劉東芳　王曉紅　劉春秋　趙洪煥　張曉斌　楊俊泉　張成俠

王建功　汪宏斌　趙　凱

作者單位:063000 河北省唐山市人民醫(yī)院

p53蛋白在非小細胞肺癌中表達及與其臨床特征、同步放化療療效的關(guān)系分析

劉東芳王曉紅劉春秋趙洪煥張曉斌楊俊泉張成俠

王建功汪宏斌趙凱

作者單位:063000 河北省唐山市人民醫(yī)院

【摘要】目的檢測p53蛋白在非小細胞肺癌患者中的表達水平，并探討其表達與臨床特征的相關(guān)性及同步放化療療效的關(guān)系。方法采用免疫組化方法，檢測100例非小細胞肺癌組織中p53表達水平，結(jié)合顯微圖像分析儀測定p53免疫組化強度，以陽性單位為定量分析單位。分析p53表達水平與患者臨床病理特征及同步放化療療效的關(guān)系。結(jié)果p53蛋白在非小細胞肺癌中陽性表達率為48%；p53表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠端轉(zhuǎn)移和TNM分期均無顯著相關(guān)性；非小細胞肺癌p53蛋白表達者放化療效果顯著低于p53蛋白表達陰性患者，且p53蛋白表達與患者生存期呈負相關(guān)。結(jié)論p53表達與否影響非小細胞肺癌患者化療效果，與生存期直接相關(guān)，臨床治療時可考慮將其作為治療靶點。

【關(guān)鍵詞】非小細胞肺癌；p53；同步化療

(ThePracticalJournalofCancer,2016,31:026～028)

肺癌已成為世界范圍內(nèi)威脅人類生存的一大殺手，其中非小細胞肺癌所占比例為70%～80%[1-2]。本文對我院近幾年收集的100例同步放化療非小細胞肺癌患者p53表達情況進行檢測，并分析其與患者臨床參數(shù)和生存期的相關(guān)性，探討p53蛋白表達與同步放化療療效的關(guān)系。

1材料與方法

1.1　一般資料

選取我院2009年9月-2014年9月收治的非小細胞肺癌患者石蠟標本100例，均有明確的病理學診斷，病理組織分型根據(jù)WHO/IASLC肺和胸膜腫瘤組織學分類(1999)標準，按2009年國際抗癌聯(lián)盟(UICC)肺癌TNM分期第7版標準對臨床分期進行分類，所有患者均采用手術(shù)和放療聯(lián)合治療手段，所有患者均無化療禁忌癥。

1.2治療方法

為便于醫(yī)生制定后期治療方案，治療前所有患者均行常規(guī)臨床分期檢查，主要包括胸部、顱腦CT或MR，腹部CT或B超，對所有患者進行全身核素掃描；所有患者行常規(guī)心電圖、血常規(guī)、尿常規(guī)、生化常規(guī)等檢查。

放療：所有患者均先行放射治療，均采取平臥式，雙手抱頭，先用熱縮體膜進行固定，然后對體表進行定點標記。采用6-MV直線加速器常規(guī)分割三維適形放療，放射劑量為2 Gy/次，1周5次，達到總劑量為60~70 Gy/6~7周。

化療：放療的第1天即開始同步化療，方案為第1~5天、第29~33天使用依托泊苷(劑量為50 mg/m2)，第1、8、29、36天使用順鉑(劑量為50 mg/m2)。為防止患者出現(xiàn)惡心、嘔吐等副作用，常規(guī)使用5-羥色胺受體阻斷劑等藥物。

1.3　療效評價

記錄所有患者放療結(jié)束1個月后臨床恢復情況，并囑咐患者每3個月進行1次復查。采用實體瘤客觀評價標準(RECIST)對患者治療效果進行評價，共分為4個等級：完全緩解(complete response，CR)指目標病灶全部消失達4周以上；部分緩解(partial response，PR)指基線病灶最大徑之和至少減少30%達4周以上；疾病進展(progression disease，PD)指基線病灶最大徑之和至少增加20%或出現(xiàn)新病灶；病變穩(wěn)定(stable disease，SD)指基線病灶最大徑之和減少但并未達到PR或有增加但未達PD。此外，治療客觀有效率(objective response rate，ORR)為CR+PR兩種情況，疾病控制率(disease control rate，DCR)指CR+PR+SD。總生存期(overall survival，OS)指從治療首日至死亡日或統(tǒng)計日，隨訪截止2014年9月，以月為單位計算。

1.4　p53表達檢測

應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測p53在非小細胞肺癌組織中的表達水平，病理科負責切取石蠟標本組織，厚度為4 μm，嚴格按照試劑盒說明書進行操作，首先采用高溫高壓對抗原進行修復，然后自然冷卻至室溫，紗布將殘留修復液小心擦去，然后滴加二抗，孵育過夜，嚴格按照說明書并根據(jù)預實驗選擇合適的一抗?jié)舛?，滴加一抗，對照組采用磷酸鹽緩沖液(PBS)進行替代。采用萊卡顯微鏡對結(jié)果進行分析，隨機選取5個高倍鏡(×400)視野并計算平均數(shù)進行陰陽性結(jié)果判定，其中陽性表達細胞定義為細胞核染為棕黃色，且陽性細胞比例≥10%；而陰性表達細胞指細胞核內(nèi)未見棕黃色染色顆?；蜿栃约毎壤?10%。

1.5　統(tǒng)計學方法

所有數(shù)據(jù)均采用Ave±SED表達，均記錄在Excel表格，應(yīng)用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件進行分析。采用Spearman檢驗是否存在相關(guān)性，Log-rank分析Kaplan-Meier曲線，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結(jié)果

2.1　p53蛋白表達陽性率及與臨床參數(shù)相關(guān)性分析

p53為胞內(nèi)蛋白，染色顆粒位于細胞核內(nèi)，免疫組化結(jié)果顯示，p53在部分非小細胞肺癌組織中呈陽性表達；統(tǒng)計結(jié)果顯示，100例癌組織中48例p53表達陽性，其陽性率為48%(48/100)，p53陰性52例，陰性率為52%(52/100)。p53陽性表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠端轉(zhuǎn)移和TNM分期均無相關(guān)性(表1)，且差異均無統(tǒng)計學意義(P均>0.05)。

表1　p53蛋白表達與非小細胞肺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系/例

2.2　放化療短期療效客觀分析

放療結(jié)束1個月之后，對患者進行客觀療效分析，結(jié)果顯示，CR 34例，PR 32例，SD 30例，PD 4例，ORR為66%(66/100)，DCR為96%(96/100)；按照p53是否表達，將患者分為p53陽性組和p53陰性組，其中陽性組ORR為54.1%(26/48)，陰性組ORR為73.1%(38/52)，對兩組ORR進行統(tǒng)計分析，結(jié)果顯示，p53陰性組ORR顯著高于陽性組，且差異有統(tǒng)計學意義(P=0.0215)。

2.3　p53蛋白表達對非小細胞肺癌患者總體生存率影響

將100例患者按照是否表達p53分為陽性組和陰性組，并對其生存期進行分析，結(jié)果顯示，p53陽性表達組患者中位生存期為16個月，p53陰性表達組患者中位生存期為41個月；p53陽性表達組患者和陰性表達組患者平均生存期分別為20個月和42個月，對其進行統(tǒng)計分析結(jié)果顯示，p53陰性表達組患者生存期明顯長于陽性表達患者，差異有統(tǒng)計學意義(圖1)。

圖1　非小細胞肺癌患者生存曲線分析

3　討論

非小細胞肺癌已逐漸成為威脅男性和女性健康生存的一大殺手，盡管隨著醫(yī)學技術(shù)的進步和對其致病機制的深入研究，其治療已取得較大進展，但臨床部分患者對放化療不敏感，降低了患者治療效果。作為最早發(fā)現(xiàn)的腫瘤抑制基因，p53編碼的p53蛋白在調(diào)節(jié)細胞周期和抑制細胞癌變過程中發(fā)揮重要作用。然而，p53發(fā)生突變后不僅喪失了抑癌基因功能，反而還獲得了促進細胞惡性轉(zhuǎn)化的癌基因功能。Mayo 等研究結(jié)果顯示，p53表達異常與癌癥發(fā)生及進展密切相關(guān)，且對患者放化療效果產(chǎn)生較大影響，可能作為預測患者預后的一個重要指標[3]。

本研究中，我們就p53在非小細胞肺癌組織中的表達進行蛋白水平的檢測，結(jié)果顯示，100例癌組織中p53蛋白在48例中均有不同程度的表達，其陽性表達率為48%，張洪蘭等曾報道，p53蛋白在非小細胞肺癌組織中表達陽性率為44.3%[4]，這與我們的報道結(jié)果相類似。這一結(jié)果提示，p53蛋白在非小細胞肺癌組織中表達呈現(xiàn)群體性差異，該種差異可能直接影響患者臨床療效。我們對p53蛋白表達與非小細胞肺癌患者臨床參數(shù)進行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示，p53蛋白患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分析和遠端轉(zhuǎn)移均無顯著相關(guān)，這與趙君等人研究報道結(jié)果相一致[5]。

本研究中，我們將患者分為p53陽性表達組和p53陰性表達組，并分析放化療效果以研究其表達與非小細胞肺癌同步放化療療效關(guān)系，結(jié)果顯示，放療結(jié)束1個月之后，100例患者中，CR為34例，PR為32例，SD為30例，PD為4例，而ORR為66%(66/100)，DCR為96%(96/100)；其中p53陽性組ORR為54.1%(26/48)，p53陰性組ORR為73.1(38/52)，p53陰性組ORR顯著高于陽性組，這與汪宏斌等人以局部晚期非小細胞肺癌患者為研究對象揭示的p53蛋白表達患者療效較差結(jié)果相一致[6]。這提示著p53蛋白表達可能與非小細胞肺癌患者生存期相關(guān)，因此，接下來我們統(tǒng)計分析100例非小細胞肺癌患者生存期，結(jié)果顯示，p53陽性表達組患者中位生存期為16個月，遠遠低于p53陰性表達組患者41個月中位生存期；p53陽性表達組患者和陰性表達組患者平均生存期分別為20個月和42個月，統(tǒng)計分析結(jié)果顯示，p53陰性表達組患者生存期明顯長于陽性表達患者，這與余輝等報道的結(jié)果相一致[7]。

綜上所述，p53蛋白在非小細胞肺癌患者中的陽性表達率為48%，雖然p53蛋白表達與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分析和遠端轉(zhuǎn)移均無顯著相關(guān)，但是p53蛋白表達直接影響患者放化療療效，且陽性表達患者生存期顯著低于陰性表達患者，因此，臨床治療非小細胞肺癌患者時，應(yīng)該探尋以p53為靶點的輔助治療手段以提高臨床療效。

參考文獻

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[2]Yano T,Okamoto T,Fukuyama S,et al.Therapeutic strategy for postoperative recurrence in patients with non-small cell lung cancer〔J〕.World J Clin Oncol,2014,5(5):1048-1054.

[3]Mayo LD,Dixon JE,Durden DL,et al.PTEN protects p53 from Mdm2 and sensitizes cancer cells to chemotherapy〔J〕.J Biol Chem,2002,277(7):5484-5489.

[4]張洪蘭，舒紅，姜衛(wèi)國.PTEN、p53和P-gp在非小細胞肺癌中的表達及和預后的關(guān)系〔J〕.中國肺癌雜志,2009,12(11):1213-1216.

[5]趙君，丁衛(wèi)忠，劉景義，等.SKP2、p53蛋白在非小細胞肺癌中的表達及其臨床意義〔J〕.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學,2009,17(3):473-476.

[6]汪宏斌，楊俊泉.局部晚期非小細胞肺癌p53蛋白表達與同步放化療療效的關(guān)系研究〔J〕.中國全科醫(yī)學,2014,17(3):282-285.

[7]余輝，吳一龍，戎鐵華，等.非小細胞肺癌組織中p53蛋白的表達對預后及術(shù)后放療療效的影響〔J〕.腫瘤研究與臨床,2006,18(1):16-18.

(編輯：吳小紅)

The Correlations between p53 Expression and Clinical Characteristics and

Chemo-radiotherapy Efficacy in Non-small Cell Lung Cancer

LIUDongfang，WANGXiaohong，LIUChunqiu，etal.Tangshanpeople'shospital，Tanshan，063000

【Abstract】ObjectiveTo investigate p53 expression in non-small cell lung cancer,and its relationships with clinical characteristics and chemoradiotherapy efficacy.MethodsImmunohistochemistry was used to detect the expression of p53 in 100 cases of non-small cell lung cancer tissues,and the expression strength was detected using micro image analyzer.The relationships between p53 expression and clinical characteristics and chemo-radiotherapy efficacy were analyzed.ResultsThe positive rate of p53 in non-small cell lung cancer was 48%;there were no correlations among p53 expression and lymph node metastasis,distant metastasis or TNM stage;NSCLC patients with p53 expression had worse chemo-radiotherapy effect than those without p53 expression,and p53 expression was negatively associated with patients' survival time.ConclusionThe status of p53 expression have effect on synchronous chemotherapy in patients with non-small cell lung cancer,and is directly related with the survival time.p53 may be represented as a promising target for non-small cell lung cancer.

【Key words】Non-small cell lung cancer； p53；Synchronous chemotherapy

中圖分類號：R734.2

文獻標識碼：A

文章編號：1001-5930(2016)01-0026-03

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2016.01.008

收稿日期(2015-01-20修回日期 2015-06-11)