. 山東醫(yī)藥,2014,54(31):1-3

[10] 姚行齊,楊長亮,陽光,等. 鼻咽癌患者預(yù)后因素分析[J]. 實用癌癥雜志,2014,29(2):146-148

[11] Li J,Zhang YP,Kirsner RS. Angiogenesis in wound repair:Angiogenic growth factors and the extracellular matrix[J]. Microscopy Res Tech,2003,60(1):107-114

[12] Von MZ. De novo expression of vascular endothelial growth factor in human pancreatic cancer:Evidence for an autocrine mitogenic loop[J]. Gastroenterology,2000,119(5):1358-1372

[13] 商黎明. 鼻咽癌中VEGF及其受體EGFR的表達(dá)及相關(guān)性的初步研究[D]. 杭州：浙江大學(xué),2011

[14] Qin LX,Tang ZY. The prognostic molecular markers in hepatocellular carcinoma[J]. World J Gastroenterol,2002,8(3):385-392

[15] Walter A,Etienne-Selloum N,Khallouf H,et al. Intake of grape-derived polyphenols reduces C26 tumor growth by inhibiting angiogenesis and inducing apoptosis[J]. FASEB J,2010,24(9):3360-3369

[16] Wakisaka N,Wen QH,Yoshizaki T,et al. Association of vascular endothelial growth factor expression with angiogenesis and lymph node metastasis in nasopharyngeal carcinoma[J]. Laryngoscope,1999,109(5):810-814

[17] 趙素萍,王承龍. 血管內(nèi)皮生長因子在鼻咽癌中的表達(dá)及其臨床意義[J]. 湖南醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2003,28(2):114-116

[18] 趙國旗,許奕,王薔. 鼻咽癌放射治療前測定血管內(nèi)皮生長因子的意義[J]. 中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報,2005,3(4):274-277

Study on VEGF expression and its relationship with clinical pathological features in nasopharyngeal carcinoma

CHEN Yangjing

(The First Affiliated Hospital of Xi’an Jiao Tong University, Xi’an 710000, Shaanxi, China)

Abstract:Objective It is to observe the expression of vascular endothelium growth factor (VEGF) in nasopharyngeal carcinoma (NPC), and investigate the relationships of VEGF with the clinical pathological features, in order to provide the theory for treats NPC. Methods 85 cases of nasopharyngeal carcinoma tissues section of patients with complete clinical data and 40 cases of normal nasopharyngeal tissues section were collected and the expression of VEGF in them were detected by immunohisto-chemistry (SP) method. The relationship of VEGF expression with the clinical pathological features included age, sex, TNM stage and recurrence in NPC tissue were analyzed.Results The positive expression of VEGF in NPC was observed mainly in cytoplasm of cells. There were 72 cases (85%) of nasopharyngeal carcinoma and 3 cases (8%) of normal tissues with positive express of VEGF, the positive expression rate of VEGF in NPC tissues was significantly higher than that in normal nasopharyngeal tissues (P<0.05). There were no significant difference in the positive expression of VEGF in NPC tissue between different age and sex (all P>0.05), but were significant difference between different TNM stages and recurrence state (all P<0.05).Conclusion The positive expression rate of VEGF in NPC tissue is higher, and it has relationship with TNM stage and recurrence. The detection of VEGF expression can provide a theoretical basis for the diagnosis and treatment of NPC.

Key words:vascular endothelium growth factor; nasopharyngeal carcinoma; angiogenesis; vascular permeability; TNM stage

[作者簡介]陳陽靜，男，主治醫(yī)師，研究方向為耳鼻咽喉頭頸外科疾病的診治。

doi:10.3969/j.issn.1008-8849.2016.03.006

[中圖分類號]R-33

[文獻(xiàn)標(biāo)識碼]A

[文章編號]1008-8849(2016)03-0245-03

[收稿日期]2015-07-20