林立平　張緒超　胡家柱　黃福喜　李薇綻　黎秀月　韓建軍　曹小龍

RRM1 mRNA表達水平與晚期NSCLC吉西他濱維持治療療效的相關(guān)性分析

林立平張緒超胡家柱黃福喜李薇綻黎秀月韓建軍曹小龍

【摘要】目的探討晚期NSCLC組織中RRM1 mRNA表達水平及其與吉西他濱維持治療療效的相關(guān)性。方法通過液相芯片法檢測40例晚期NSCLC患者腫瘤組織中RRM1 mRNA表達水平，分析RRM1 mRNA表達水平與患者臨床特征、吉西他濱維持治療有效率、無進展生存及總生存時間的相關(guān)性。結(jié)果RRM1 mRNA低表達與高表達患者在各臨床特征方面無顯著差別，兩組總生存時間比較無統(tǒng)計學差異(15.6個月 vs 12.1個月，P=0.582)，但RRM1 mRNA低表達患者具有更高的疾病控制率(85.7% vs 52.6%，P=0.023)和更長的無進展生存時間(7.0個月 vs 4.5個月，P=0.025)。結(jié)論晚期NSCLC 腫瘤組織中RRM1 mRNA低表達患者吉西他濱維持治療疾病控制率更高；無進展生存時間更長，RRM1 mRNA是獨立的預(yù)后因素，適合作為篩選吉西他濱維持治療獲益人群的指標。

【關(guān)鍵詞】RRM1 mRNA；非小細胞肺癌；吉西他濱；維持治療

(ThePracticalJournalofCancer,2016,31:022～025)

近年來，吉西他濱由于其較好的療效和較小的累積毒性而成為晚期非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)維持治療比較有前景和希望的藥物之一[1-2]。然而，在臨床應(yīng)用吉西他濱于晚期NSCLC維持治療的過程中，腫瘤對吉西他濱的耐藥仍然是導(dǎo)致部分患者疾病進展的主要原因之一，因此有必要篩選預(yù)測吉西他濱維持治療療效的指標。

核糖核苷酸還原酶(ribonucleotide reductase，RR) 是DNA合成通路中的限速酶，包括M1、M2 兩種亞型，是吉西他濱主要作用靶點之一，其M1亞基即RRM1在體內(nèi)及體外多項研究中均被證實與吉西他濱的療效有關(guān)[3-4]。然而，既往的研究報道的多數(shù)是RRM1 mRNA與吉西他濱聯(lián)合鉑類一線治療晚期NSCLC療效的關(guān)系，目前尚無研究報道其在吉西他濱維持治療中的療效預(yù)測價值。為此，我們進行了本項研究，以分析晚期NSCLC腫瘤組織RRM1 mRNA表達水平與吉西他濱維持治療療效的相關(guān)性。

1材料與方法

1.1　資料

收集2009年9月至2013年8月在廣州市番禺區(qū)中心醫(yī)院腫瘤科以吉西他濱單藥(1 000 mg/m2靜脈滴注30 min，第1天，第8天，每3周一次)進行維持治療的晚期NSCLC共40例，腫瘤組織為支氣管纖維鏡活檢或肺穿刺組織石蠟標本。

入組標準：①經(jīng)細胞學或組織學確診為非小細胞肺癌；②按照AJCC/UICC第七版TNM分期分為Ⅳ期；③一線予4～6個周期不含吉西他濱的鉑類聯(lián)合方案化療取得疾病縮小或穩(wěn)定；④治療前常規(guī)行血常規(guī)、肝腎功能、心電圖檢查并進行體力狀況(PS)評價，具有正常的造血功能和心肝腎功能及良好的PS狀態(tài)，適合進行吉西他濱單藥維持治療。

1.2　方法

1.2.1檢測腫瘤組織中RRM1 mRNA水平將樣本勻于均質(zhì)溶液中，65 ℃處理2 h；將反應(yīng)后的混合物離心，去除殘留的石蠟和碎片，然后將上清液轉(zhuǎn)移到一個新的離心管中；在96孔的反應(yīng)板上每孔加入40 ml樣品混合液，此外每一孔還加入18.5 ml無RNA酶的去離子水，33.3 ml的裂解液，2 ml的阻斷劑，1 ml的磁珠和5 ml的特異結(jié)合目標基因的探針；將反應(yīng)板密封后置于54 ℃ 750 rpm搖床孵育18 h。然后用96孔過濾板過濾混合物。真空狀態(tài)下，用250 ml的洗滌緩沖液(0.1×SSC 和0.03%鋰十二烷基硫酸鈉)洗滌3次，去除未結(jié)合的RNA和其它雜質(zhì)；通過以下幾步檢測結(jié)合到探針上的目標mRNA ：①50 ℃下，在100 μl預(yù)擴增溶液中孵育1 h；②用200 μl的洗滌緩沖液洗滌兩次；③50 ℃下，在100 μl擴增溶液中孵育1 h；④用200 μl的洗滌緩沖液洗滌兩次；⑤50 ℃下，在100 μl探針標記液中孵育1 h；⑥用200 μl的洗滌緩沖液洗滌兩次。50 ℃下，用100 μl SA-PE溶液處理30 min；用Luminex 200系統(tǒng)分析每個樣品的熒光值，經(jīng)廣州益善生物技術(shù)有限公司提供數(shù)據(jù)處理軟件產(chǎn)生最終結(jié)果。

1.2.2療效評價每2個療程吉西他濱化療后對目標病灶及非目標病灶進行療效評價。按照實體瘤療效評價標準(Response Evaluation Criterion in Solid Tumor，RECIST)[5]進行療效評價，療效定義為：①完全緩解(complete response,CR)：所有目標病灶和非目標病灶均消失，且腫瘤標志物正常；②部分緩解(partial response，PR)：基線病灶長徑總和縮小 30%；③疾病穩(wěn)定(stable disease,SD)：基線病灶長徑總和縮小未達PR或增加未到PD，1個或多個非目標病灶和(或)標志物異常；④疾病進展(progression disease，PD)：基線病灶長徑總和增加 20%或出現(xiàn)新病灶和(或)非目標病灶進展。

總生存(over survival,OS)定義為患者開始維持治療至患者死亡或末次隨診時間，無進展生存(progression-free survival,PFS)定義為患者開始維持治療至疾病進展或雖疾病尚未進展但患者因任何原因死亡的時間，均以月為計算單位。

1.3　統(tǒng)計學分析

兩組的年齡、維持化療周期數(shù)采用t檢驗，性別、PS狀態(tài)、病理、吸煙狀態(tài)、一線化療療效、維持化療療效、接受二線化療比例等采用Pearson χ2檢驗，采用Kaplan-Meier生存分析法進行單因素生存分析，并進行Log-rank時序檢驗，采用Cox 回歸以前進法進行多因素分析。應(yīng)用SPSS 17.0軟件進行分析，檢驗水準P<0.05，均為雙側(cè)檢驗有意義。

2結(jié)果

2.1　病例資料

40例中位年齡57歲(36～78歲)，≥65歲10例，<65歲30例；男性24例，女性16例，男女比例為1.5∶1；腺癌30例，鱗癌8例，其它2例；PS評分0分8例，1分29例，2分3例；中位維持化療周期數(shù)為4個周期(范圍1～12個)；吉西他濱維持化療PR 8例(20%)，SD 20例(50%)，PD 12例(30%)。

2.2　腫瘤組織中RRM1 mRNA表達水平

40例腫瘤組織中RRM1 mRNA的中位表達值為0.28(范圍0.08～0.60)，均數(shù)(0.30±0.15)；按照RRM1 mRNA表達水平分組，40例患者中21例為低表達組(≤0.3)，19例高表達組(>0.3)，RRM1 mRNA低表達組吉西他濱維持治療疾病控制率(PR+SD)較高(85.7% vs 52.6%，P=0.023)，高表達組接受二線化療患者的比例較高(63.2% vs 28.5%，P=0.028)，其余臨床特征兩組間無明顯統(tǒng)計學差異，見表1。

表1　兩組患者的臨床特征(例，%)

2.3　生存結(jié)果

全組中位生存時間(Median survival time,MST)為14.9個月(95%CI:10.5-19.3)，中位PFS為5.4個月(95%CI:3.5～7.3)，1年生存率為57.7%。RRM1 mRNA低表達組與高表達組的MST 分別為15.6個月(95%CI:12.5～18.8) 和12.1個月(95%CI:9.1～15.1)(P=0.582)，中位PFS為7.0個月(95%CI:2.8～11.2) 和4.5個月(95%CI:1.7～7.3)(P=0.025)(圖1、圖2、表2)。

圖1　RRM1 mRNA低表達組和RRM1 mRNA高表達

圖2　RRM1 mRNA低表達組和RRM1 mRNA高表達

表2　總生存和無進展生存時間比較/%

2.4　Cox多因素分析

Cox多因素回歸分析顯示，RRM1 mRNA表達水平、吸煙狀態(tài)是影響PFS的獨立預(yù)后因素，RRM1 mR

NA高表達(P=0.041)、吸煙(P=0.000)提示患者PFS較短(表3)。

表3　多因素回歸分析

3　討論

Brodowicz等[1]的一項Ⅲ期隨機對照研究表明，晚期NSCLC一線4周期吉西他濱聯(lián)合順鉑方案化療后疾病無進展的患者接受吉西他濱單藥維持治療較最佳支持治療可以顯著延長患者無進展生存時間。Perol等發(fā)表的IFCT-GFPC0502研究[2]也發(fā)現(xiàn)晚期NSCLC吉西他濱聯(lián)合鉑類治療后予吉西他濱維持治療較觀察組雖然未見OS明確差別，但吉西他濱維持治療PFS顯著延長。國內(nèi)李俊等[6]的研究也發(fā)現(xiàn)，吉西他濱維持治療較最佳支持治療可以延長晚期NSCLC患者PFS。與這些研究結(jié)果相比較而言，我們的研究雖然未設(shè)觀察組進行對照，但是可以看到吉西他濱維持治療全組患者的PFS達到了5.4個月，與文獻報道相似，因此以上研究及我們的發(fā)現(xiàn)提示吉西他濱維持可以改善晚期NSCLC的無進展生存。

但是，國內(nèi)外的一些研究結(jié)果也發(fā)現(xiàn)，并不是所有的晚期NSCLC患者都能從吉西他濱的藥物治療中獲益。Rosell等[4]進行的一項回顧性研究發(fā)現(xiàn)RRM1 mRNA表達情況與吉西他濱一線聯(lián)合鉑類化療療效存在顯著相關(guān)性，RRM1 mRNA低表達患者較高表達患者生存時間顯著延長，認為RRM1 mRNA的低表達患者才可能是晚期NSCLC一線吉西他濱聯(lián)合鉑類化療的獲益人群。Simon等[7]報道的根據(jù)ERCC1和RRM1表達情況(RT-PCR檢測)進行選擇用藥的前瞻性Ⅱ期隨機對照研究更進一步證實了RRM1 mRNA的表達情況在晚期NSCLC一線治療中的預(yù)測價值結(jié)果，其結(jié)果發(fā)現(xiàn)根據(jù)RRM1 mRNA的表達選擇治療人群使得治療

的結(jié)果明顯好于一般的第三代藥和鉑類聯(lián)合的標準方案。而國內(nèi)張艷等[8]進行的薈萃分析也發(fā)現(xiàn)，RRM1低表達的晚期NSCLC患者吉西他濱化療有效率明顯高于高表達患者。

以上研究結(jié)果提示我們，RRM1 mRNA低表達的患者可能是吉西他濱聯(lián)合鉑類一線化療的獲益人群，但是應(yīng)當注意到上述結(jié)論是基于一線治療的研究結(jié)果，無法回答RRM1 mRNA表達水平能否預(yù)測吉西他濱維持治療療效這一問題。而我們的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，RRM1 mRNA低表達的患者吉西他濱維持治療較高表達的患者有較高的疾病控制率和較長的PFS，多因素分析顯示，RRM1 mRNA表達水平是吉西他濱維持治療PFS的獨立預(yù)后因素(P=0.041)，這一結(jié)果與既往RRM1 mRNA預(yù)測吉西他濱一線治療療效的研究結(jié)果類似。但是，與既往的吉西他濱一線治療研究結(jié)果不同的是，在我們的研究中并沒有發(fā)現(xiàn)RRM1 mRNA低表達的患者較高表達患者有更長的OS獲益，我們考慮其原因可能是由于病例數(shù)較少以及RRM1 mRNA高表達組較低表達組的有更多的患者在疾病進展后接受了二線治療所致。

綜上所述，吉西他濱維持治療雖然可以延長晚期NSCL患者PFS，但是應(yīng)當注意到并不是所有的患者都能從中獲益，我們的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)RRM1 mRNA低表達的患者吉西他濱維持治療較高表達的患者疾病控制率更高，PFS更長，可以考慮作為篩選吉西他濱維持治療獲益人群的指標。最后，由于我們的研究僅僅是一項小樣本的回顧性研究，因此有必要擴大樣本量進行進一步的分析或者進行前瞻性的研究分析來進一步明確RRM1 mRNA表達水平對晚期NSCLC吉西他濱維持治療療效的預(yù)測價值。

參考文獻

[1]Brodowicz T,Krzakowski M,Zwitter M,et al.Cisplatin and gemcitabine first-line chemotherapy followed by maintenance gemcitabine or best supportive care in advanced non-small cell lung cancer:a phase Ⅲ trial〔J〕.Lung Cancer,2006,52(2):155-163.

[2]Perol M,Chouaid C,Perol D,et al.Randomized,phase Ⅲ study of gemcitabine or erlotinib maintenance therapy versus observation,with predefined second-line treatment,after cisplatin-gemcitabine induction chemotherapy in advanced non-small-cell lung cancer〔J〕.J Clin Oncol,2012,30(28):3516-3524.

[3]Bepler G,Kusmartseva Irina,Sharma S,et al.RRM1 modulated in vitro and in vivo efficacy of Gemcitabine and platinum in non-small-cell lung cancer〔J〕.J Clin Oncol,2006,24(29):4731-4737.

[4]Rosell R,Danenberg K,Alberola V,et al.Ribonucleotide reductase messenger RNA expression and survival in Gemcitabine/Cisplatin treated advanced non-small-cell lung cancer patients〔J〕.Clin Cancer Res,2004,10(4):1318-1325.

[5]Patrick Therasse,Susan G,Arbuck,et al.New guidelines to evaluate the response to treatment in solid tumors〔J〕.J Natl Cancer Inst,2000,92(3):205-216.

[6]李俊，郭曉紅，孫愛華，等.吉西他濱維持治療晚期非小細胞肺癌的療效分析〔J〕.中國醫(yī)藥科學，2012，2(13):74-75.

[7]Simon G,Sharma A,Li X,et al.Feasibility and efficacy of molecular analysis-directed individualized therapy in advanced non-small-cell lung cancer〔J〕.J Clin Oncol,2007,25(19):2741-2746.

[8]張艷,蘇欣,施毅,等.RRM1表達與吉西他濱治療晚期NSCLC療效關(guān)系:Meta分析〔J〕.解放軍醫(yī)學雜志,2012,37(2):135-140.

(編輯：吳小紅)

Analysis of the Relationship between RRM1 mRNA Expression Level and Efficacy of Gemcitabine Maintenance Therapy for Advanced Non-Small Cell Lung Cancer

LINLiping,ZHANGXuchao,HUJiazhu,etal.PanyuCentralHospital，Guangzhou,511400

【Abstract】ObjectiveTo investigate the relationship between RRM1 mRNA expression level in tumor tissues and the clinical efficacy of gemcitabine maintenance therapy for advanced non-small cell lung cancer.MethodsThe expression level of RRM1 mRNA in tumor tissues of 40 patients with advanced NSCLC were detected by the suspension biochip.Relationships between RRM1 mRNA expression level and the clinical characteristics,efficacy of gemcitabine maintenance therapy,progression free survival and overall survival were analyzed.ResultsThere had no significant difference between RRM1 mRNA low expression group and high expression group in clinical characteristics and overall survival (15.6 months vs 12.1 months,P=0.582).However,RRM1 mRNA low expression group had higher disease control rate (DCR) (85.7% vs 52.6%,P=0.023 ) and longer progression-free survival (PFS) (7.0 months vs 4.5 months,P=0.025).ConclusionPatients with RRM1 mRNA low expression have significantly higher DCR and longer PFS in gemcitabine maintenance therapy.RRM1 mRNA expression level is independent prognostic factor and it can be a indicator in selecting patients to accept gemcitabine maintenance therapy.

【Key words】RRM1 mRNA;Non-small cell lung cancer;Gemcitabine;Maintenance therapy

中圖分類號：R734.2

文獻標識碼：A

文章編號：1001-5930(2016)01-0022-04

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2016.01.007

通訊作者：曹小龍

基金項目：作者單位:511400 廣州市番禺區(qū)中心醫(yī)院(林立平，胡家柱，黃福喜，李薇綻，黎秀月，韓建軍，曹小龍)；511400 番禺區(qū)腫瘤研究所(林立平，胡家柱，黃福喜，李薇綻，黎秀月，韓建軍，曹小龍)；510080 廣東省人民醫(yī)院(張緒超)；510080 廣東省肺癌研究所(張緒超)

收稿日期(2015-01-01修回日期 2015-10-16)