李磊　司寧寧　楊賓　李瑞杰　張效科

050700　河北省新樂(lè)市中醫(yī)醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科(李磊、李瑞杰、楊賓)；河北省灤平縣中醫(yī)院內(nèi)科(司寧寧)；陜西中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床學(xué)院(張效科)

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祛風(fēng)清熱定痛方對(duì)偏頭痛大鼠鎮(zhèn)痛效應(yīng)及神經(jīng)遞質(zhì)含量的影響

李磊司寧寧楊賓李瑞杰張效科

050700河北省新樂(lè)市中醫(yī)醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科(李磊、李瑞杰、楊賓)；河北省灤平縣中醫(yī)院內(nèi)科(司寧寧)；陜西中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床學(xué)院(張效科)

【摘要】目的通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究祛風(fēng)清熱定痛方的鎮(zhèn)痛作用，并探討其治療偏頭痛的作用機(jī)制。方法將大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、正天丸組、祛風(fēng)清熱定痛方大、小劑量組，每組8只，連續(xù)給藥7天，通過(guò)熱板法觀察祛風(fēng)清熱定痛方的鎮(zhèn)痛作用。硝酸甘油制備偏頭痛大鼠模型，ELISA法檢測(cè)各組大鼠腦組織中去甲腎上腺素(norepinephrine，NE)、多巴胺(dopamine，DA)及5-羥色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT)含量，以P<0.05作為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的界限。 結(jié)果(1)與模型組相比，祛風(fēng)清熱定痛方的大劑量組自60分鐘開(kāi)始顯著地提高了大鼠給藥后的痛閾值(P<0.01)；祛風(fēng)清熱定痛方小劑量組、正天丸組在120分鐘時(shí)提高了大鼠給藥后的痛閾值(P<0.05)。(2)與模型組相比，祛風(fēng)清熱定痛方大劑量組、正天丸組大鼠腦組織 NE、DA 、5-HT含量均顯著升高(P<0.01)；與正天丸組比較，祛風(fēng)清熱定痛方大劑量組有顯著性差異(P<0.05)。 結(jié)論祛風(fēng)清熱定痛方具有明顯的鎮(zhèn)痛的作用，其治療偏頭痛的作用機(jī)制可能是通過(guò)調(diào)節(jié)NE、DA、5-HT的釋放而實(shí)現(xiàn)的。

【關(guān)鍵詞】偏頭痛；祛風(fēng)清熱定痛方；多巴胺；去甲腎上腺素；5-羥色胺

偏頭痛是一種具有遺傳性及復(fù)發(fā)性的頭痛綜合征，其發(fā)病機(jī)制至今未有統(tǒng)一的理論解釋，目前多認(rèn)為其發(fā)作與神經(jīng)血管痛覺(jué)傳導(dǎo)通路的活化及神經(jīng)遞質(zhì)表達(dá)密切相關(guān)。偏頭痛發(fā)作過(guò)程中始終存在單胺類神經(jīng)遞質(zhì)如5-羥色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT)、多巴胺(dopamine，DA)、去甲腎上腺素(norepinephrine，NE)及血管活性物質(zhì)如內(nèi)皮素(endothelin，ET)、降鈣素相關(guān)基因肽(calcitonin related gene peptide，CRRP)等含量異常[1]。祛風(fēng)清熱定痛方治療偏頭痛臨床療效確切[2-3]。為進(jìn)一步明確其作用機(jī)制，本研究觀察了祛風(fēng)清熱定痛方的鎮(zhèn)痛效應(yīng)及對(duì)硝酸甘油致偏頭痛大鼠腦組織中DA、NE、5-HT含量的影響，探討其治療偏頭痛作用機(jī)制。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SD大鼠60只，SPF級(jí)，雌雄各半，體質(zhì)量(280±20)g，由第四軍醫(yī)大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK(軍)2009-005，飼養(yǎng)于陜西中醫(yī)藥大學(xué)中藥藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)室。

1.2藥品及試劑

祛風(fēng)清熱定痛方(藥物組成：川芎20 g、白芍10 g、柴胡10 g、香附10 g、白芷12 g、地龍10 g、藁本9 g、薄荷6 g、黃芩10 g、羌活8 g、甘草6 g)水煎液，由陜西中醫(yī)藥大學(xué)中藥藥理研究室制備；正天丸(三九醫(yī)藥股份公司生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字:Z44020711，規(guī)格：6 g/袋)；硝酸甘油注射液(四環(huán)藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字:H20057880，規(guī)格：5 mg/mL)；DA、NE、5-HT酶聯(lián)免疫試劑盒，由北京科美東雅生物技術(shù)有限公司提供。

1.3儀器設(shè)備

冷熱板痛覺(jué)測(cè)痛儀(上海玉研科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn))；酶標(biāo)儀(美國(guó)寶特公司生產(chǎn))；電子天平、美的中型機(jī)械微波爐、海爾超低溫儲(chǔ)存箱、溫度計(jì)、秒表、手術(shù)器械、低溫離心機(jī)、移液槍等實(shí)驗(yàn)器械，由陜西中醫(yī)藥大學(xué)中藥藥理實(shí)驗(yàn)室提供。

1.4分組

按體質(zhì)量隨機(jī)分為空白組、模型組、正天丸組、祛風(fēng)清熱定痛方大、小劑量組，每組8只。各組互相隔離飼養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)室溫度維持在17～24℃，12小時(shí)為一個(gè)光照周期，喂養(yǎng)顆粒型普通大鼠飼料，自來(lái)水為大鼠飲用水。

1.5給藥方法及劑量

正天丸按臨床用藥劑量用蒸餾水配制成1.24 g/kg的懸濁液；祛風(fēng)清熱定痛方按人體等效量用蒸餾水配制成大劑量(0.3 g/kg)、小劑量(0.15 g/kg)的懸濁液置冰箱冷藏備用。試驗(yàn)藥物組均灌胃給藥(1 mL/100 g)，空白組、模型組灌胃等體積的生理鹽水，每天1次，連續(xù)給藥7天。

1.6觀察指標(biāo)及方法

(1)各組大鼠首先行基礎(chǔ)痛閾值測(cè)定，考慮空白組與模型組均灌胃等體積氯化鈉注射液，故除空白組外，其余各組首先進(jìn)行基礎(chǔ)痛閾值(0分鐘)測(cè)定，末次灌胃后于30分鐘、60分鐘、120分鐘和180分鐘檢測(cè)大鼠的痛閾值。將大鼠放在(55±5)℃熱板上，觀察大鼠自足底接觸鐵板出現(xiàn)舔足的潛伏期，大鼠出現(xiàn)添足后停止計(jì)時(shí)，這段時(shí)間視為大鼠的痛閾值。60秒定為痛閾的最高值，超過(guò)60秒，痛閾值則被記為60秒；如有跳躍、快速走動(dòng)等逃避反應(yīng)視為淘汰。

(2)痛閾值實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，空白組腹部皮下等容積注射生理鹽水，其余各組分別進(jìn)行腹部皮下注射硝酸甘油注射劑10 mg/kg，復(fù)制偏頭痛動(dòng)物模型，大鼠出現(xiàn)煩躁、撓頭、拍臉、爬籠次數(shù)增多，提示造模成功。模型制備成功4小時(shí)后，各組大鼠用10%烏拉坦(1 mL/100 g)腹腔麻醉，斷頭處死，快速取腦，腦組織去除血跡，濾紙拭干，稱重后將腦組織按每100 mg腦組織加入1 mL的生理鹽水進(jìn)行混合，用超聲波細(xì)胞粉碎儀制成10%(W/V)的組織勻漿液，離心取上清液，并用ELISA法測(cè)定大鼠腦組織中NE、DA、5-HT的含量，其操作過(guò)程嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2結(jié)果

2.1祛風(fēng)清熱定痛方對(duì)偏頭痛模型大鼠痛閾值的影響

由表1可見(jiàn)，各組大鼠的基礎(chǔ)痛閾值無(wú)明顯差異(P>0.05)，經(jīng)過(guò)7天藥物灌胃治療后,各組大鼠的痛閾值出現(xiàn)了一定的差異。與模型組相比，祛風(fēng)清熱定痛方的大劑量組自60分鐘開(kāi)始顯著地提高了大鼠給藥后的痛閾值。祛風(fēng)清熱定痛方小劑量組、正天丸組只在120分鐘時(shí)的痛閾值與模型組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。

2.2祛風(fēng)清熱定痛方對(duì)偏頭痛模型大鼠神經(jīng)遞質(zhì)的影響

由表可見(jiàn)，與空白組相比較，模型組NE、DA 、5-HT含量明顯降低(P<0.05)，提示造模成功。與模型組相比，祛風(fēng)清熱定痛方大劑量組、正天丸組NE、DA、5-HT的含量有顯著性差異(P<0.01)，小劑量組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；與正天丸組比較，祛風(fēng)清熱定痛方大劑量組NE、DA、5-HT的含量有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，小劑量組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

3討論

疼痛可由多種原因?qū)е?，?duì)于藥物鎮(zhèn)痛研究分物理刺激法和化學(xué)刺激法，熱板反應(yīng)為高級(jí)中樞參與的物理刺激反應(yīng)，可反應(yīng)中樞鎮(zhèn)痛作用，故選用了熱板法研究祛風(fēng)清熱定痛方的鎮(zhèn)痛作用。根據(jù)偏頭痛發(fā)病的幾種學(xué)說(shuō)，本實(shí)驗(yàn)在考慮硝酸甘油誘發(fā)偏頭痛動(dòng)物模型造模簡(jiǎn)單、易成功、動(dòng)物易于獲得等因素且硝酸甘油能導(dǎo)致明顯的中樞和周圍血管擴(kuò)張，從而在產(chǎn)生搏動(dòng)性頭痛的相似性基礎(chǔ)上，選取了皮下注射硝酸甘油制備偏頭痛大鼠模型。

表1　祛風(fēng)清熱定痛方對(duì)大鼠痛閾值的影響 ±s，s)

注: 與模型組比較,aP<0.01,bP<0.05。

表2　祛風(fēng)清熱定痛方對(duì)血漿DA、NE、5-HT含量的影響

注： 與空白組相比，aP<0.05；與模型組相比，bP<0.01，cP<0.05；與正天丸組相比，dP<0.05，eP>0.05。

目前研究認(rèn)為5-HT代謝紊亂是偏頭痛發(fā)病的核心[4]，循環(huán)血液中5-HT的異常與偏頭痛的發(fā)病相關(guān)[5]。多巴胺受體存在于三叉神經(jīng)節(jié)及三叉神經(jīng)脊束核，多巴胺通過(guò)刺激多巴胺受體抑制三叉頸復(fù)合體神經(jīng)元的活化[6]，抑制三叉頸復(fù)合體上傳至丘腦的疼痛信號(hào)傳遞，減輕疼痛感[7]。研究還發(fā)現(xiàn)DA受體和5-HT受體共存于三叉頸復(fù)合體，這兩種單胺類神經(jīng)遞質(zhì)在一定條件下可相互作用，減少神經(jīng)元放電。既往研究證實(shí)由于偏頭痛患者血小板、淋巴細(xì)胞表面的多巴胺受體升高，導(dǎo)致DA生成NE，引起顱內(nèi)動(dòng)脈收縮，造成腦血管痙攣缺血，引發(fā)偏頭痛，腦血流減少，NE、DA含量減少，又可使腦血管擴(kuò)張，產(chǎn)生偏頭痛[8]，而應(yīng)用去甲腎上腺素可抑制灰質(zhì)的皮層擴(kuò)散抑制信號(hào)的播散，減輕頭痛癥狀[9]。單胺類神經(jīng)遞質(zhì)耗竭能夠誘發(fā)偏頭痛發(fā)生，5-HT、DA、NE降低，進(jìn)而致血管過(guò)度擴(kuò)張誘發(fā)頭痛，NE、DA、 5-HT減少導(dǎo)致中樞性痛調(diào)制機(jī)制發(fā)生障礙,致使機(jī)體對(duì)痛覺(jué)更為敏感[10]。因此，DA、NE、 5-HT是觀察藥物的治療偏頭痛的重要治療靶標(biāo)。

偏頭痛在中醫(yī)學(xué)中歸屬“頭痛”的范疇，病機(jī)與風(fēng)、火、痰、瘀、虛相關(guān)，各因素在發(fā)病中所占地位各家有不同的認(rèn)識(shí)。在臨床工作中筆者觀察到本病得之初起多因感受風(fēng)邪，加之失治、誤治致邪氣稽留經(jīng)脈，或遇情志不暢致肝失疏泄、膽郁阻絡(luò)，郁而不宣，化熱化火，侵襲陽(yáng)位，則清陽(yáng)不升，濁陰不降，風(fēng)熱上擾，腦脈痹阻，頭痛發(fā)作。復(fù)因感受風(fēng)邪、情志所傷，飲食不當(dāng)而觸發(fā)，導(dǎo)致頭痛經(jīng)年不愈，據(jù)此可以認(rèn)為偏頭痛的病機(jī)特點(diǎn)多為風(fēng)熱上擾、腦脈痹阻，擬祛風(fēng)清熱定痛方在臨床中治療偏頭痛效果顯著。現(xiàn)代藥理研究證實(shí)川芎嗪通過(guò)抑制組胺、5-HT的合成、釋放起到抗炎、止痛的作用[11]；白芍具有鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、抗炎等作用[12]；香附具有解熱、鎮(zhèn)痛等作用[13]；白芷的鎮(zhèn)痛療效顯著，尤其在血管神經(jīng)性頭痛的中醫(yī)藥治療中被廣泛應(yīng)用[14]；地龍有解熱、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、降壓等作用[15]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示祛風(fēng)清熱定痛方大、小劑量、正天丸組均有鎮(zhèn)痛作用，以大劑量組鎮(zhèn)痛作用最強(qiáng)，且優(yōu)于正天丸組，提示祛風(fēng)清熱定痛方具有一定的中樞鎮(zhèn)痛作用。模型組大鼠應(yīng)用硝酸甘油誘導(dǎo)使腦組織中NE、DA、5-HT的含量明顯減少，從而導(dǎo)致腦血管過(guò)度舒張而產(chǎn)生偏頭痛癥狀；祛風(fēng)清熱定痛方能顯著增加腦組織內(nèi)降低的NE、DA、5-HT含量，通過(guò)調(diào)節(jié)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的表達(dá)，抑制神經(jīng)源性炎癥反應(yīng)，使之趨于生理狀態(tài)下的平衡水平，起到鎮(zhèn)痛作用，且祛風(fēng)清熱定痛方大劑量組優(yōu)于正天丸組。

綜上所述，祛風(fēng)清熱定痛方具有明顯的鎮(zhèn)痛作用，其治療偏頭痛的作用機(jī)制可能與通過(guò)調(diào)節(jié)NE、DA、5-HT的釋放有關(guān)。

參考文獻(xiàn)

[1]劉建林，彭成，潘越，等. 元胡止痛膠囊對(duì)偏頭痛模型大鼠的影響[J].中藥藥理與臨床，2013，29(4) : 11-13.

[2]冀緒，李煒，李瑞杰，等. 清熱祛風(fēng)活血止痛法治療偏頭痛50例臨床研究[J].河北中醫(yī)，2013，35(1) : 16-20.

[3]李瑞杰，李輝.加味散偏湯治療偏頭痛50例[J].江西中醫(yī)藥，2012，43(8) : 28-29.

[4]Weiller C, May A, Limmroth V, et al. Brain stem activation in spontaneous human migraine attacks[J]. Nature medicine, 1995,1 (7): 658.

[5]Rutkowska M, Gliniak H. The influence of ACEA - a selective cannabinoid CBl receptoragonist on whole blood and platelet-poor plasma serotonin concentrations[J].Pharraazie, 2009,64(9): 598-601.

[6]Charbit AR, Akerman S,Goadsby PJ. Comparison of the effects of central and peripheral dopamine receptor activation on evoked firing in the trigeminocervical complex[J]. J Pharmacol Exp Ther, 2009, 331(2): 752-763.

[7]Richter F,Mikulik 0,Ebersberger A, et aL Noradrenergic agonists md antagonists influence migration of cortical spreading depression in rat-a possible mechanism of migraine prophylaxis and prevention of post ischemic neuronal damage[J]. J Cereb Blood Flow Metab, 2005,25(9): 1225-1235.

[8]Gelfand AA, Goadsby PJ. A Neurologist’s Guide to Acute Migraine Therapy in the Emergency Room[J]. Neurohospitalist, 2012, 2(2): 51-59.

[9]Peroutka SJ. Dopamine and migraine[J]. Neurology,1997, 49:650-656.

[10]Cristina T,Rosaria G,Wang DC,et al.Nitroglyerin induces hyperalgesia in rat-a time-coure study[J].Eur J Pharmacol,2003,464(2-3):159-162.

[11]范治云，羅紅，劉玉蘭，等.川芎嗪的抗炎作用與組胺，5-羥色胺的關(guān)系[J].中藥新藥與臨床藥理，2004，15(2)：93.

[12]王本祥.現(xiàn)代中藥藥理與臨床[M].天津：天津科技翻譯出版公司，2000：490-493.

[13]沈映君.中藥藥理學(xué)[M].上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1997：111-112.

[14]徐術(shù),胡晉紅.白芷的活性成分研究與臨床應(yīng)用進(jìn)展[J].中國(guó)藥房,2005,6(6):467-468.

[15]木海鷗，蘇孝共.地龍的藥理研究概要[J].中國(guó)藥業(yè)，2007，16(1)：61-62.

(本文編輯：韓虹娟)

Observation ofQufengQingreDingtongdecoction on analgesia effects and the content of NE, DA, 5-HT in migraine ratsLIlei,SINing-ning,YANGBin,etal.DepartmentofICU,XinleCityHospitalofTraditionalChineseMedicine,Hebei050700,China

【Abstract】ObjectiveThe analgesic effect of Qufeng Qingre Dingtong decoction was studied through the animal experiment research, and its mechanism of action was explored. MethodsRats were randomly divided into blank group, model group, Zhengtian Pill group, Qufeng Qingre Dingtong high and small dose groups, 8 rats in each group. Analgesic effect of Qufeng Qingre Dingtong decoction was observed by the hot plate method after continuous drug administration for 7 days. Migraine rat model was prepared by nitroglycerin. ELISA method was used to detect NE, DA and 5-HT contents in brain tissue. It was considered to be statistically significant when the value of P was less than 0.05. Results(1) Compared with the model group, Qufeng Qingre Dingtong high-dose group could significantly improve pain threshold from 60 min after the administration of drugs (P<0.01), Qufeng Qingre Dingtong low-dose group, Zhengtian pill group improved pain threshold from 120 min after administration (P<0.05). (2) Compared with the model group, NE, DA, 5-HT contents in brain tissue were very significantly increased in Qufeng Qingre Dingtong high dose group and Zhengtian Pill group (P<0.01). Compared with Zhengtian Pill group, Qufeng Qingre Dingtong high dose group had significant differences (P<0.05). ConclusionQufeng Qingre Dingtong decoction has obvious analgesic effect and its mechanism in the treatment of migraine might achieve by regulating NE, DA and 5-HT release.

【Key words】Migraine；Qufeng Qingre Dingtong decoction；Dopamine；Norepinephrine；5-hydroxytryptamine

(收稿日期：2015-07-08)

Corresponding author:LI Rui-jie, E-mail: xinleliruijie@163.com

【中圖分類號(hào)】R277.7

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

doi：10.3969/j.issn.1674-1749.2016.02.004

作者簡(jiǎn)介：李磊(1981- )，本科，主治醫(yī)師。研究方向：重癥醫(yī)學(xué)、急診臨床研究。E-mail：hebeilrj@163.com通訊作者：李瑞杰(1979- )，碩士，主治醫(yī)師。研究方向：中西醫(yī)結(jié)合治療腦血管病研究。E-mail：xinleliruijie@163.com

基金項(xiàng)目：河北省中醫(yī)藥管理局中醫(yī)藥立項(xiàng)資助課題(2011141)