李　琳　邢　輝　覃小敏　周　敏

441021 湖北文理學院醫(yī)學院襄陽市中心醫(yī)院

?

CK19表達與子宮頸癌前哨淋巴結轉移的關系

李琳邢輝覃小敏周敏

441021 湖北文理學院醫(yī)學院襄陽市中心醫(yī)院

【摘要】目的觀察CK19表達與子宮頸癌前哨淋巴結轉移的關系。方法回顧性分析行宮頸癌根治術治療的46例宮頸癌患者的臨床資料，采用mRNA和免疫組化檢測CK19在子宮頸前哨淋巴結中的表達。結果RT-PCR分析結果顯示82個淋巴結中，11個淋巴結CK19高表達，71個淋巴結CK19低表達。免疫組化染色結果顯示，11個CK19高表達淋巴結免疫組化染色陽性，71個CK19低表達淋巴結免疫組化染色陰性。多因素分析結果表明CK19高表達與前哨淋巴結轉移呈正相關(P<0.05)。結論CK19表達與宮頸癌患者淋巴結轉移呈正相關，CK19有可能稱為宮頸癌轉移的分子標記物。

【關鍵詞】細胞角蛋白19；子宮頸癌；前哨淋巴結；轉移

(ThePracticalJournalofCancer,2016,31:387～389)

目前很多婦科腫瘤的預后與淋巴結轉移的發(fā)生發(fā)展有著密切的關系，這種重要的臨床指示提示我們對這方面進行研究，我們推測可能是由于某種原因導致這種生物行為，有些研究表明，在評估乳腺癌或者黑色素瘤患者時發(fā)現(xiàn)，這些患者病情復發(fā)的1個重要原因時是由于其發(fā)生微轉移，這種轉移的腫瘤大小多數(shù)是0.2～2 mm，與淋巴結轉移呈陰性。那么，臨床上的淋巴結切除在婦科腫瘤中的作用仍然是非常重要的，它直接關系著腫瘤分級[1-2]。例如宮頸癌，子宮內膜癌。在病理分級下確定其手術范圍直接影響著患者的5年生存率。

淋巴結的轉移被視為婦科腫瘤疾病的預后指標，所以組織病理分型的確定能有效幫助患者確定可靠地治療方案，目前很大一部分研究集中在淋巴結微轉移的研究上，但是如何確定其淋巴結轉移是困擾廣大醫(yī)療工作者的1個重大因素[3-4]。CK19屬于細胞角蛋白1型，其分子量多集中在40～56 kD，CK19多分布在官腔上皮組織中，如，膽管，胰腺，腎小管和胃腸道粘膜處，CK19表達在鱗癌組織中[5]。CK19作為預后的指標已經(jīng)被用作甲狀腺乳頭癌，肝細胞癌和腸癌中[6-7]。但是CK19在子宮頸癌前哨淋巴結中的轉移還未被研究清楚。

1材料與方法

1.1臨床資料

回顧性分析2011年5月到2013年5月于我院婦瘤科進行宮頸癌根治術治療的宮頸癌患者46例，對照患者是有病理活檢后確認為良性腫瘤的組織，所有操作均符合倫理規(guī)范。其中鱗癌32例，乳頭狀腺癌9例，鱗狀細胞癌角質化3例，鱗腺癌2例。臨床分期：Ⅰb1期27例，Ⅰb2期15例，Ⅱa1期2例，Ⅱa2期例。

1.2方法

1.2.1Semi-quantitation PCR試劑及方法逆轉錄試劑盒購自TaKaRa公司，引物CK19，F(xiàn):5′-TCGACAACGCCCGTCTG-3′，R:5′-CCACGCTCATGCGCAG-3′；GAPDH，F(xiàn):GGTGAAGGTCGGTGTGAACG；R:CTCGCTCCTGGAAGATGGTG。合成于Invitrogen,USA。稱取等量組織，采用Trizol法提取RNA，RNA略干后加入20 μL DEPC水。待RNA充分溶解后測量RNA含量和純度。用TaKaRa公司的逆轉錄試劑盒逆轉錄成cDNA。

1.2.2免疫組化脫蠟：按照常規(guī)脫蠟方法，在二甲苯、無水乙醇、95%乙醇、90%乙醇、85%乙醇、80乙醇脫蠟，大約每次時間為10 min?？乖迯停篜BS洗后，加入3%H2O2，37 ℃浸泡10 min，從而除去內源性的過氧化氫酶，PBS洗，再加入檸檬酸緩沖液，高溫高壓修復5 min，冷卻至室溫。血清封閉： PBS洗，5 min，洗3次，擦干組織周圍的PBS液，然后10%BSA封閉，放入37 ℃溫箱中1 h。加一抗：將溫箱中的載玻片取出，用吸水紙擦干載玻片反面和正面組織周圍的血清，加一抗，加完一抗(CK19，購自于santa)后于4 ℃冰箱中保存過夜。加二抗：將載玻片從冰箱中取出，放入PBS中洗3次，每次5 min，擦干組織周圍的PBS后加上二抗，然后置于37 ℃溫箱中1 h。加顯色劑：將片子從溫箱中取出,放入PBS中洗3次，每次5 min，擦干組織周圍的PBS后加上DAB顯色劑。

1.3統(tǒng)計學處理

應用SPSS 11.0統(tǒng)計軟件包處理，統(tǒng)計學方法采用t檢驗，Pearson相關分析，χ2檢驗。

2結果

2.1CK19在前哨淋巴結中的表達

在提取組織RNA經(jīng)由逆轉錄試劑盒逆轉成cDNA后進行RT-PCR分析，在檢測的82個淋巴結中，我們發(fā)現(xiàn)11個淋巴結CK19高表達，71個淋巴結CK19低表達，見圖1。

2.2免疫組化檢測CK19在組織中的表達情況

82個前哨淋巴結免疫組化染色結果顯示：11個CK19高表達淋巴結免疫組化染色陽性，71個CK19低表達淋巴結免疫組化染色陰性。

1為高表達，2為低表達。

2.3多因素分析結果

多因素分析結果表明CK19高表達與前哨淋巴結轉移呈正相關(P<0.05)，見表1。

表1　多因素分析結果

3討論

宮頸癌是人類疾病中惡性程度較高的一類疾病，其主要是易發(fā)生轉移，特別是淋巴結的轉移是導致其難治愈的一個主要原因。轉移的腫瘤通過血液，淋巴管，進而形成多種其他腫瘤，淋巴管的轉移包括一系列的復雜過程，包括，①原位癌惡性腫瘤細胞擴散至旁邊淋巴管；②腫瘤細胞通過淋巴管轉運至鄰近的淋巴結；③腫瘤細胞在淋巴結中的著落；④轉移性的腫瘤在淋巴結中的擴散[8]。

CK19最近研究較為廣泛，在最近的研究多集中在CK19家族在乳腺瘤和肝癌及腸癌中的作用[9-10]。CK19是細胞角蛋白家族中的一員，其包繞著上皮細胞，在早期的胚胎發(fā)育過程中內分泌細胞在胰腺中高表達CK19，這些表達會隨著妊娠期的到來表達減弱甚至消失，但是所有的管腔和腺上皮細胞均表達CK19[11-13]。特別是在在淋巴結管腔中的表達具有非常重要的研究意義。

基于此本研究展開在宮頸癌前哨淋巴結中進行CK19的研究，在我們的研究中我們首先對宮頸癌患者轉移淋巴結組織進行mRNA的檢測，在我們的檢測中有患者高表達也存在低表達患者，進而利用免疫組化表達檢測，在兩項檢測均為高表達患者中進行歸類，然后進行臨床數(shù)據(jù)的整理，在我們統(tǒng)計后發(fā)現(xiàn)CK19高表達的患者，發(fā)生淋巴結轉移也較多，表達低的患者多數(shù)未發(fā)生轉移或發(fā)生轉移較少，且具有統(tǒng)計學比較意義(P=0.046)。所以我們初步的出結論在宮頸癌轉移患者體中CK19表達與淋巴結轉移呈正相關。

通過本研究其很多同仁的研究必將更加證實CK19與宮頸癌轉移的關系，認為在今后研究愈加深入后CK19極有可能稱為宮頸癌轉移的分子標記物。

參考文獻

[1]Reichert M,Rustgi AK.Pancreatic ductal cells in development,regeneration,and neoplasia〔J〕.J Clin Invest，2011,121(12):4572-4578.

[2]Han X,Zhao J,Ji Y,et al.Expression of CK19 and KIT in resectable pancreatic neuroendocrine tumors〔J〕.Tumour Biol，2013,34(5):2881-2889.

[3]Zand B,Euscher ED,Soliman PT,et al.Rate of para-aortic lymph node micrometastasis in patients with locally advanced cervical cancer〔J〕.Gynecol Oncol，2010,119(3):422-425.

[4]Diaz JP,Gemignani ML,Pandit-Taskar N,et al.Sentinel ly-

mph node biopsy in the management of early-stage cervical carcinoma〔J〕.Gynecol Oncol,2011,120(3):347-352.

[5]Khoury-Collado F,Murray MP,Hensley ML,et al.Sentinel lymph node mapping for endometrial cancer improves the detection of metastatic disease to regional lymph nodes〔J〕.Gynecol Oncol,2011,122(2):251-254.

[6]Hertel H.Cervical cancer and the role of lymph node staging cons sentinel concept〔J〕.Int J Gynecol Cancer,2010,20(11 Suppl 2):S37-38.

[7]Matsuura N1,Uchinaka A,Mori S.A novel diagnostic method for detection of lymph node metastases〔J〕.Nihon Geka Gakkai Zasshi，2013,114(1):4-8.

[8]American Joint Committee on Cancer:AJCC Cancer Staging Manual〔M〕.6th ed,New York:Springer,2002:157-164.

[9]Pappa KI1,Jacob-Hirsch J,Vlachos GD,et al.Expression profiling of vulvar carcinoma:clues for deranged extracellular matrix remodeling and effects on multiple signaling pathways combined with discrete patient subsets〔J〕.Transl Oncol，2011,4(5):301-313.

[10]McCoy A,Finan MA,Boudreaux FT,et al.The incidence and clinical significance of lymph node micrometastases determined by immunohistochemical staining in stage I-lymph node negative endometrial cancer〔J〕.Histol Histopathol,2012,27(2):181-185.

[11]Vilardell F,Novell A,Martin J,et al.Importance of assessing CK19 immunostaining in core biopsies in patients subjected to sentinel node study by OSNA〔J〕.Virchows Arch，2012,460(6):569-575.

[12]Remoundos DD,Joshi M,Ahmed F,et al.CK19 testing prior to OSNA analysis:to stain or not to stain〔J〕.Virchows Arch，2013,462(1):123-124.

[13]Vilardell F,Matias-Guiu X.CK19 expression should be te-

sted prior to OSNA analysis of sentinel lymph nodes in breast cancer〔J〕.Virchows Arch,2013,462(1):121.

(編輯：吳小紅)

Relationship between the Expression of CK19 and Sentinel Lymph Node Metastasis of Cervical Cancer

LILin,XINGHui,QINXiaomin,etal.

XiangyangCentralHospital,Xiangyang,441021

【Abstract】ObjectiveTo detect the relationship between the expression of CK19 and sentinel lymph node metastasis of cervical cancer.MethodsThe clinical data of 46 patients with cervical cancer treated by radical resection were retrospectively analyzed.The expression of CK19 in sentinel lymph node metastasis of cervical cancer was detected by mRNA and immunohistochemistry.ResultsRT-PCR analysis showed that in 82 lymph nodes,there were 11 lymph nodes with high expression of CK19,71 lymph nodes with low expression of CK19.Immunohistochemical staining showed that 11 CK19 high expression lymph nodes were positive for immunohistochemical staining,71 CK19 low expression lymph nodes were negative for immunohistochemical staining.Multivariate analysis showed that CK19 expression was positively correlated with sentinel lymph node metastasis(P<0.05).ConclusionCK19 expression is positively correlated with lymph node metastasis in patients with cervical cancer.CK19 may be a molecular marker for cervical cancer metastasis.

【Key words】CK19;Cervical cancer;Sentinel lymph node;Metastasis

(收稿日期2015-06-09修回日期 2016-01-25)

中圖分類號：R737.33

文獻標識碼：A

文章編號：1001-5930(2016)03-0387-03

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2016.03.012

通訊作者：周敏