劉元獻(xiàn)李許娜吳新風(fēng)連純利胡鎮(zhèn)何強(qiáng)亮劉媛媛熊雅嵐

天竺霧化劑對(duì)慢性咽炎動(dòng)物模型的行為學(xué)及病理形態(tài)學(xué)影響*

劉元獻(xiàn)1李許娜1吳新風(fēng)2連純利2胡鎮(zhèn)2何強(qiáng)亮2劉媛媛2熊雅嵐2

目的 觀察天竺霧化劑對(duì)慢性咽炎模型動(dòng)物的治療效應(yīng)。方法 40只新西蘭兔隨機(jī)分為模型組、空白組、布地奈德組、天竺霧化劑組、自然恢復(fù)組。除空白組外，其余各組動(dòng)物均建立慢性咽炎模型。造模完成后，處死并檢測(cè)空白組和模型組動(dòng)物；布地奈德組以布地奈德噴劑局部噴霧，天竺霧化劑組以天竺霧化劑局部噴霧治療，自然恢復(fù)組不予藥物治療，療程10天。治療結(jié)束后處死所有動(dòng)物，收集標(biāo)本以供檢測(cè)。觀察比較5組動(dòng)物的行為學(xué)和咽黏膜病理形態(tài)學(xué)變化。結(jié)果與自然恢復(fù)組比較，天竺霧化劑組、布地奈德組動(dòng)物行為學(xué)變化差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），但二處理組間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。病理形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果也顯示，布地奈德、天竺霧化劑可以有效緩解慢性咽炎動(dòng)物咽黏膜的病理形態(tài)學(xué)變化。結(jié)論 天竺霧化劑可以有效改善慢性咽炎動(dòng)物模型的癥狀，減輕黏膜腫脹及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，促進(jìn)咽黏膜組織修復(fù)。

慢性咽炎；天竺霧化劑；療效；實(shí)驗(yàn)研究

慢性咽炎是咽部組織慢性炎癥，以咽部不適，咽干，咽癢或者異物感，晨起刷牙惡心干嘔等為主要臨床表現(xiàn)。檢查可見(jiàn)咽部黏膜充血，咽后壁淋巴組織增生。急性咽炎反復(fù)發(fā)作、臨近器官炎性分泌物刺激，鼻通氣困難張口呼吸，長(zhǎng)期的煙酒刺激，空氣中的粉塵顆粒及刺激性氣體可以導(dǎo)致慢性咽炎。因慢性咽炎病程久，易反復(fù)，嚴(yán)重影響了患者的工作、學(xué)習(xí)、生活，并給患者造成了不同程度的心理負(fù)擔(dān)，慢性咽炎的預(yù)防和治療方法研究工作愈顯重要。本研究主要通過(guò)觀察天竺霧化劑對(duì)慢性咽炎的兔子的咽部病理形態(tài)學(xué)及行為學(xué)的影響，了解天竺霧化劑的治療作用。

材料與方法

1實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康普通級(jí)雌性新西蘭兔40只,體重2.0～2.5kg，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 藥物

天竺霧化劑（深圳市中醫(yī)院制劑室提供，生產(chǎn)批號(hào)：20150915）。吸入用布地奈德混懸液（2ml：1mg/支，澳大利亞 AstraZeneca Pty Ltd，生產(chǎn)批號(hào)：3185471705）。

1.3 試劑

氨水（濃度：25%～28%，濟(jì)寧宏明化學(xué)試劑有限公司）；蒸餾水（鄭州津北化工有限公司）；松節(jié)油（濃度：25%～27%，無(wú)錫市展望化工試劑有限公司，批號(hào)：150601）。

1.4 儀器

電子稱(chēng)（廣東香山衡器集團(tuán)有限公司）、喉頭噴霧器（江蘇平安有限公司）、扁桃體針、XD-300冷光源（南京亞南特種照明電器廠）、0°硬性鼻內(nèi)鏡（tiansong）、BX43型生物顯微鏡（日本制造）、自制開(kāi)口器、壓舌板等。

2實(shí)驗(yàn)方法

2.1 造模

將40只兔子隨機(jī)分為5組，每組8只。分別是模型組、空白組、布地奈德組、天竺霧化劑組、自然恢復(fù)組。模型組：第1～15天采用2.5%氨水噴兔子咽部，每天上午、下午各1次，每次3掀，第8天在其咽部注射松節(jié)油0.5ml,第16天注射空氣栓子處死后立即取下咽部黏膜及其下組織作切片以供病理觀察[1]?？瞻捉M：第1～15天用蒸餾水噴兔子咽部，每天上午、下午各1次。每次3掀，第16天處理同模型組。

2.2 治療

天竺霧化劑組：造模方法同模型組，第16天開(kāi)始用天竺霧化劑（根據(jù)人與家兔體表面積比率系數(shù)換算等效劑量[2]）噴兔子咽部，每天上午、下午各1次，每次3掀，第26天處理同模型組。布地奈德組：第1～15天造模方法同模型組，第16天開(kāi)始用布地奈德混懸液（根據(jù)人與家兔體表面積比率系數(shù)換算等效劑量）噴兔子咽部，每天上午、下午各1次，每次3掀，第26天處理同模型組。自然恢復(fù)組：造模方法同模型組，第16天開(kāi)始不予藥物治療，正常飼養(yǎng)，第26天處理同模型組。

2.3 觀察指標(biāo)

2.3.1 日常觀察

觀察兔子的精神狀態(tài)，有無(wú)搔抓口部，記錄每天的食量、觀察噴喉后30分鐘內(nèi)的飲水狀態(tài)，口咽部的分泌物的情況。分別在造模第15天、治療第10天在硬性鼻內(nèi)鏡下觀察兔子的咽部黏膜情況。

2.3.2 病理形態(tài)學(xué)觀察

咽部黏膜及以下組織取出后，用10%甲醛溶液固定，經(jīng)修塊、流水沖洗、脫水、透明、浸蠟、石蠟包埋、石蠟切片，HE染色后在光學(xué)顯微鏡下觀察咽部組織各層的病理形態(tài)變化（由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心比較醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室承擔(dān)）。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1日常觀察

1.1 模型組

造模第1～7天，兔子的精神狀態(tài)好，較活潑，每次噴氨水后，飲水頻繁，但是總飲水量不多，食量稍減少，口腔見(jiàn)少量分泌物。第8天在其咽部注射松節(jié)油后，兔子的飲水量、食量明顯下降，自主活動(dòng)減少，表情淡漠，搔抓口部頻繁，口腔分泌物逐漸增多，第12天達(dá)到高峰，個(gè)別兔子口腔分泌物較粘稠。第15天在纖維喉鏡下觀察其咽部黏膜呈暗紅色，光澤度欠佳，黏膜分泌物增多。

1.2 空白組

造模第1～15天，精神狀態(tài)良好，自主活動(dòng)正常，無(wú)搔抓口部等動(dòng)作，飲水、食量前后無(wú)變化。第15天在纖維喉鏡下觀察其咽部黏膜淡紅、濕潤(rùn)，表面光滑，未見(jiàn)充血、腫脹等現(xiàn)象。

1.3 天竺霧化劑組、布地奈德組、自然恢復(fù)組

第1～15天表現(xiàn)同模型組，第16天開(kāi)始，兔子精神狀態(tài)逐漸好轉(zhuǎn)，飲水量增多，自發(fā)活動(dòng)增多，搔抓口部活動(dòng)減少，口腔分泌物減少，食量變化如表1、圖1，三組兔子食量較治療前均有提高，天竺霧化劑組、布地奈德組兩組與自然恢復(fù)組比較，有顯著性差異（P＜0.01）。其中天竺霧化劑組與布地奈德組比較，P＞0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 三組兔子食量治療前后對(duì)比（±s）

表1 三組兔子食量治療前后對(duì)比（±s）

組別 n 治療前天竺霧化劑組布地奈德組自然恢復(fù)組888 74.8±6.85 75.1±7.79 75.0±7.11治療后107.2±9.37 107.7±10.48 87.3±7.44 t值7.895 7.061 3.380 P值0.000 0.000 0.002

圖1 三組兔子治療前后食量的變化

2病理形態(tài)學(xué)表現(xiàn)

2.1 造模后兔子咽部病理形態(tài)表現(xiàn)

模型組：咽部黏膜上皮呈釘狀突增生，部分上皮脫落、壞死。固有層和黏膜下層水腫，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯，以淋巴細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞為主，小血管增生擴(kuò)張，黏膜下層內(nèi)黏液腺分泌活躍，（圖2）。

空白組：咽部組織各層分界清晰，由外到內(nèi)可分為外膜層、肌層、黏膜下層、黏膜層。黏膜下層為疏松結(jié)締組織，內(nèi)含豐富的腺體，腺體無(wú)增生和萎縮，黏膜層又分為上皮層和固有層，上皮層為未角化復(fù)層扁平上皮，固有層為致密結(jié)締組織，內(nèi)含少量血管，可見(jiàn)分泌腺導(dǎo)管，（圖3）。

圖2 模型組

圖3 空白組

圖4 天竺霧化劑組

圖5 布地奈德組

圖6 自然恢復(fù)組

2.2 治療后兔子咽部病理學(xué)形態(tài)觀察

天竺霧化劑組：咽部黏膜上皮釘狀突無(wú)明顯增生，少數(shù)兔子固有層輕度腫脹、血管充血及炎細(xì)胞浸潤(rùn)，腺體分泌增生不明顯，未見(jiàn)纖維增生表現(xiàn)。（圖4）

布地奈德組：病理表現(xiàn)基本同天竺霧化劑組。（圖5）

自然恢復(fù)組：多數(shù)兔子咽部黏膜上皮釘狀突輕度增生，固有層可見(jiàn)輕到中度的充血腫脹，血管增生擴(kuò)張，炎細(xì)胞浸潤(rùn)，腺體分泌活躍，少數(shù)兔子可見(jiàn)纖維增生。（圖6）

如表2可見(jiàn)，天竺霧化劑組與布地奈德組兔子咽部黏膜病變恢復(fù)較好，黏膜上皮增生、腺體分泌情況與自然恢復(fù)組比較，有明顯差異（P＜0.05）。

表2 三組兔子治療后病理形態(tài)結(jié)果

討論

慢性咽炎是我科的常見(jiàn)病，癥狀多種多樣，包括咽不適感、異物感、瘙癢、灼熱感、干燥、疼痛感等，發(fā)病率高，纏綿難愈，不僅影響患者的工作和生活，嚴(yán)重者可導(dǎo)致心理障礙[3]。本病屬中醫(yī)“慢喉痹”范疇，《內(nèi)經(jīng)》中已有“嗌干及痛”、“咽喉干燥”等描述。本病的病機(jī)，多因“風(fēng)熱喉痹”反復(fù)發(fā)作或治不徹底，致邪熱留戀，熏蒸咽喉為患?；馃嵘险?，煉液成痰，加之久病成瘀，最后導(dǎo)致痰火郁結(jié)。因此，本病的治療主要以清熱化痰，理氣解郁為法。根據(jù)唐容川在《血證論》中所云：“瘀則作干，瘀能致燥，津血同源，瘀則咽干”，在臨證中多選清寒甘潤(rùn)之品，而慎用苦寒直折陰津。在此理論基礎(chǔ)上，劉元獻(xiàn)根據(jù)多年臨床經(jīng)驗(yàn)，研制出天竺霧化劑，其組成為：天竺黃、瓜蔞皮、木香、兩面針、千年健、僵蠶、葶藶子、魚(yú)腥草等。其中，天竺黃、瓜蔞皮以化痰結(jié)散,稀釋稠痰，止咳清嗓；兩面針，千年健，僵蠶以通絡(luò)祛風(fēng)，消腫利咽；同時(shí)兩面針的乙醇提取物，對(duì)溶血性鏈球菌和金黃色葡萄球菌有較強(qiáng)的抑制作用[4]；木香以芳香理氣，調(diào)暢氣機(jī)，氣順則血行；葶藶子降氣祛痰，利水消腫；薄荷清利咽喉之要藥；魚(yú)腥草清熱祛痰利咽，藥理研究顯示,該藥對(duì)溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌、流感桿菌、卡他球菌、肺炎雙球菌有明顯抑制作用,對(duì)大腸桿菌、痢疾桿菌、傷寒桿菌有抑制作用，對(duì)多種病毒也有抑制作用[5-8]。

本研究動(dòng)物造模結(jié)果提示，慢性咽炎可導(dǎo)致咽部黏膜血管周?chē)馨图?xì)胞、白細(xì)胞及漿細(xì)胞浸潤(rùn)，黏膜及黏膜下結(jié)締組織增生。也可致黏液腺肥大，分泌功能亢進(jìn)，黏液分泌增多。從行為學(xué)方面觀察，經(jīng)天竺霧化劑治療后，兔子飲食及體重增加，飲水量增多，自發(fā)活動(dòng)增多，搔抓口部活動(dòng)減少，口腔分泌物減少，與自然恢復(fù)組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。從咽部病理學(xué)方面觀察，經(jīng)天竺霧化劑治療后，家兔咽部黏膜咽部黏膜病變恢復(fù)較好，黏膜上皮增生、腺體分泌情況與自然恢復(fù)組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。綜上，本研究提示天竺霧化劑可以有效地抑制炎癥反應(yīng)，減輕黏膜充血，減少炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及黏液分泌，為天竺霧化劑的臨床應(yīng)用提供了理論支持。天竺霧化劑采用局部用藥，直接作用于病灶，用法簡(jiǎn)便，且副作用小，具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值，可進(jìn)一步推廣應(yīng)用，但其改善咽炎癥狀的具體機(jī)制，還需深入研究。

1 彭順林,鐘渠,熊大經(jīng).慢性咽炎動(dòng)物模型研究[J].成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),1999,22(1):51-53

2 李儀奎.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,2006:13.

3 陳開(kāi)森，蔡慶，呂小林，等．黃連金銀花魚(yú)腥草和大青葉對(duì)陽(yáng)性球菌作用的試驗(yàn)研究 [J]．實(shí)用中西醫(yī)結(jié)合臨床,2009，9(3)：87-88.

4 楊倉(cāng)良．毒藥本草[M]．北京：中國(guó)中醫(yī)藥出版社，1983: 431.

5 熊大勝，席在星，鄧應(yīng)威．魚(yú)腥草提取物抑菌作用研究[J]．常德師范學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科版)，2002，14：60.

6 曹郡雙，秦榮和．魚(yú)腥草的藥理作用及臨床應(yīng)用 [J]．現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2001，10(6)：89-90.

7 孫志杰．魚(yú)腥草素鈉聯(lián)合青霉素G對(duì)金黃色葡萄球菌的體外抗菌作用研究[J]．中國(guó)醫(yī)藥指南，2012，10(29)：37-39.

8 劉君，王家東．慢性咽炎的治療[J]．上海醫(yī)藥，2010，30 (4)：186-187

（收稿:2016-04-20 修回：2016-05-04）

Therapeutic effects of Tianzhu aerosol on rabbit models of chronic pharyngitis

LIU Yuanxian,LI Xuna,WU Xinfeng,LIAN Chunli,HU Zhen,HE Qiangliang,LIU Yuanyuan,XIONG Yalan Department of Otolaryngology,Shenzhen Hospital Affiliated to Guangzhou University of Chinese Medicine, 518033,China

Objective To observe the therapeutic effects of Tianzhu aerosol(TZA)on rabbits with chronic pharyngitis based on an experimental study.Methods Forty New Zealand rabbits were randomly divided into 5 groups,i.e.model group(MG),blank group (BG),budesonide treating group(BTG),TZA treating group(TTG),and naturally recovering group(NRG).Except the animals in BG, all other rabbits were prepared as models of chronic pharyngitis.When modeling finished,animals in MG and BG were put into death to detect the associated indexes.Then,animals in BTG were treated by budesonide and those in TTG treated by TZA respectively, with the therapeutic course lasted for 10 days,while ones in NRG untreated at all.By the end of therapeutic course,rabbits in these 3 groups were all executed to collect samples for determination of pathohistological indicators.At last,a comparative study was carried out among these 5 groups to evaluate the changes in behaviors and pathohistological indicators.Results As compared with that of NRG,the changes in behaviors of TTG and BTG were markedly statistical significance(P＜0.01),while there was no such statistical significance(P＞0.05)when compared between these two treating groups.Meanwhile,it could be concluded from the pathohistological study that interfering with either budesonide or TZA had brought about effectively improved changes in pathological morphology among the animals of these 2 groups.Conclusion Tianzhu aerosol can effectively improve the symptoms of chronic pharyngitis in animal models,alleviate mucosal swelling and inflammatory cells infiltrating,and promote healing of inflamed pharynx mucosa.

Chronic pharyngitis;Tianzhu aerosol;Therapeutic effect;Experimental study

10.16542/j.cnki.issn.1007-4856.2016.03.002

廣東省中醫(yī)藥管理局立項(xiàng)課題（NO.20132025）

1廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬深圳市中醫(yī)院耳鼻咽喉科（518033）

2廣州中醫(yī)藥大學(xué)在讀碩士研究生

劉元獻(xiàn)，主任醫(yī)師.Email:liuyx2011@126.com