梁金霞，邱志維，孔令恩，李才明，劉集鴻，吳培鈿，鐘凱麗

(惠州市第一人民醫(yī)院，廣東惠州516003)

全血連續(xù)計(jì)數(shù)法在腦梗死抗血小板治療患者血小板聚集率檢測中的應(yīng)用

梁金霞，邱志維，孔令恩，李才明，劉集鴻，吳培鈿，鐘凱麗

(惠州市第一人民醫(yī)院，廣東惠州516003)

目的 探討全血連續(xù)計(jì)數(shù)法在腦梗死抗血小板治療患者血小板聚集率檢測中的應(yīng)用價(jià)值。方法 選擇腦梗死患者32例，分別于入院時(shí)(未服用氯吡格雷)，服用氯吡格雷1、3天采用全血連續(xù)計(jì)數(shù)法和光學(xué)比濁法檢測最大血小板聚集率(MAR)，分析兩種檢測方法的相關(guān)性和差異。結(jié)果 三個(gè)時(shí)間段全血連續(xù)計(jì)數(shù)法檢測的MAR均低于光學(xué)比濁法(P均<0.05)；入院時(shí)全血連續(xù)計(jì)數(shù)法與光學(xué)比濁法的MAR無明顯相關(guān)性(r=0.324，P>0.05)，服用氯吡格雷1、3天，二者均呈正相關(guān)(r分別為0.872、0.647，P均<0.05)。結(jié)論 全血連續(xù)計(jì)數(shù)法是檢測腦梗死抗血小板治療患者M(jìn)AR的一種較好方法。

腦梗死；全血連續(xù)計(jì)數(shù)法；光學(xué)比濁法；血小板聚集率

為了觀察腦梗死患者抗血小板治療的效果，臨床上需要對(duì)血小板活化功能進(jìn)行定期檢測，血小板聚集率(MAR)可反映血小板活化狀態(tài)[1]。光學(xué)比濁法是檢測血小板聚集功能的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但存在血液樣本需求量大、操作繁雜、耗時(shí)多以及質(zhì)量控制難等缺點(diǎn)[2]。全血連續(xù)計(jì)數(shù)法是一種新的檢測方法[3]，目前其檢測MAR的研究較少。本研究比較全血連續(xù)計(jì)數(shù)法與光學(xué)比濁法的MAR檢測結(jié)果，探討全血連續(xù)計(jì)數(shù)法在腦梗死抗血小板治療患者M(jìn)DR中的應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2014年6月～2015年6月我院收治的腦梗死患者32例，男21例、女11例，年齡32～77(59.36±11.3)歲。多發(fā)性腦梗死(顱內(nèi)有2處或2處以上病灶)15例(多發(fā)組)；單發(fā)性腦梗死(顱內(nèi)僅有1處病灶)17例(單發(fā)組)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)CT或MRI確診為腦梗死；②入院前未服用抗血小板藥物，入院后僅服用氯吡格雷負(fù)荷劑量(600 mg)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①氯吡格雷抵抗者；②入院時(shí)血小板計(jì)數(shù)>100×109/L或<45×109/L者；③肝腎功能異常者；④重癥高血壓或高血壓藥物無法控制者。

1.2 MAR檢測 兩組于入院時(shí)(未服用氯吡格雷)、服用氯吡格雷1天和3天時(shí)采用3.2%枸櫞酸鹽抗凝真空采血管(美國BD公司)采集空腹靜脈血3管，其中1管用于全血連續(xù)計(jì)數(shù)檢測，2管用于光學(xué)比濁法檢測。所有采集標(biāo)本保存于37 ℃恒溫箱中，且均于2 h內(nèi)完成檢測，檢測前確保無凝集現(xiàn)象。

1.2.1 全血連續(xù)計(jì)數(shù)法 采用微量加樣器吸取0.5 mL枸櫞酸鹽抗凝全血至檢測試管，并將其移至PL-11全自動(dòng)血小板功能分析儀(南京神州英諾華醫(yī)療科技有限公司)自動(dòng)檢測。檢測開始后，首先進(jìn)行兩次血小板基礎(chǔ)值計(jì)數(shù)(最終基礎(chǔ)值為兩次平均值)，然后自動(dòng)加入50 mmol/L的ADP誘聚劑40 μL(全血最終濃度約為4 mmol/L)，當(dāng)血小板計(jì)數(shù)達(dá)到最低時(shí)停止檢測，計(jì)算最大聚集率(MAR)。MAR=(最終基礎(chǔ)血小板數(shù)-最低血小板數(shù))÷最終基礎(chǔ)血小板數(shù)×100%。

1.2.2 光學(xué)比濁法 2管枸櫞酸鹽抗凝全血分別經(jīng)800 r/min(5 min)和4 000 r/min(8 min)得到富血小板血漿(PRP)和泛血小板血漿(PPP)后，分別取500 μL加入比色杯，采用PRECIL LBY-NJ4血小板聚集儀(北京普利生儀器有限公司)進(jìn)行檢測。以PPP作為空白參照，將濃度為1 mmol/L的ADP誘聚劑5 μL加入至PRP(ADP最終濃度約為10 μmol/L)，當(dāng)PRP透光度改變最大時(shí)即為MAR。

2 結(jié)果

2.1 兩種方法不同時(shí)間點(diǎn)MAR比較 見表1。

表1 不同時(shí)間點(diǎn)兩種檢測方法MAR比較±s)

注：與光學(xué)比濁法比較，*P<0.05。

2.2 兩種檢測方法的相關(guān)性 入院時(shí)全血連續(xù)計(jì)數(shù)法與光學(xué)比濁法的MAR無明顯相關(guān)性(r=0.324，P>0.05)，服用氯吡格雷1、3天，二者均呈正相關(guān)性(r分別為0.872、0.647，P均<0.05)。

2.3 單發(fā)組與多發(fā)組兩種方法不同時(shí)間段MAR比較 見表2。

表2 單發(fā)組與多發(fā)組兩種方法不同時(shí)間段MAR比較

注：與同組同方法入院時(shí)比較，*P<0.05；與同組服用氯吡格雷3天比較，△P<0.05。

3 討論

腦梗死患者抗血小板治療的目的是降低血小板活化功能，防止發(fā)生出血或再次血栓等心腦血管事件。但臨床研究發(fā)現(xiàn)，抗血小板治療的腦梗死患者中仍然約有20%的患者會(huì)發(fā)生心腦血管事件[4,5]。因此，定期對(duì)腦梗死患者行血小板活化功能檢測有助于了解抗血小板治療情況，及時(shí)調(diào)整抗血小板治療方案，預(yù)防不良心腦血管事件發(fā)生。MAR是臨床評(píng)價(jià)血小板活化功能最常用的指標(biāo)[6～10]。

本研究結(jié)果顯示，患者未行抗血小板治療時(shí)兩種檢測方法的MAR無明顯相關(guān)性，但服用氯吡格雷1天和3天，全血連續(xù)計(jì)數(shù)法檢測的MAR明顯低于光學(xué)比濁法，說明兩種方法檢測對(duì)腦梗死抗血小板治療患者的MAR有相同的敏感性，全血連續(xù)計(jì)數(shù)法可替代傳統(tǒng)的光學(xué)比濁法。

本研究結(jié)果顯示，入院時(shí)、服用氯吡格雷1天和3天三個(gè)檢測時(shí)間段全血連續(xù)計(jì)數(shù)法的MAR均明顯低于光學(xué)比濁法，可能與兩種檢測方法的檢測原理不同有關(guān)。光學(xué)比濁法是經(jīng)ADP誘導(dǎo)血小板與纖維蛋白原結(jié)合導(dǎo)致透光度產(chǎn)生變化的反應(yīng)，而全血連續(xù)計(jì)數(shù)法則是通過直接計(jì)算ADP誘導(dǎo)前后血小板數(shù)量的變化計(jì)算血小板最大聚集率，由于其對(duì)小顆粒更為敏感，在檢測過程中會(huì)將一些物質(zhì)認(rèn)為是血小板的較小顆粒，從而導(dǎo)致結(jié)果偏低。因此在檢測過程中，當(dāng)光學(xué)比濁法的MAR處于中低位水平時(shí)，全血連續(xù)計(jì)數(shù)法ADP誘導(dǎo)前后的血小板變化較小，檢測結(jié)果偏低。另外不同檢測樣品也可能帶來這種差異，光學(xué)比濁法血漿樣品制備過程中可能會(huì)因?yàn)殡x心作用而導(dǎo)致細(xì)胞釋放出引起血小板聚集的物質(zhì)。

本研究結(jié)果還顯示，單發(fā)性腦梗死患者與多發(fā)性腦梗死患者在服用氯吡格雷1天和3天的MAR均明顯高于入院時(shí)，服用氯吡格雷3天的MAR明顯高于服用氯吡格雷1天，說明氯吡格雷降低腦梗死患者M(jìn)AR的效果顯著。本研究單發(fā)性腦梗死者與多發(fā)性腦梗死者入院時(shí)、服用氯吡格雷1天和3天的MAR比較均無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，說明腦梗死患者的MAR與疾病的嚴(yán)重程度無關(guān)。

總之，全血連續(xù)計(jì)數(shù)法是檢測腦梗死抗血小板治療患者M(jìn)AR的一種較好方法。

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2015-08-28)