馬士輝 凌飛海

（廣東省中山市人民醫(yī)院乳腺外科，廣東中山528403）

乳腺癌組織中HER-2、TOPOIIα、Ki-67的表達(dá)及臨床意義

馬士輝 凌飛海

（廣東省中山市人民醫(yī)院乳腺外科，廣東中山528403）

目的 探討人表皮生長(zhǎng)因子受體2（HER-2）、DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱα（TOPOIIα）、Ki-67在乳腺癌組織中的表達(dá)及臨床意義。方法 回顧性分析我科2012年1月至2012年12月共212例乳腺癌患者的臨床病理資料，分別采用熒光原位雜交（FISH）法及SP免疫組化法檢測(cè)乳腺癌組織標(biāo)本中HER-2、TOPOIIα及Ki-67的表達(dá)，并分析其與臨床病理特征的相關(guān)性。結(jié)果 212例乳腺癌組織中，HER-2、TOPOIIα、Ki-67陽(yáng)性表達(dá)率分別為25%（53/212）、9.4%（20/212）、60.4%（128/212），HER-2基因擴(kuò)增中TOPOIIα同步擴(kuò)增17例，HER-2、TOPOIIα、Ki-67基因的擴(kuò)增或高表達(dá)與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及病理組織學(xué)分級(jí)有關(guān)。結(jié)論 乳腺癌組織中HER-2、TOPOIIα、Ki-67的聯(lián)合檢測(cè)對(duì)乳腺癌預(yù)后評(píng)估及提供個(gè)體化治療有重要意義。

乳腺癌；HER-2；TOPOIIα；Ki-67

隨著分子生物學(xué)的不斷發(fā)展，乳腺癌的生物學(xué)指標(biāo)越來(lái)越受到人們的重視，相關(guān)生物學(xué)指標(biāo)已成為乳腺癌分子分型的依據(jù)，而不同亞型的乳腺癌對(duì)治療的反應(yīng)及預(yù)后都不盡相同[1]，乳腺癌相關(guān)生物標(biāo)記物的檢測(cè)在臨床上越來(lái)越重要。目前乳腺癌的常規(guī)檢測(cè)指標(biāo)如ER、PR、P53及HER-2等，對(duì)于乳腺癌治療方法的選擇以及判斷預(yù)后具有重要意義，但仍缺乏完全反映乳腺癌生物學(xué)特性的臨床指標(biāo)。本研究分別采用FISH法及SP免疫組化法檢測(cè)乳腺癌組織中HER-2、TOPOIIα及Ki-67的表達(dá)，并分析各指標(biāo)之間與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系，為指導(dǎo)臨床治療及判斷預(yù)后提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選取2012年1月至2012年12月在我科就診的女性乳腺癌患者手術(shù)標(biāo)本共212例，年齡26～73歲，中位年齡49.7歲。所有患者術(shù)前均未接受放療或化療等治療，病理診斷明確，根據(jù)2003年乳腺腫瘤WHO組織學(xué)分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)[2]，其中174例浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌、2例浸潤(rùn)性小葉癌、21例原位癌、8例黏液腺癌、其他類(lèi)型7例。其中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移58例，未見(jiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移154例。

1.2 病理檢測(cè)方法、試劑及儀器：全部標(biāo)本經(jīng)常規(guī)10%中性福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋、切片。采用FISH法檢測(cè)乳腺癌組織中HER-2、TOPOIIα的基因表達(dá)，F(xiàn)ISH法檢測(cè)基因試劑盒均購(gòu)自北京金菩嘉醫(yī)療科技有限公司，包含2種混合探針：橘紅色熒光代表HER-2/TOPOIIα基因，綠色熒光代表17號(hào)染色體著絲粒，所有操作按照試劑盒說(shuō)明及要求完成。免疫熒光顯微鏡使用日本奧林帕斯公司（型號(hào)：BX51）的產(chǎn)品。SP免疫組化法檢測(cè)乳腺癌組織中Ki-67的表達(dá)，所有SP試劑盒均購(gòu)自上海長(zhǎng)嘉生物科技有限公司。

1.3 結(jié)果判定：HER-2/TOP2A基因擴(kuò)增的判讀參考文獻(xiàn)[3]，Ki-67陽(yáng)性的判斷標(biāo)準(zhǔn)參考文獻(xiàn)[4]，根據(jù)2011年 St.Gallen國(guó)際乳腺癌共識(shí)會(huì)議定義Ki-67≤14%為低表達(dá)，Ki-67＞14%為高表達(dá)[6]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用SPSS 19．0軟件對(duì)計(jì)數(shù)資料進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，HER-2、TOPOIIα和Ki-67各組間相關(guān)性采用Spearman相關(guān)性分析，P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 乳腺癌組織中HER-2、TOPOIIα、Ki-67的表達(dá)：212例乳腺癌組織標(biāo)本中HER-2基因擴(kuò)增53例，陽(yáng)性率為25%（53/212）；TOPOIIα基因擴(kuò)增20例，陽(yáng)性率為9.4%（20/212）；Ki-67高表達(dá)128例，陽(yáng)性率為60.4%（128/212）。

2.2 乳腺癌組織中HER-2、TOPOIIα、Ki-67陽(yáng)性表達(dá)與臨床病理因素間關(guān)系：HER-2、TOPOIIα及Ki-67在腫瘤＞2 cm的乳腺癌組織中高表達(dá)或基因擴(kuò)增率明顯高于腫瘤≤2 cm（P＜0.05）；HER-2、TOPOIIα及Ki-67的高表達(dá)或基因擴(kuò)增率在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌組織中明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P＜0.05）；HER-2、TOPOIIα及Ki-67在組織學(xué)分級(jí)高的乳腺癌組織中高表達(dá)或基因擴(kuò)增率明顯高于組織學(xué)分級(jí)低的組織（P＜0.05），詳見(jiàn)表1。

表1 HER-2，TOPOIIα，Ki-67陽(yáng)性表達(dá)與臨床病理因素間關(guān)系 [n（%）]

2.3 乳腺癌組織中HER-2與Ki-67、TOPOIIα的相互關(guān)系：53例HER-2基因擴(kuò)增的乳腺癌患者中Ki-67高表達(dá)的有42例，說(shuō)明HER-2基因擴(kuò)增往往伴隨著Ki-67的高表達(dá)。有17例TOPOIIα基因與HER-2基因同步擴(kuò)增，概率32.1%（17/53），而HER-2基因不擴(kuò)增的患者中TOPOIIα的基因擴(kuò)增率僅為 1.9%（3/159）。乳腺癌患者 TOPOIIα和HER-2的表達(dá)存在顯著相關(guān)性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

3 結(jié)論

乳腺癌的預(yù)后除了與腫瘤大小、組織學(xué)類(lèi)型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等情況有關(guān)外，可能與其分子生物學(xué)行為關(guān)系更大。同時(shí)乳腺癌又是一種高度異質(zhì)性的惡性腫瘤，癌細(xì)胞可以表達(dá)多種不同的生物學(xué)標(biāo)志物，單一因素往往難以確定其與乳腺癌生物學(xué)行為的關(guān)系，因此多種標(biāo)志物的聯(lián)合檢測(cè)可以更準(zhǔn)確地為乳腺癌治療方案的選擇及預(yù)后的判斷提供臨床依據(jù)。

HER-2原癌基因又稱(chēng)c-erbB-2，是表皮生長(zhǎng)因子受體家族成員之一，參與細(xì)胞生長(zhǎng)、分化的調(diào)節(jié)?，F(xiàn)有證據(jù)表明HER-2基因與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后關(guān)系緊密，并且是評(píng)價(jià)乳腺癌預(yù)后不良的獨(dú)立指標(biāo)[5]，對(duì)制定合理的靶向治療及化療方案具有重要的參考意義。目前檢測(cè)HER-2狀態(tài)常用的方法有免疫組化法及FISH法，其中FISH法因其檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確，被一致推薦為檢測(cè)HER-2基因是否擴(kuò)增的金標(biāo)準(zhǔn)。本組212例乳腺癌中HER-2的檢測(cè)均采用FISH法，其陽(yáng)性表達(dá)率為25%，HER-2基因擴(kuò)增的患者，腫瘤大小、腋窩淋巴結(jié)陽(yáng)性率及組織學(xué)分級(jí)均較HER-2基因不擴(kuò)增患者高，與文獻(xiàn)報(bào)道一致。

拓?fù)洚悩?gòu)酶是DNA復(fù)制過(guò)程中的關(guān)鍵酶，在DNA的合成、轉(zhuǎn)錄、核分裂等過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。拓?fù)洚悩?gòu)酶分為Ⅰ、Ⅱ兩型，其中TOPOII又分為α和β兩個(gè)亞型。TOPOIIα基因與HER-2基因都位于17q 21-22上，在基因定位上非?？拷形墨I(xiàn)報(bào)道，在HER2基因擴(kuò)增的原發(fā)性乳腺癌中，TOPOIIα基因出現(xiàn)擴(kuò)增的概率為24.3%～55%[11]，因此兩者在基因表達(dá)和變化上可能存在某種聯(lián)系。在本研究中，53例HER-2陽(yáng)性乳腺癌患者中有17例TOPOIIα基因同步擴(kuò)增，概率為32.1%，與文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果相似。本研究結(jié)果說(shuō)明TOPOIIα與HER-2的表達(dá)存相關(guān)性，有共同高表達(dá)趨勢(shì)。另有研究表明，TOPOIIα是蒽環(huán)類(lèi)化療藥物的特定靶點(diǎn)，其可能可以作為蒽環(huán)類(lèi)藥物化療敏感性的預(yù)測(cè)因子[12]。但是，目前TOPOIIα基因的檢測(cè)不是臨床常規(guī)檢查項(xiàng)目，并且沒(méi)有納入乳腺癌分子分型的評(píng)判指標(biāo)，因此其在預(yù)測(cè)預(yù)后及指導(dǎo)治療的臨床價(jià)值上并未得到重視。

細(xì)胞增殖活性是反映腫瘤發(fā)生、發(fā)展的一個(gè)重要指標(biāo)，而Ki-67是一種全面反映細(xì)胞增殖活性的可靠指標(biāo)[9-10]，Ki-67高表達(dá)往往代表著腫瘤細(xì)胞增殖活躍，提示預(yù)后不佳。St.Gallen國(guó)際乳腺癌共識(shí)會(huì)議在2011年將Ki-67納入乳腺癌分子分型判讀標(biāo)準(zhǔn)，Ki-67的臨床意義越來(lái)越得到重視。文獻(xiàn)[11]報(bào)道，乳腺癌患者Ki-67表達(dá)率為60%～80%，本組病例為67.8%，結(jié)果相近。并且Ki-67高表達(dá)的情況下腫瘤較大，腫瘤組織學(xué)分級(jí)更高，發(fā)生腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的比例大。

乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)多因素、多基因改變的長(zhǎng)期過(guò)程，與許多生物學(xué)指標(biāo)聯(lián)系緊密。本研究通過(guò)對(duì)臨床上常用的多種生物學(xué)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，并初步探討了它們與乳腺癌臨床病理因素之間的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)聯(lián)合檢測(cè)HER-2、TOPOIIα及Ki-67對(duì)臨床上乳腺癌患者制定綜合治

［1］ Phipps AI，Buist DS，Malone KE，et al.Reproductive history and risk of three breast cancer subtypes defined by three biomarkers［J］.Cancer Causes Control，2011，22（3）：399-405.

［2］ Tavassoli EF，Devilee.WHO：Pathology＆genetics，tumours of the breast and female genital organs［M］．Lyon：IARC Press，2008：111－113．

［3］ 馬士輝，凌飛海.ER、PR、HER-2、TOPOIIα在乳腺癌組織中的表達(dá)及臨床意義［J］.醫(yī)學(xué)信息，2013，26（11）：117.

［4］ Bukholm IR，Bukholm G，Holm R，et al.Association betw een histology grade，expression of Hs MCM2，and cyclin A in human invasive breast carcinomas［J］.J Clin Pathol，2003，56（5）：368-373.

［5］ 湯小江，周瑜輝，張偉，等.TOP2A基因表達(dá)與乳腺癌HER2通路的相關(guān)性［J］．西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2015，（4）：519－522，557.

［6］ Ross JS，F(xiàn)letcher JA，Bloom KJ，et al．HER－2/neu testing in breast cancer［J］.Am J Clin Pathol，2003，120：S53－71.

［7］ Slamon DJ，Press MF.Alterations in the TOP2A and HER2 Genes：Association With Adjuvant Anthracycline Sensitivity in Human Breast Cancers［J］.J Natl Cancer Inst.2009，101（9）：615-618.

［8］ 張松，劉相萍，聶剛，等.TopⅡα蛋白與Top2A基因在Her2陽(yáng)性乳腺癌中的表達(dá)及臨床意義［J］.青島醫(yī)藥衛(wèi)生，2014，（4）：241－245.

［9］ 夏紅強(qiáng)，何建蓉.Ki-67、EGFR、HER-2和P53在乳腺癌中的表達(dá)及其相關(guān)［J］.臨床腫瘤學(xué)雜志，2011，16（2）：139-142.

［10］王憶麗，熊秋云.乳腺癌蒽環(huán)類(lèi)新輔助化療療效與ER、PR、HER2表達(dá)的關(guān)系［J］.中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2011，8（31）：8-10.

［11］張麗，曾梅，田林，等.Cyclin D1、Ki-67及PTEN在乳腺癌中的表達(dá)及意義［J］.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2013，21（8）：1772-1774.

Expression and Clinical Significance of HER-2，TOPOIIα，Ki-67 in Breast Cancer Tissues

Ma ShihuiLing Feihai
（Zhongshan People's Hospital of Guangdong Province of Department of Breast Surgery，Zhongshan 528403，China）

ObjectiveTo probe into the expression and clinical significance of human epidermal growth factor receptor 2（HER-2），DNA topoisomerase II alpha（TOPOIIα），Ki-67 in breast cancer.MethodsClinical pathological data of 212 patients with breast cancer in our department from January，2012 to December，2012 were retrospective analyzed.Then，the expression of HER-2，TOPOIIα and Ki-67 in breast cancer tissues were detected by fluorescence in situ hybridization（FISH）and SP immunohistochemical method respectively，and its correlation with clinical pathological characteristics was analyzed.Results In 212 cases of breast cancer，the HER-2，TOPOII，Ki-67 positive expression rate were respectively 25%（53/212），9.4%（20/212），60.4%（128/ 212），and the simultaneous amplification of TOPOII gene in 17 cases of HER-2 gene amplification，Amplification or high expression of HER-2，TOPOII，Ki-67 gene was associated with tumor size，lymph node metastasis and histological grading.ConclusionThe joint detection of HER-2，TOPOII，and Ki-67 in breast cancer tissues which it is of great significance to evaluate the prognosis of breast cancer and provide individualized treatment.

Breast cancer；HER-2；TOPOIIα；Ki-67

R730.2

A 學(xué)科分類(lèi)代碼： 32027

1001-8131（2016）05-0504-03

2016-06-12

2011年廣東省中山市衛(wèi)生局項(xiàng)目（J2011043）