莊永菊

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低分子量酪氨酸磷酸酶在子宮頸鱗癌中的表達(dá)及在預(yù)后判定中的應(yīng)用價(jià)值

莊永菊

【摘要】目的分析子宮頸鱗癌患者低分子量絡(luò)氨酸磷酸酶(LMW-PTP)的表達(dá)和預(yù)后價(jià)值。方法選取2008 年3月至2014年8月石蠟標(biāo)本160例，依照病變程度分為正常組，宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅰ期、Ⅱ～Ⅲ期組和宮頸鱗癌組，采用RT-PCR及免疫組化法分析LMW-PTP水平。結(jié)果C33A、SiHa和CaSki細(xì)胞系中LMW-PTPmRNA表達(dá)明顯高于HaCaT細(xì)胞(P＜0.05)，HaCat細(xì)胞中LMW-PTP表達(dá)最低，明顯低于其他組(P＜0.05)，C33A、SiHa和CaSki細(xì)胞系中LMW-PTP呈高表達(dá)狀態(tài)，HaCaT細(xì)胞中LMW-PTP表達(dá)呈弱陽(yáng)性，C33A細(xì)胞、SiHa細(xì)胞、CaSKi細(xì)胞中表現(xiàn)均明顯提高，正常宮頸上皮組織到子宮頸鱗癌進(jìn)展中，LMW-PTP表達(dá)逐漸升高，中分化子宮頸鱗癌組織中LMW-PTP表達(dá)明顯高于高分化組織(P＜0.05)，低分化子宮頸鱗癌組織中LMW-PTP表達(dá)明顯高于中分化子宮頸鱗癌組織(P＜0.05)，子宮頸鱗癌組織中LMW-PTP表達(dá)與患者組織學(xué)程度密切相關(guān)(P＜0.05)。結(jié)論LMW-PTP在子宮頸鱗癌進(jìn)展中起到重要作用，提示LMW-PTP表達(dá)有助于改善子宮頸鱗癌預(yù)后。

【關(guān)鍵詞】宮頸鱗癌;低分子量絡(luò)氨酸磷酸酶;免疫組化

宮頸癌是常見(jiàn)惡性腫瘤之一，相關(guān)資料顯示，我國(guó)每年約新增13萬(wàn)宮頸癌患者，發(fā)病率僅次于乳腺癌［1］，近些年宮頸癌發(fā)病率有逐漸上升的趨勢(shì)，由于宮頸癌侵襲、轉(zhuǎn)移等，宮頸癌死亡率很高［2，3］。研究宮頸癌轉(zhuǎn)移以及復(fù)發(fā)機(jī)制對(duì)患者治療和預(yù)后有重要意義［4］。在以往分析絡(luò)氨酸磷酸酶中，不少研究指出絡(luò)氨酸磷酸酶能夠參與很多生理過(guò)程，在內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定以及免疫功能方面發(fā)揮出重要作用［5］，低分子量絡(luò)氨酸磷酸酶(LMW-PTP)是絡(luò)氨酸磷酸酶的一種，相關(guān)研究表明LMW-PTP與腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)［6］。為分析LMWPTP在子宮頸鱗癌中的表達(dá)和預(yù)后價(jià)值，整理患者臨床資料，報(bào)告如下。

1　資料與方法

1.1一般資料選取我院2008年3月至2014年8月病理科石蠟標(biāo)本182例為研究對(duì)象，依照組織病變分為正常宮頸組22例，宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅰ期組(CINⅠ期組) 21例、CINⅡ～Ⅲ組49例和宮頸鱗癌組90例。宮頸癌組患者高分化6例，中分化54例，低分化30例;＞45歲43例，＜45歲47例;患者臨床分期為Ⅰ期69例，Ⅱ期21例;腫瘤直徑≤4 cm 44例，腫瘤直徑＞4 cm 46例。所有石蠟標(biāo)本均由2名以上高級(jí)職稱(chēng)病例醫(yī)師確認(rèn)，患者資料保存完整，4組患者在年齡、體重等一般資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

1.2方法試驗(yàn)中所采用宮頸癌C33A、SiHa、CaSki 和HaCaT細(xì)胞系均由中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞所提供，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購(gòu)自美國(guó)Santa Cuze公司。細(xì)胞爬片經(jīng)細(xì)胞胰酶消化后技術(shù)，接受細(xì)胞，加入滅菌蓋玻片，采用PBS清洗2次，放入冰丙酮中固定，清洗備用。

1.2.1RT-PCR檢測(cè):采用TRlzol法(美國(guó)Invitrogen公司)提取細(xì)胞RNA，DNA酶(武漢華美生物工程有限公司)處理后采用氯仿和酚提取，加入DEPC溶解，依照逆轉(zhuǎn)錄酶體系轉(zhuǎn)錄為cDNA，經(jīng)過(guò)35循環(huán)預(yù)變性、延伸，將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測(cè)。

1.2.2免疫組化檢測(cè):依照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行免疫組化，采用辣根酶標(biāo)記，采用石蠟包埋2 mm切片，烘烤脫水，酒精脫水后加蒸餾水洗，加入檸檬酸抗原高壓修復(fù)，室溫下冷卻，加入過(guò)氧化氫封閉，加入LMW_PTP抗體(美國(guó)Santa Cuze公司)，采用PBS清洗，經(jīng)蘇木精染色后脫水，中性樹(shù)脂封片，采用PBS作為陰性對(duì)照試驗(yàn)。

1.3觀察指標(biāo)依照細(xì)胞角色程度分析抗原含量，“0分”為陰性，“1分”為弱陽(yáng)性，“3分”為強(qiáng)陽(yáng)性，依照陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)分為“0”代表沒(méi)有出現(xiàn)陽(yáng)性細(xì)胞，陽(yáng)性細(xì)胞＜10%為“1分”，陽(yáng)性細(xì)胞總是在11～50%為“2分”，陽(yáng)性細(xì)胞在51%～80%為“3分”，陽(yáng)性細(xì)胞＞80%為“4分”。1～4分為低表達(dá)，4分為高表達(dá)，0分為陰性表達(dá)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1細(xì)胞系中LMW-PTPmRNA的表達(dá)RRT-PCR結(jié)果顯示，人永生化正常表皮細(xì)胞HaCaT細(xì)胞中LMWPTPmRNA表達(dá)很低，C33A、SiHa和CaSki細(xì)胞系中LMW-PTPmRNA表達(dá)明顯高于HaCaT細(xì)胞(P＜0.05)。見(jiàn)圖1。

2.2細(xì)胞系中LMW-PTP蛋白表達(dá)Western Blot結(jié)果顯示，HaCat細(xì)胞中LMW-PTP表達(dá)最低，明顯低于其他組(P＜0.05)，C33A、SiHa和CaSki細(xì)胞系中LMW-PTP呈高表達(dá)狀態(tài)。見(jiàn)圖2、3。

圖1　細(xì)胞系中LMW-PTPmRNA的表達(dá)

圖2　細(xì)胞系中LMW-PTP蛋白表達(dá)

圖3　細(xì)胞系中LMW-PTP蛋白的表達(dá)

2.3細(xì)胞系中LMW-PTP表達(dá)免疫組化染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明HaCaT細(xì)胞中LMW-PTP表達(dá)呈弱陽(yáng)性，C33A細(xì)胞、SiHa細(xì)胞、CaSKi細(xì)胞中表現(xiàn)均明顯提高，見(jiàn)圖4。

圖4　細(xì)胞系中LMW-PTP表達(dá)

2.4宮頸上皮和宮頸鱗癌組織中LMW-PTP蛋白表達(dá)情況正常宮頸上皮組織到子宮頸鱗癌進(jìn)展中，LMW-PTP蛋白表達(dá)逐漸升高，組與組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)表1。

2.5宮頸鱗癌不同分化級(jí)別LMW-PTP蛋白表達(dá)中分化子宮頸鱗癌組織中LMW-PTP蛋白表達(dá)明顯高于高分化組織(P＜0.05)，低分化子宮頸鱗癌組織中LMW-PTP表達(dá)明顯高于中分化子宮頸鱗癌組織(P＜0.05)。見(jiàn)表2。

表1　宮頸上皮和宮頸鱗癌組織中LMW-PTP蛋白表達(dá)情況例(%)

表2　宮頸鱗癌不同分化級(jí)別LMW-PTP表達(dá)　例(%)

2.6影響因素分析子宮頸鱗癌組織中LMW-PTP表達(dá)與年齡、臨床分析無(wú)明顯關(guān)系，與患者組織學(xué)程度密切和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況相關(guān)(P＜0.05)。見(jiàn)表3。

表3　影響因素分析　例

3　討論

宮頸癌是常見(jiàn)婦科惡性腫瘤之一，由于具有侵襲性、轉(zhuǎn)移性等病死率很高，宮頸癌早發(fā)現(xiàn)早治療對(duì)宮頸癌患者有重要意義。LMW-PTP是一組分子量大小在18 kDa蛋白質(zhì)，無(wú)特定表達(dá)特異性［7］。在研究LMWPTP中，一般認(rèn)為L(zhǎng)MW-PTP能夠參與多種生理過(guò)程［8］，在癌癥等病理情況下，LMW-PTP表達(dá)異常［9］。以往分析中有研究表明LMW-PTP的表達(dá)與腫瘤轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān)，而且在高度轉(zhuǎn)移腫瘤中高表達(dá)率很高［10］，也有研究表明LMW-PTP在乳腺癌的發(fā)生和進(jìn)展中起到促進(jìn)作用［11］，在本組分析中通過(guò)RT-PCR及免疫組化法分析低分子量絡(luò)氨酸磷酸酶在宮頸鱗癌組織表達(dá)。

在本研究中，RT-PCR表達(dá)研究結(jié)果顯示，HaCat細(xì)胞系中LMW-PTPmRNA表達(dá)明顯低于C33A、SiHa以及CaSKi宮頸癌細(xì)胞系，而且LMW-PTPmRNA表達(dá)在C33A、SiHa細(xì)胞系表達(dá)差異不明顯，而且免疫組化結(jié)果顯示LMW-PTP蛋白在C33A、SiHa細(xì)胞系表達(dá)同樣無(wú)明顯差異(P＞0.05)，提示宮頸鱗癌細(xì)胞系中LMW-PTPmRNA表達(dá)與感染無(wú)明顯相關(guān)性。在以往分析LMW-PTP表達(dá)與臨床癥狀關(guān)系中，不少研究指出LMW-PTP表達(dá)情況與患者組織學(xué)程度以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況相關(guān)［12］。本研究證實(shí)了這一點(diǎn)，分析LMWPTP與患者臨床病例特征關(guān)系，研究結(jié)果表明子宮頸鱗癌組織中LMW-PTP表達(dá)與年齡、臨床分析無(wú)明顯關(guān)系，與患者組織學(xué)程度密切相關(guān)(P＜0.05)。宮頸上皮瘤變是正常宮頸組織到宮頸鱗癌病變發(fā)展中形成的一系列病理變化［13］，因此可以認(rèn)為觀察LMW-PTP在正常宮頸上皮組織、宮頸上皮瘤變和宮頸鱗癌的表達(dá)能夠深入分析，LMW-PTP表達(dá)與宮頸鱗癌關(guān)系。在分析LMW-PTP作用研究中，認(rèn)為不同腫瘤組織中LMW-PTP表達(dá)不同，從不同分化級(jí)別宮頸鱗癌LMWPTP表達(dá)中發(fā)現(xiàn)中分化子宮頸鱗癌組織中LMW-PTP蛋白表達(dá)明顯高于高分化組織(P＜0.05)，低分化子宮頸鱗癌組織中LMW-PTP表達(dá)明顯高于中分化子宮頸鱗癌組織(P＜0.05)，提示LMW-PTP與宮頸鱗癌進(jìn)展密切相關(guān)。推測(cè)LMW-PTP能夠起到細(xì)胞內(nèi)蛋白磷酸化作用，能夠調(diào)控宮頸癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，也可能是因?yàn)長(zhǎng)MW-PTP破壞了細(xì)胞間鈣橋連接，導(dǎo)致宮頸癌細(xì)胞浸潤(rùn)。

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·論著·

The expression and clinical significance of low molecular weight protein tyrosine phosphatase in cervical carcinoma

ZHUANG Yongju.
The Fourth Hospital of Wuxi City，Affiliated Hospital of Jiangnan University，Jiangsu，Wuxi 214000，China

【Abstract】ObjectiveTo investigate the expression and prognostic value of low molecular weight tyrosine phosphatase (LMW-PTP) in cervical squamous cell carcinoma (CSCC).Methods One hundred and sixty cases of paraffin specimens of our hospital from March 2008 to August 2014 were enrolled in the study.These paraffin specimens were divided into control group，cervical intraepithelial neoplasia phaseⅠgroup，phaseⅡ～Ⅲgroup and cervical squamous cell carcinoma group according to pathological changes degree.The levels of low molecular weight tyrosine phosphatase were detected by RT-PCR and immunohistochemistry.Results The expression levels of LMW-PTPmRNA in C33A，SiHa and CaSki cell lines were significantly higher than those in HaCaT cells (P＜0.05)，and the expression levels of LMW-PTP were the lowest in HaCat cells，as compared with those in the other groups (P＜0.05).The expression levels of LMW-PTP in C33A，SiHa and CaSki cell lines were increased，however，the expression of LMW-PTP in HaCaT cells was weakly positive，which in C33A cells，SiHa cells，CaSKi cells was obviously increased.The expression levels of LMW-PTP were gradually increased during the changes from normal cervical squamous epithelium to CSCC，moreover，the expression levels of LMW-PTPmRNA in moderately differentiated CSCC tissues were significantly higher than those in well differentiated CSCC tissues (P＜0.05)，furthermore，which in poorly differentiated CSCC tissues were significantly higher than those in moderately differentiated CSCC tissues (P＜0.05).Besides the expression levels of LMW-PTP in CSCC tissues were closely correlated to histological differentiation degree of patient with CSCC (P＜0.05).ConclusionThe low molecular weight tyrosine phosphatase plays an important role in the development of CSCC，which suggests that low molecular weight tyrosine phosphatase is helpful to improve prognosis of patients with CSCC.

【Key words】cervical squamous cell carcinoma; low molecular weight tyrosine phosphatase; immunohistochemistry

(收稿日期:2015－09－15)

doi:10.3969/j.issn.1002－7386.2016.04.006

【中圖分類(lèi)號(hào)】R 737.33

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【文章編號(hào)】1002－7386(2016) 04－0502－03

作者單位: 214000江南大學(xué)附屬醫(yī)院，江蘇省無(wú)錫市第四人民醫(yī)院