趙森姜黎鄒明

（大連大學(xué)附屬中山醫(yī)院配夜中心，大連　116001）

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槲樹(shù)葉總黃酮片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

趙森姜黎鄒明*

（大連大學(xué)附屬中山醫(yī)院配夜中心，大連116001）

摘要：目的制定槲樹(shù)葉總黃酮片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究。方法采用高效液相色譜法測(cè)定槲樹(shù)葉總黃酮片中槲皮素含量，并采用其他方法對(duì)其硬度、崩解時(shí)間等進(jìn)行考察，確定其初步質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果制定槲樹(shù)葉總黃酮片的有關(guān)檢查項(xiàng)目標(biāo)準(zhǔn)及含量測(cè)定方法、含量限度。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法，在現(xiàn)行的色譜條件下，測(cè)定槲樹(shù)葉總黃酮片中槲皮素的含量，方法簡(jiǎn)單快速，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性好，回收率滿(mǎn)意，操作簡(jiǎn)單可行且能提高工作效率，對(duì)槲樹(shù)葉總黃酮片質(zhì)量評(píng)價(jià)具有重要意義，并對(duì)該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的進(jìn)一步制定提供理論依據(jù)和科學(xué)參考。

關(guān)鍵詞：槲樹(shù)葉；總黃酮；槲皮素；HPLC

槲樹(shù)葉，又名槲若，為殼斗科(Fagaceae)櫟屬(Quercus L．)植物槲樹(shù)(Quercus dentata Thunb.)的干燥葉。味甘苦，平，無(wú)毒，歸脾、胃、肺、大腸經(jīng)。有止血、清熱利尿之功效。本實(shí)驗(yàn)按照最佳提取、純化工藝及成型工藝流程，制備3批次槲樹(shù)葉總黃酮片。其批號(hào)分別設(shè)為201301、201302、201303。對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行檢查，初步確定其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1　儀器與試藥

CP225D型電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；CQ-250超聲波清洗器（上海超聲儀器廠(chǎng)）；Agilent液相色譜儀；安捷倫色譜工作站；KQ3200超聲波清洗器(江蘇昆山)；槲皮素對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)：848-9901)；槲樹(shù)葉，自采于丹東東港，經(jīng)鑒定為殼斗科植物槲樹(shù)的葉；甲醇、乙腈為色譜試劑，水為雙蒸水，其余試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1性狀經(jīng)對(duì)三批外觀(guān)性狀檢查，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　外觀(guān)性狀檢查結(jié)果

根據(jù)上述測(cè)定結(jié)果，確立本品為棕紅色薄膜衣片，去除衣層后，片芯呈棕色或棕褐色，氣微，味淡。

2.2重量差異檢查取本品20片，精密稱(chēng)定各片的重量，每片重量與標(biāo)示量0.2 g相比較，超出重量差異限度的藥片不得多于2片，并不得有1片超出限度的一倍。按上法進(jìn)行檢查，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

表2　裝量差異檢查結(jié)果

測(cè)定結(jié)果表明，本品重量差異符合片劑項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定。

2.3崩解時(shí)限檢查按2010版《中國(guó)藥典》一部附錄ⅫA片劑項(xiàng)下檢測(cè)方法，對(duì)樣品崩解時(shí)限進(jìn)行檢查，檢查結(jié)果見(jiàn)表3。

表3　崩解時(shí)限檢查表

測(cè)定結(jié)果表明，本品崩解時(shí)限檢查結(jié)果符合片劑項(xiàng)下相關(guān)規(guī)定。

3　含量測(cè)定

3.1測(cè)定指標(biāo)與測(cè)定方法的確立槲樹(shù)葉總黃酮片為槲樹(shù)葉經(jīng)50%乙醇提取，經(jīng)濾過(guò)，濃縮，純化，干燥，擬以高效液相色譜法（紫外檢測(cè)器最大吸收波長(zhǎng)）測(cè)定槲樹(shù)葉中槲皮素含量，在選定的色譜條件下，供試品溶液中槲皮素與相鄰組分分離度良好，經(jīng)方法學(xué)考察，方法的重復(fù)性、穩(wěn)定性、精密度、回收率試驗(yàn)均符合有關(guān)規(guī)定，因此確立本藥材含量指標(biāo)為槲皮素，測(cè)定方法為高效液相色譜法。

3.2供試品溶液的制備取本品片劑，去除衣層，研碎，精密稱(chēng)取0.1 g，至具塞三角瓶中，精密加入甲醇25 ml，稱(chēng)重，超聲30分鐘，放涼，稱(chēng)重，用甲醇補(bǔ)足重量，然后用濾紙濾過(guò)，再用0.45 μm的濾膜濾過(guò)，精密吸取濾液2～25 ml容量瓶中，甲醇定容制刻度，混勻，即得供試品溶液。

3.3線(xiàn)性范圍考察取槲皮素對(duì)照品溶液，分別精密吸取3、6、9、12、15 μl，其回歸方程為：y=33.662x+ 19.526 (r=0.9997)，槲皮素在0.01668～0.08340 μg范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。

3.4精密度試驗(yàn)精密吸取同一供試品溶液10 μl，連續(xù)進(jìn)樣5次，結(jié)果表明精密度良好。

3.5穩(wěn)定性試驗(yàn)取供試品溶液，分別在0、2、4、6、8 h進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果各峰的峰面積和保留時(shí)間的RSD均小于3.0%(n=6)。表明穩(wěn)定性良好。3.6重復(fù)性試驗(yàn)取同一樣品5份，按照供試品溶液制備方法制備，分別進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果各峰的峰面積和保留時(shí)間RSD均小于3.0%(n=6)。表明重復(fù)性良好。

3.7加樣回收率試驗(yàn)精密稱(chēng)取已知準(zhǔn)確含量的本品（含量0.01616 mg/g）六份，每份0.5 g。分別置25 ml量瓶中，精密加入槲皮素對(duì)照品溶液（0.00556 mg/ml）12.5 ml，加甲醇稀釋至刻度。在上述色譜條件下進(jìn)樣10 μl，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，本方法槲皮素的回收率為97.9%，RSD%為1.46%。

3.8樣品含量測(cè)定取樣品按3.2項(xiàng)下制備成供試品溶液，精密吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液各10 μl，注入高效液相色譜儀中，樣品中槲皮素的含量為0.126 mg/片。

4　結(jié)論與討論

單因素考察煎煮、超聲提取、回流提取等方法，發(fā)現(xiàn)樣品粘稠很難濾過(guò)，不適宜煎煮和超聲提取，甲醇回流提取充分，提取率高。通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)先后選用甲醇-水溶液、乙腈-水溶液等為流動(dòng)相，結(jié)果以前者為流動(dòng)相，比例為55∶45時(shí)槲皮素的峰型最好，與其相鄰組分分離度都可達(dá)到要求。比較了365 nm和280 nm的檢測(cè)波長(zhǎng)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)槲皮素在365 nm處吸收較好。并且與其他成分有較好的分離，其他成分對(duì)槲皮素的干擾較少，故選擇365 nm處作為吸收波長(zhǎng)。本品性狀為棕紅色薄膜衣片，去除衣層后，片芯呈棕色或棕褐色，氣微，味淡。片重0.2 g，重量差異、崩解時(shí)限符合片劑項(xiàng)下相關(guān)規(guī)定。含量測(cè)定在現(xiàn)行的色譜條件下，測(cè)定槲樹(shù)葉總黃酮片中槲皮素的含量，方法簡(jiǎn)單快速，結(jié)果準(zhǔn)確可。對(duì)槲樹(shù)葉總黃酮片質(zhì)量評(píng)價(jià)具有重要意義，并對(duì)該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的進(jìn)一步制定提供理論依據(jù)和科學(xué)參考。

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Study on the Quality Standard of Oak Leaf Flavonoids

ZHAO Sen, JIANG Li, ZOU Ming
(The Affiliated Zhongshan Hospital of Dalian University, Liaoning Province, Dalian 116001, China)

Abstract：Objective To develope the quality standard of oak leaf flavonoids. Methods Using high performance liquid chromatography oak leaf content of total flavonoids quercetin film, and other methods of hardness, disintegration time were investigated to determine its initial quality standards. Results The inspection program standards, determination methods and content limits of oak leaf flavonoids were developed. Conclusion The HPLC method was used in the present chromatographic conditions, the determination of oak leaves flavonoids quercetin in the film, which is easy, quick, accurate and reproducible, and had satisfactory recovery. The operation is simple and feasible, and can improve the efficiency. It is of great significance to the evaluation of the quality of total oak leaf flavonoids, and the preparations for further development of quality standards to provide the theoretical basis and scientific reference.

Keywords:oak leaves; total flavonoids; quercetin; HPLC

收稿日期：（本文編輯：張文娟本文校對(duì)：鄒明2016-01-22）

*通訊作者：zsyyyjk@sina.com

doi:10.3969/j.issn.1672-2779.2016.08.067

文章編號(hào)：1672-2779（2016）-08-0143-02