呂　樂，布熱米古麗·買買提，艾爾肯·依不拉音*(.新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，烏魯木齊　8300；.新疆喀什地區(qū)人民醫(yī)院藥劑科，喀什　844000)

?

新疆吐魯番、喀什葡萄樹傷流液多糖分離純化及其抗氧化活性比較研究

呂樂1，布熱米古麗·買買提2，艾爾肯·依不拉音1*(1.新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，烏魯木齊830011；2.新疆喀什地區(qū)人民醫(yī)院藥劑科，喀什844000)

摘要：目的確定新疆葡萄樹傷流液多糖含量，探究吐魯番無核白和喀什木納格萄萄樹傷流液多糖及其純化組分的抗氧化活性。方法采用蒽酮-硫酸法檢測多糖含量，利用醇沉法和改進(jìn)的Sevage法制備粗多糖，經(jīng)過DEAE-52纖維素柱對粗多糖進(jìn)行分離純化，以羥自由基、超氧自由基、DPPH·自由基、亞硝基自由基、ABTS·自由基為指標(biāo)檢測多糖組分及原液的抗氧化能力。結(jié)果吐魯番無核白和喀什木納格葡萄樹傷流液中多糖含量分別為114和193 μg·mL-1，經(jīng)過DEAE-52纖維素柱分離分別得到8個多糖組分，其中兩者4個含量較高的多糖組分和原液都具有不同程度的抗氧化活性，且對羥自由基的清除能力強(qiáng)于對其他4種自由基的清除能力，兩地葡萄樹傷流液的抗氧化活性存在差異。結(jié)論吐魯番無核白和喀什木納格葡萄樹傷流液的多糖組分均具有一定的抗氧化活性，并且其抗氧化活性存在差異。

關(guān)鍵詞：多糖；葡萄樹傷流液；純化；抗氧化活性

葡萄是新疆特色水果，產(chǎn)量居全國第一。在每年的3月下旬到4月上旬，從葡萄樹樹枝的傷口處會自然流出1種無色透明的微酸性液體，該液體就是葡萄樹傷流液。葡萄樹傷流液在民間被使用，將其直接飲之，可用于治療氣管炎、乏力、便秘；直接抹在頭發(fā)上，可使頭發(fā)變黑。維吾爾醫(yī)認(rèn)為其具有滋補(bǔ)強(qiáng)壯、軟堅散結(jié)和補(bǔ)肝利膽的療效，也有人將其作為化妝品的穩(wěn)定劑[1]。每棵葡萄樹每年可以流出幾公斤甚至是十幾公斤的傷流液，其資源很豐富，具有很強(qiáng)的抗羥自由基能力和熱穩(wěn)定性。無色透明液體不用化學(xué)處理直接可以使用，是較為理想的天然抗氧化劑[2]。研究表明，多糖不僅是生物體的重要組成部分，在向生命體提供能量和參與組織構(gòu)成的同時，還具有許多重要的生理功能，如降血糖、降血脂、抗輻射、抗氧化、保肝、抗腫瘤、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫力等作用[3-9]。其中抗氧化作用是多糖的重要生物活性，也是目前多糖研究的熱點之一。

1儀器與材料

1.1儀器EYELA水浴鍋SB-1000、UV-2550紫外-可見分光光度儀，AEL-160電子分析天平(日本，島津)；HH-S4數(shù)據(jù)恒溫水浴鍋(金壇市醫(yī)療儀器廠)；EYELA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀N-1001，EYELA冷卻水循環(huán)裝置CA-IIII (上海愛朗儀器有限公司)；SHB-Ⅲ循環(huán)式真空泵(西安太康生物科技有限公司)；DZF-6090真空干燥箱(上海一恒科學(xué)儀器有限公司)；離心儀-Heraeus MultifugeX3R(美國，賽默飛世爾科技)；GC-2010Plus氣相色譜儀(Shimadzu，氫火焰離子化檢測器)。

1.2試藥D-無水葡萄糖對照品, 亞硝酸鈉(天津市津北精細(xì)化工有限公司)；蒽酮(上海工碩生物技術(shù)有限公司)；濃硫酸(上海實驗試劑有限公司，優(yōu)級純) ；甘露糖(Man)、鼠李糖(Rha)、半乳糖(Gal)、木糖(Xyl)、阿拉伯糖(Ara)(上海藍(lán)季科技發(fā)展有限公司)；DEAE-52纖維素柱(北京瑞達(dá)恒輝科技發(fā)展有限公司)；·OH試劑盒(南京建成生物工程研究所)；二苯代苦味肼基自由基DPPH·(Sigma公司)；三羥甲基氨基甲烷 (Tris，上海源聚生物科技有限公司)；對氨基苯磺酸(天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所)；鹽酸萘乙二胺(天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司)；氫氧化鈉、濃鹽酸、氯化鈉、乙酸乙酯、無水乙醇、丙酮、乙醚、磷酸、蒸餾水等試劑均為分析純。

1.3材料葡萄樹傷流液,2013年4月初采自新疆吐魯番和喀什。樣品采集方法：采用自然收集法，即在葡萄樹枝自然傷口或人為傷口處收集靠根壓溢出的傷流液，接入無菌保鮮袋，集中收集，冷凍保存，備用。

2實驗方法

2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制精密稱取105 ℃干燥至恒質(zhì)量的D-無水葡萄糖對照品25 mg，置于100 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得0.25 mg·mL-1的葡萄糖儲備液。取上述儲備溶液1 mL，加水稀釋定容至10 mL量瓶中，即得0.025 mg·mL-1的葡萄糖對照品溶液。精密稱取1.000 g蒽酮，置于50 mL棕色量瓶中，用乙酸乙酯溶解并定容至刻度，搖勻，即得0.020 g·mL-1的蒽酮乙酸乙酯溶液，待用。精密吸取葡萄糖對照品溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.5和2.0 mL，置于相應(yīng)試管中，分別加蒸餾水至2.0 mL，各加入0.5 mL蒽酮乙酸乙酯溶液，搖勻，再各加入5.0 mL濃硫酸，搖勻，放置10 min至自然冷卻到室溫，以水為空白對照，在621 nm波長處測定吸光度。以吸光度(A)為縱坐標(biāo)，無水葡萄糖的質(zhì)量濃度(C)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸[10-12]。

2.2葡萄樹傷流液中多糖含量測定分別吸取已過濾的吐魯番無核白和喀什木納格萄萄樹傷流液1.0 mL，按照2.1項下操作測定溶液的吸光度，根據(jù)樣品溶液所產(chǎn)生的吸光度值，用回歸方程計算葡萄樹傷流液中的多糖含量。

2.3葡萄樹傷流液粗多糖的制備葡萄樹傷流液在60 ℃下減壓濃縮，得濃縮倍數(shù)約為20倍的濃縮液。向濃縮液中加入適量的無水乙醇，至乙醇體積分?jǐn)?shù)為20%(除去微水溶性雜質(zhì))，4 ℃下靜置12 h，離心(4 000 r·min-1，8 min)，取上清液備用。上清液加無水乙醇至乙醇體積分?jǐn)?shù)為80%，4 ℃下靜置12 h，離心(4 000 r·min-1，8 min)，取沉淀備用。沉淀經(jīng)無水乙醇、丙酮、乙醚依次各洗滌3次，用改進(jìn)的Sevage法除蛋白，真空干燥，得粗多糖。

2.4葡萄樹傷流液多糖的分離純化纖維素陰離子交換柱層析中最常見的交換劑為DEAE-52纖維素柱(硼酸型或堿型)，洗脫劑可用不同濃度的堿溶液、硼砂溶液、鹽溶液等。此方法目前最為常用。它一方面可純化多糖，另一方面還適用于分離各種酸性多糖、中性多糖和黏多糖。

2.4.1DEAE-52纖維素柱的預(yù)處理稱取100 g DEAE-52纖維素柱加入4～5倍的蒸餾水中，浸泡48 h，使纖維素顆粒充分膨脹，用傾倒法除去懸浮的細(xì)小顆粒，加入0.5 mol·L-1鹽酸溶液浸泡2 h (1 g纖維素相當(dāng)于加入15 mL 0.5 mol·L-1的鹽酸溶液)，抽濾法濾去酸液，純水洗至中性，再加入0.5 mol·L-1氫氧化鈉溶液浸泡攪拌2 h，濾去堿液，純水洗至中性。酸堿反復(fù)洗滌，至洗出液為無色澄清為止。最后超聲脫氣，濕法裝柱。

2.4.2上樣和洗脫取處理好的粗多糖5 g,溶解于100 mL溫水中，離心(4 000 r·min-1，5 min)，取上清液，濃縮至40 mL，上樣。以蒸餾水為洗脫液，分別用0.05，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5和0.6 mol·L-1的氯化鈉溶液進(jìn)行梯度洗脫，流速調(diào)至1 mL·min-1，每管收集10 mL，用蒽酮-硫酸法跟蹤檢測，以蒸餾水為空白，置于621 nm的波長下測定吸光度，直到不再有糖檢出。以管號為橫坐標(biāo)、吸光度為縱坐標(biāo)，繪制洗脫曲線。合并各洗脫峰的洗脫液，濃縮至30～50 mL，透析除鹽，以0.1 mol·L-1的硝酸銀溶液檢測鹽是否除盡，除鹽后樣品減壓濃縮。最后對填料DEAE-52纖維素柱進(jìn)行再生處理。

2.5氣相色譜法測定分離多糖組分的組成

2.5.1色譜條件 色譜柱：Rtx-5毛細(xì)管色譜柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)；檢測器：FID(氫火焰檢測器)；載氣：氮氣；檢測器溫度：280 ℃；進(jìn)樣溫度：235 ℃。柱溫為程序升溫，初始柱溫155 ℃，維持1 min，以0.4 ℃·min-1的速率升高到160 ℃，維持2 min，以0.5 ℃·min-1的速率升高到169 ℃，以0.2 ℃·min-1的速率升高到172 ℃。分流比為10∶1；H2流速：40 mL·min-1；尾吹：250 mL·min-1；進(jìn)樣量:1.0 μL。

2.5.2單糖對照品的乙酰化分別精確稱取10 mg干燥至恒質(zhì)量的甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、木糖和阿拉伯糖標(biāo)準(zhǔn)單糖置于試管中，分別加入10 mg鹽酸羥胺和0.5 mL吡啶，混勻，封管，置于90 ℃水浴中反應(yīng)30 min，取出后冷卻至室溫，加入0.5 mL醋酸酐，混勻，封管，置于90 ℃水浴中反應(yīng)30 min，進(jìn)行乙?；磻?yīng)，在60 ℃水浴中將反應(yīng)物用氮氣吹干，用1 mL氯仿將其溶解，進(jìn)行氣相色譜分析。按照以上方法，將6種標(biāo)準(zhǔn)單糖分別進(jìn)行乙?；磻?yīng)。

2.5.3樣品的乙?；〗?jīng)DEAE-52纖維素柱分離純化的葡萄樹傷流液進(jìn)行多糖組分干燥，取5 mg放入試管中，加入4 mol·L-1的三氟乙酸2 mL，混勻，充氮氣，封閉，在沸水浴中水解12 h，水解后用氮氣在60 ℃水浴中將反應(yīng)產(chǎn)物吹干，加入乙醇，反復(fù)吹干，除盡三氟乙酸，水解后的多糖按照2.5.2項下標(biāo)準(zhǔn)單糖乙酰化的方法將多糖進(jìn)行乙?；M(jìn)行氣相色譜分析。

2.6葡萄樹傷流液及其多糖組分的抗氧化能力測定

2.6.1對·OH 的清除能力按照南京建成生物工程研究所提供的·OH試劑盒說明書進(jìn)行。在反應(yīng)體系中分別加入質(zhì)量濃度為1 mg·mL-1的純化后的各多糖組分水溶液及過濾好的原液0.2 mL，檢測體系中·OH的剩余量。平行做3次取平均值，按照以下·OH抑制率計算公式計算清除率[13]。

2.6.2對超氧陰離子自由基的清除能力取0.05 mol·L-1pH值為8.2的Tris-HCl緩沖液4.5 mL,置于試管中，在25 ℃水浴中預(yù)熱20 min。分別加入質(zhì)量濃度為1 mg·mL-1的各多糖組分0.1 mL后，各加入2.5mmol·L-1的鄰苯三酚(由10 mmol·L-1鹽酸溶液配制)0.4 mL，混勻，在25 ℃水浴中反應(yīng)4 min，立即加入8 mol·L-1的鹽酸溶液2滴終止反應(yīng)，用蒸餾水調(diào)零，在300 nm處測定吸光度?？瞻捉M以0.1 mL蒸餾水代替樣品試液。平行做3次取平均值，按照以下公式計算清除率：

2.6.3對亞硝基自由基的清除能力取3支5 mL比色管a、b、c,準(zhǔn)確吸取0.5 mL質(zhì)量濃度為 5μg·mL-1的硝酸鈉溶液2份，分別加入到a和c管中，吸取1 mL葡萄樹傷流液原液2份，分別加入到a和b管中，反應(yīng)10 min后，a、b、c管中分別加入4 g·L-1的對氨基苯磺酸溶液1.0 mL，搖勻反應(yīng)5 min后，再加入2 g·L-1的N-1-苯基乙二胺鹽酸鹽溶液1.0 mL，搖勻，15 min后，在最大吸收波長540 nm處測定吸光度。平行做3次取平均值，按照下式計算對NO2-·的清除率。

式中，A0為不加樣品溶液的吸光度；A1為加入樣品溶液后的吸光度；A2為不加硝酸鈉時的吸光度。

2.6.4對DPPH·自由基的清除能力分別吸取2 mL質(zhì)量濃度為1 mg·mL-1的葡萄樹傷流液多糖組分及過濾好的原液，置于5 mL量瓶中，加入2 mL所配制的2×10-4DPPH·乙醇溶液,混勻，密閉靜置30 min,倒入光徑為1 cm的比色皿，在517 nm處測定其吸光度為Ai；測定2 mL質(zhì)量濃度為 1 mg·mL-1多糖組分，加 2 mL乙醇的吸光度為Aj；測定2 mL DPPH·溶液加2 mL二次蒸餾水的吸光度為A0。平行做3次取平均值，按照以下公式計算清除率[14]。

2.6.5對ABTS·自由基的清除能力分別吸取5 mL和88 μL 7 mmol·L-1的ABTS·和140 mmol·L-1的過硫酸鉀溶液，在室溫、避光條件下靜置過夜。配置ABTS·自由基儲備液，按照1∶50的比例用蒸餾水稀釋成工作液。樣品管中加入200 μL質(zhì)量濃度為1 mg·mL-1的葡萄樹傷流液多糖樣品和3 mL ABTS·溶液；空白管用二次蒸餾水代替多糖溶液；對照管用二次蒸餾水代替ABTS·溶液；在室溫條件下避光放置1 h，在730 nm 處測定其吸光度。平行做3次取平均值，按照以下公式計算清除率。

3實驗結(jié)果

3.1葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線及葡萄樹傷流液多糖含量測定結(jié)果葡萄糖線性回歸方程如下：A=0.037 8C+0.083，r=0.999 6，表明葡萄糖質(zhì)量濃度在50～250μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。得出吐魯番無核白和喀什木納格傷流液原液中多糖質(zhì)量濃度分別為114和193 μg·mL-1。

3.2DEAE-52纖維素柱分離葡萄樹傷流液多糖洗脫曲線見圖1～2。

圖1吐魯番葡萄樹傷流液(GBST)多糖DEAE-52纖維素柱洗脫曲線

Fig.1 Elution curve of GBST polysaccharide on DEAE-52 column

圖2喀什葡萄樹傷流液(GBSK)多糖 DEAE-52纖維素柱洗脫曲線

Fig.2 Elution curve of GBSK polysaccharide on DEAE-52 column

由DEAE-52纖維素柱洗脫曲線可知，DEAE-52纖維素柱對葡萄樹傷流液多糖的分離效果好，吐魯番無核白和喀什木納格葡萄樹傷流液多糖各分離得到8個多糖組分，各組分的峰形比較對稱。葡萄樹傷流液的8個多糖組分分別為：水洗組分GBST-1、GBSK-1，0.05 mol·L-1氯化鈉溶液洗脫組分GBST-2、GBSK-2，0.1 mol·L-1氯化鈉溶液洗脫組分GBST-3、GBSK-3，0.2 mol·mL-1氯化鈉溶液洗脫組分GBST-4、GBSK-4，0.3 mol·L-1氯化鈉溶液洗脫組分GBST-5、GBSK-5，0.4 mol·mL-1氯化鈉溶液洗脫組分GBST-6、GBSK-6，0.5 mol·mL-1氯化鈉溶液洗脫組分GBST-7、GBSK-7和0.6 mol·mL-1氯化鈉溶液洗脫組分GBST-8、GBSK-8。由于0.2，0.4，0.5和0.6 mol·L-1氯化鈉溶液洗脫組分含量較低，所以僅對多糖組分含量較高的洗脫部分減壓濃縮到30～50 mL，透析除鹽，做抗氧化活性測定。

3.3氣相色譜分析洗脫多糖組分通過氣相色譜數(shù)據(jù)，定量分析分離純化所得喀什木納格葡萄樹傷流液多糖GBSK-1、GBSK-2 、GBSK-3 、GBSK-5和吐魯番無核白GBST-1 、GBST-2 、GBST-3 、GBST-5 的組成摩爾比，見表1。多糖中含量最低的單糖摩爾比為1.00?？梢钥闯觯?個組分多糖的單糖含量和組成有很大差異。

表1葡萄樹傷流液多糖的單糖組分氣相色譜分析結(jié)果

Tab.1 Monosaccharide composition of different GBS polysaccharides

單糖鼠李糖阿拉伯糖木糖甘露糖葡萄糖半乳糖GBSK-11．743．301．002．605．304．90GBSK-22．001．00-1．271．822．27GBSK-3--1．00---GBSK-53．752．00-1．505．801．00GBST-112．102．601．001．502．206．10GBST-21．201．10-1．001．601．80GBST-33．102．002．201．003．002．20GBST-51．80--1．001．701．00

3.4抗氧化能力

3.4.1清除羥自由基能力見圖3。由圖3可知，吐魯番無核白和喀什木納格葡萄樹傷流液原液及其多糖分離組分(質(zhì)量濃度1 mg·mL-1)都具有一定的清除羥自由基能力，且喀什木納格葡萄樹傷流液原液及多糖組分GBSK-1、GBSK-3和GBSK-5的羥自由基清除率高于相應(yīng)的吐魯番無核白葡萄樹傷流液。分離純化后的多糖組分相對弱于原液清除羥自由基的能力。用氯化鈉溶液梯度洗脫, 洗脫液的極性增加，洗脫液羥自由基清除率下降。說明多糖組分的極性也是影響其抗氧化活性的一個因素。

圖3葡萄樹傷流液多糖組分對羥自由基的清除能力

Fig.3 Hydroxyl radicals scavenging ability of GBS polysaccharides

3.4.2清除超氧陰離子自由基的能力見圖4。由圖4可知，葡萄樹傷流液和其多糖組分對超氧陰離子自由基均具有一定的清除作用，比清除羥自由基能力弱。且吐魯番無核白葡萄樹傷流液原液及多糖組分GBST-2和GBST-3的羥自由基清除率高于相應(yīng)的喀什木納格葡萄樹傷流液。

圖4葡萄樹傷流液多糖組分對超氧陰離子自由基的清除能力

Fig.4 Oxygen free radicals scavenging ability of GBS polysaccharides

3.4.3清除亞硝基自由基的能力見圖5。由圖5可知，葡萄樹傷流液及葡萄樹傷流液中提取分離的多糖組分均具有清除亞硝基自由基的能力。蒸餾水洗脫組分GBST-1要高于GBSK-1的亞硝基自由基清除率。GBST-2和GBSK-2的亞硝基清除率相差不大。

圖5葡萄樹傷流液多糖組分對亞硝基自由基的清除能力

Fig.5 Nitroso free radicals scavenging ability of GBS polysaccharides

3.4.4清除DPPH·自由基的能力見圖6。

圖6葡萄樹傷流液多糖組分對DPPH·自由基的清除能力

Fig.6 DPPH·free radicals scavenging ability of GBS polysaccharides

由圖6可知，葡萄樹傷流液原液和其多糖組分均具有清除DPPH·自由基能力。蒸餾水洗脫組分GBSK-1和GBSK-3要高于GBST-1和GBST-3的DPPH·自由基清除率。GBSK-2和GBST-2，GBSK-5和GBST-5的DPPH·自由基清除率相差不大。

3.4.5ABTS法測總抗氧化能力本實驗以ABTS·自由基為指標(biāo)檢測其總抗氧化能力。見圖7。由圖7可知，葡萄樹傷流液及其多糖組分均具有清除ABTS·自由基的能力，吐魯番葡萄樹傷流液原液對ABTS·自由基清除率為8.0%。組分GBST-2在吐魯番無核白多糖分離組分中清除ABTS·自由基的能力最強(qiáng)，清除率達(dá)到了77%，喀什木納格多糖分離組分GBSK-3是其分離組分中活性最高的。

圖7葡萄樹傷流液多糖組分對ABTS·自由基的清除能力

Fig.7 ABTS radicals scavenging ability of GBS polysaccharides

由圖3～7可知，葡萄樹傷流液及其多糖組分均具有不同程度的抗氧化活性。不同的自由基，其抗氧化能力有差別?？傻贸銎咸褬鋫饕憾嗵墙M分及原液對羥自由基清除能力均大于對超氧陰離子自由基、氧自由基、DPPH·自由基、亞硝基自由基、ABTS·自由基的清除能力。各多糖組分抗氧化能力比較見表2。

表2不同多糖的抗氧化能力的比較

Tab.2 Comparison of polysaccharides antioxidant activities

抗氧化指標(biāo)各多糖組分清除羥自由基能力GBSK-1>GBSK-3>GBSK-2>GBSK-5GBST-2>GBST-1>GBST-5>GBST-3清除超氧陰離子自由基能力GBSK-1>GBSK-3>GBSK-2>GBSK-5GBST-2>GBST-1>GBST-5>GBST-3清除亞硝基自由基能力GBSK-2>GBSK-3>GBSK-1>GBSK-5GBST-1>GBST-2>GBST-3>GBST-5清除DPPH·自由基能力GBSK-1>GBSK-3>GBSK-2>GBSK-5GBST-1>GBST-2>GBST-5>GBST-3清除ABTS·自由基能力GBSK-3>GBSK-1>GBSK-2>GBSK-5GBST-2>GBST-3>GBST-5>GBST-1

葡萄樹傷流液多糖組分對不同的自由基，其抗氧化能力有差別，可能與其結(jié)構(gòu)或組成成分有關(guān)，也可能與其產(chǎn)地品種有關(guān)。葡萄樹傷流液多糖組分對羥自由基的清除能力均高于其他超氧陰離子自由基、亞硝基自由基、DPPH·自由基、ABTS·自由基的清除能力，此性質(zhì)與葡萄樹傷流液原液性質(zhì)相似。由此得出，葡萄樹傷流液多糖可能是葡萄樹傷流液抗氧化活性物質(zhì)之一?？赡苁且驗榈赜蚝推贩N的差異，分離所得多糖的極性和組成成分也是影響因素之一。

4討論

在葡萄樹傷流液多糖的分離純化過程中，只對含量較高的組分進(jìn)行了抗氧化活性研究。因此，對葡萄樹傷流液多糖的研究還有待進(jìn)一步深入研究。研究表明，傷流液的抗氧化活性與其產(chǎn)地和品種都有關(guān)系[15]。而本文只針對吐魯番無核白傷流液的多糖組分進(jìn)行了研究，還有其他地區(qū)和品種的樣品需要探索。此外，多糖具有多種生物活性，所以其他方面的活性研究也至關(guān)重要。

參考文獻(xiàn)：

[1]劉勇民，沙吾提·伊克木.維吾爾藥志[M].烏魯木齊：新疆科技衛(wèi)生出版社，1999 :365.

[2]伊力哈木·托合迪，買吐孫·買提肉孜，艾力·阿巴白克力.沙棗樹膠恢復(fù)變質(zhì)葡萄樹傷流液抗氧化能力的生物活性作用研究[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，16(3):32-34.

[3]趙婧，袁馳，周春麗，等.南瓜多糖降血糖作用研究進(jìn)展[J].食品研究與開發(fā)，2014，35(7):108-110.

[4]楊強(qiáng)，李新華，張振，等.銀杏果精多糖的降血脂作用[J].食品與發(fā)酵工業(yè) ，2013，39(5):62-65.

[5]劉宏.蕎麥多糖研究進(jìn)展[J].北方藥學(xué)，2015，12(1):89-91.

[6]Chen H X，Zhang M，Xie B J. Components and antioxidant activity of polysaccharide conjugate from green tea[J].Food Chem，2009，57(13):5795-5798.

[7]劉麗花.當(dāng)歸多糖抗氧化作用的研究[J].當(dāng)代醫(yī)藥論叢，2014，12(3):284-285.

[8]李立華，張國升.蘆根多糖保肝作用及抗肝纖維化的研究[J].安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2007，26(5):32-34.

[9]梁語絲，鄒華偉，譚永剛.云芝多糖的抗腫瘤作用研究進(jìn)展[J].中國實用醫(yī)藥，2014，9(13):259-262.

[10]Rinrampai Puttipan，Siriporn Okonogi.Antioxidant activity ofRafflesiakerriiflower extract[J].Drug Discove & Therapeutics，2014，8(1):18-24.

[11]布米熱古麗·買買提，艾爾肯·依不拉音，朱富榮，等.新疆葡萄樹傷流液中總糖含量的比較研究[J].西北藥學(xué)雜志，2013，28(3):224-226.

[12]朱良，王一飛，朱艷梅.裙帶菜孢子葉多糖含量的測[J].食品科學(xué)，2005，26(10)：184-186.

[13]葛明明，繆月英，孫麗娜，等.蒲公英根多糖的抗氧化活性研究[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué).2014，37(2):39-41.

[14]高陽，姜會敏，霍雅玉，等.刺玫果的體外抗氧化活性研究[J].西北藥學(xué)雜志，2014，29(3):226-230.

[15]艾爾肯·依不拉音，阿吉姑·阿布都熱西提，李建光，等.新疆葡萄樹傷流液抗氧化活性及熱穩(wěn)定性的研究[J].食品與發(fā)酵工業(yè)，2009，35(1):14-16.

Study on the antioxidant activity of polysaccharides from Xinjiang grapevine bleeding sap of Turpan and Kashgar

Lü Le1，Buremiguli MAIMAITI2，Arkin IBURAIM1*(1.College of Pharmacy，Xinjiang Medical University，Urumqi 830011，China；2.Department of Pharmacy， Kashgar People′s Hospital in Xinjiang ，Kashgar 844000，China)

Abstract:Objective To study the extraction and purification of polysaccharides in Turpan seedless white and Kashgar munage grapevine bleeding sap, and to study the antioxidant activities. Methods Polysaccharide content was determined by anthrone-sulfuric acid method.Crude polysaccharide was prepared by alcohol precipitation, the improved Sevage method，and DEAE-52 column. The antioxidant activity of polysaccharides in vitro was determined and evaluated by the scavenging ratio of hydroxyl free radicals，oxygen free radicals，DPPH·radicals，nitroso radicals and ABTS·radicals. Results Polysaccharides content in Kashgar munage and Turpan seedless grapevine bleeding sap was 193 and 114 μg·mL-1. Eight relatively pure polysaccharides were obtained，four of which were higher than the others. They all showed antioxidant activity to some extend and this might relate to their origins and types. Conclusion Polysaccharides in Kashgar munage and Turpan seedless grapevine bleeding sap had antioxidant activity.

Key words:polysaccharides；grapevine bleeding sap；purify； antioxidant activity

(收稿日期：2015-06-17)

*通信作者：艾爾肯·依不拉音，男，教授，博士生導(dǎo)師

作者簡介：呂樂，女，博士研究生

基金項目：國家自然科學(xué)基金項目(編號：21162030)

中圖分類號：R284

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：1004-2407(2016)02-0124-07

doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2016.02.005