唐金琦，譚萬龍

(南方醫(yī)科大學南方醫(yī)院泌尿外科，廣東廣州　510515)

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·綜述·

液基細胞學在膀胱腫瘤診斷中的進展

唐金琦，譚萬龍

(南方醫(yī)科大學南方醫(yī)院泌尿外科，廣東廣州510515)

摘要：膀胱腫瘤是泌尿系統(tǒng)最常見的一類腫瘤，尿細胞學是其主要診斷方法之一。液基細胞學是一種新的細胞學制片技術(shù)，可提高脫落細胞學診斷惡性腫瘤的敏感性，目前主要應用于宮頸疾病、肺腫瘤及消化道腫瘤等的診治，但較少應用于膀胱腫瘤的診斷。本文主要闡述液基細胞學在膀胱腫瘤診斷中的應用及前景。

關(guān)鍵詞:液基細胞學; 膀胱腫瘤;脫落細胞學

膀胱腫瘤是我國泌尿外科最常見的腫瘤，診斷方法主要有膀胱鏡和尿脫落細胞學檢查。膀胱鏡檢查和活檢是診斷膀胱腫瘤的“金標準”，但其為侵入性有創(chuàng)的檢查手段且價格較為昂貴，患者不易接受。尿細胞學檢查是膀胱腫瘤診斷和術(shù)后隨訪的主要方法之一，傳統(tǒng)的尿脫落細胞學檢查因其取材方便、制片簡單及特異性高等優(yōu)點，已廣泛應用于臨床實踐中，但受傳統(tǒng)尿脫落細胞學的制片染色技術(shù)等因素的影響，使得其敏感性較低。液基細胞學檢查是采用液基薄層細胞檢測系統(tǒng)檢測脫落細胞并進行細胞學分類診斷的技術(shù)，20世紀90年代末出現(xiàn)以來，應用越來越廣泛[1-2]。目前該技術(shù)主要應用于婦科宮頸疾病的診斷與篩查[3-4]，在其他諸如肺癌等診斷中，也證實了其可提高診斷結(jié)果的準確性及可靠性[5]，在膀胱腫瘤診斷方面報道較少，但現(xiàn)有的液基細胞學膀胱腫瘤診斷的相關(guān)研究中，從不同層面證實了其可提高膀胱腫瘤的診斷率。

1目前常見的幾種液基細胞學檢查技術(shù)

1.1新柏氏液基細胞學技術(shù)(Thin-Prepcytologictest，TCT) 美國Cytyc公司Thin-Prep膜式過濾技術(shù)使用Thin-Prep2000自動制片，機軸和頂端由帶過濾膜的圓柱型中空過濾器相連, 使得過濾器在標本瓶內(nèi)自轉(zhuǎn)進而帶動液體旋動，分散黏液同時混勻細胞。當過濾裝置停止轉(zhuǎn)動后，通過相連的負壓管的抽吸，細胞粘附在過濾膜上，同時液體通過濾膜上的微孔進入過濾裝置；然后過濾器翻轉(zhuǎn)180°接觸并轉(zhuǎn)移細胞至玻片上，細胞薄層玻片就形成了。由于使用由數(shù)萬個直徑8μm的孔隙構(gòu)成的高精密度過濾膜，因而能有效排除炎性細胞、血細胞及黏液等干擾物。

1.2超柏氏液基薄層細胞學技術(shù)(autoCyteprepliquid-basedcytologictest，LCT)美國Tripath公司的離心沉淀方法制作液基薄片技術(shù)首先用渦旋震蕩標本瓶使采集器上的細胞進入瓶內(nèi)液體中,然后用自動化移液器進行梯度離心，由于試管中的比重液，使標本中那些無診斷意義的的細胞及黏液等浮在離心液的上部。試管底部的有診斷意義的細胞再重新懸浮、混勻并轉(zhuǎn)移到細胞沉降管中，通過自然重力作用，細胞便沉降并附著于下方的載玻片上，形成薄層細胞玻片后便在操作臺上自動染色。

1.3利普液基細胞學技術(shù)(Liquid-Preptest,LPT)美國LPT是由機器離心加上人工涂片的半自動制片技術(shù)，關(guān)鍵在于其細胞粘附包裹技術(shù)，通過梯度離心及特有的細胞基液將壞死物、黏液與有診斷意義的細胞相分離并形成均勻的懸浮液，再通過人工涂片制成單層薄片。該技術(shù)簡單、無需昂貴的儀器設(shè)備，形成的細胞薄層背景均勻、干凈，缺點在于難于去除紅細胞的干擾,血性標本要多次檢驗。

2液基細胞學與傳統(tǒng)脫落細胞學在診斷膀胱腫瘤中的比較

2.1液基細胞學與傳統(tǒng)脫落細胞學涂片質(zhì)量的比較傳統(tǒng)的脫落細胞學因制片技術(shù)使得標本中收集的有效細胞成分較少，涂片中混有較多的黏液、血性成分等，涂片厚薄不一，不易觀察，涂片質(zhì)量較差。相反液基細胞學因其自動化及標準化的技術(shù)使得涂片均勻，細胞平鋪，厚薄一致，有意義的細胞保存良好，結(jié)構(gòu)清晰，減少干擾的炎性成分、血性成分及黏液等，進而獲得更高的涂片質(zhì)量。根據(jù)文獻報道液基細胞學較傳統(tǒng)脫落細胞學有更多細胞量、更清楚的背景和更好的細胞形態(tài)學特征，可以獲得更好的涂片質(zhì)量[6-10]，而細胞學涂片質(zhì)量是影響病理醫(yī)生做出診斷的重要因素。

2.2液基細胞學與傳統(tǒng)脫落細胞學診斷膀胱腫瘤特異性的比較尿細胞學診斷膀胱腫瘤的特異性高，據(jù)文獻報道特異性可達85%～100%[11]，可以說是膀胱腫瘤診斷的“金標準”，而液基細胞學保留了細胞學的高特異性的優(yōu)點：葉見波等[10]通過對208例疑似膀胱癌患者尿液標本進行傳統(tǒng)細胞學及液基細胞學檢查比較，發(fā)現(xiàn)傳統(tǒng)細胞學及液基細胞學檢測膀胱癌患者的特異度均為99.3%；張珂[12]的研究表明液基細胞學檢測膀胱腫瘤的特異性為98.2%，傳統(tǒng)脫落細胞學特異性為95.9%，差異無統(tǒng)計學意義；有的研究表明傳統(tǒng)脫落細胞學與液基細胞學診斷膀胱腫瘤的特異性為100%[6]。綜合國內(nèi)外研究表明液基細胞學技術(shù)保持了細胞學檢查高度特異性的特點。

2.3液基細胞學與傳統(tǒng)脫落細胞學診斷膀胱腫瘤敏感性的比較作為腫瘤篩查與診斷的檢查方法，除了具備高特異性，還應具有較高的敏感性：有研究通過收集78例確診膀胱癌患者的尿液，同時進行液基細胞學及傳統(tǒng)尿液脫落細胞學的檢測，發(fā)現(xiàn)傳統(tǒng)脫落細胞學診斷的敏感性為77.36%，低于液基細胞學的敏感性88.46%，兩者的差異有統(tǒng)計學意義[14]；研究證實傳統(tǒng)細胞學的敏感性(37.5%)低于液基細胞學的敏感性(50%)，兩者差異同樣有統(tǒng)計學意義[6]；此外一些研究也同樣證明了液基細胞學診斷膀胱腫瘤的敏感性高于傳統(tǒng)的細胞學[10、12-13]。綜合國內(nèi)外的研究報道，雖然各個研究報道的敏感性數(shù)值存在差異，可能跟每個研究采用的方法、標本量、檢測人員經(jīng)驗等因素有關(guān)，但在各個研究的結(jié)果均表明液基細胞學的敏感性要高于傳統(tǒng)脫落細胞學，且差異具有統(tǒng)計學意義。

2.4液基細胞學與傳統(tǒng)細胞學對不同分期分級膀胱腫瘤診斷的敏感性比較腫瘤的分期分級是影響膀胱腫瘤預后的重要因素，根據(jù)文獻報道膀胱腫瘤的5年生存率呈分別從Ta～T1的91.9%到T4的10.2%，G1級的91.4%到G3的62.6%[15]，可見早期診斷、早期治療是治療膀胱腫瘤的關(guān)鍵。有研究通過收集305例疑似膀胱腫瘤患者的尿液標本，分別進行液基細胞學及傳統(tǒng)脫落細胞學檢查，檢查結(jié)果根據(jù)最終的病理結(jié)果進行驗證，研究發(fā)現(xiàn)在不同分期的膀胱腫瘤中，液基細胞學的敏感性均較傳統(tǒng)脫落細胞學高，但僅在T1期敏感性差異有統(tǒng)計學意義；在不同級別膀胱癌中，液基細胞學對尿路上皮癌Ⅱ級的敏感性較傳統(tǒng)細胞學提升且差異有統(tǒng)計學意義[12]。研究發(fā)現(xiàn)液基細胞學與傳統(tǒng)細胞學在低級別尿路上皮癌的敏感性分別為29.4%、11.1%，高級別尿路上皮癌中為60.6%、51.6%[6]；另一些相關(guān)的研究也表明在早期的膀胱腫瘤中液基細胞學的敏感性較傳統(tǒng)細胞學的敏感性有顯著提高[14]；可見液基細胞學較傳統(tǒng)細胞學在膀胱腫瘤的早期診斷方面更加具有優(yōu)勢。

3液基細胞學聯(lián)合膀胱腫瘤尿液標志物提高診斷膀胱腫瘤的敏感性

近年來，尿液中膀胱腫瘤標志物因其對膀胱腫瘤有較高的敏感性受到了廣泛的關(guān)注，美國食品藥品監(jiān)督管理局(FoodandDrugAdministration，F(xiàn)DA)已批準核基質(zhì)蛋白-22(nuclearmatrixprotein，NMP22)、膀胱腫瘤抗原(bladdertumorantigen，BTA)、免疫熒光細胞學(ImmunoCyt)等用于膀胱腫瘤的檢測，然而因尿液腫瘤標志物易受到炎癥、結(jié)石、其他惡性腫瘤等影響導致較高的假陽性率，降低其診斷膀胱腫瘤的特異性[16-17]。故單獨行上述檢查診斷膀胱腫瘤的作用受到了限制，而液基細胞學具有較高的特異性，可以說是膀胱腫瘤診斷的“金標準”，將液基細胞學與尿液腫瘤標志物聯(lián)合起來可以提高臨床應用價值，另外液基細胞學標本可進一步用于免疫組織化學等檢測[18-19]的優(yōu)點，避免重復取材人力物力的浪費。

3.1液基細胞學聯(lián)合NMP22提高診斷膀胱腫瘤的敏感性NMP22是一種與有絲分裂相關(guān)的蛋白質(zhì)，在尿路上皮腫瘤中存在高表達，有研究通過對疑似膀胱癌患者尿液進行液基細胞學與NMP22檢測，發(fā)現(xiàn)液基細胞學診斷膀胱腫瘤的敏感性為71.7%，兩者聯(lián)合后可提高敏感性至86.7%[20]。類似的研究也證明NMP22聯(lián)合液基細胞學檢測可以提高膀胱腫瘤診斷的敏感性[16、22-23]。

3.2液基細胞學聯(lián)合BTA提高膀胱腫瘤診斷的敏感性BTA是一種膀胱腫瘤抗原，是膀胱腫瘤生長過程中釋放出的蛋白水解酶。李紅全等[16]通過研究發(fā)現(xiàn)液基細胞學診斷膀胱腫瘤敏感性是72.9%，與BTA聯(lián)合后提高敏感性至87.5%。其他相關(guān)研究也表明BTA結(jié)合液基細胞學檢查可以提高膀胱腫瘤敏感性[21]。

3.3液基細胞學聯(lián)合細胞角蛋白20(cytokeratin-20，CK20)提高膀胱腫瘤診斷的敏感性CK20是構(gòu)成細胞骨架的重要成分，是上皮細胞中間絲組成成分，當上皮細胞惡變時，CK20合成增多，尿液中CK20含量相應就增加，被證明是潛在的膀胱腫瘤標志物。SOYUER等[23]報道液基細胞學與CK20聯(lián)合檢測可將單用液基細胞學診斷膀胱腫瘤的敏感性從75.9%提高至88.9%，其他一些研究也同樣證實了CK20聯(lián)合液基細胞學可提高膀胱腫瘤診斷的敏感性[24-26]。

3.4液基細胞學聯(lián)合ImmunoCyt提高膀胱腫瘤診斷的敏感性ImmunoCyt是利用抗體與膀胱腫瘤細胞表面抗原結(jié)合的檢測方法。MIAN等[27]研究得出液基細胞學與ImmunoCyt檢測診斷膀胱腫瘤敏感性分別為38.9%、84.9%，兩者聯(lián)合后可提高敏感性至89.3%，證實了液基細胞學聯(lián)合ImmunoCyt可提高膀胱腫瘤診斷的敏感性。

綜上所述，液基細胞學檢查可再進一步通過NMP22、BTA、CK20及ImmunoCyt等免疫組織化學檢測提高膀胱腫瘤診斷的敏感性，同時液基細胞學高特異性的及兩者無創(chuàng)性檢查等優(yōu)點，使聯(lián)合檢測具有廣泛的應用前景。

4應用前景及展望

同傳統(tǒng)的脫落細胞學相比較，液基細胞學保留了細胞學檢查高特異性的優(yōu)點，同時又具有標準化的制片程序，更好地保存了細胞標本，減少對細胞形態(tài)的破壞，避免重復取材，能得到相對更完整的細胞信息，避免了傳統(tǒng)脫落細胞學的涂片厚薄不一、背景干擾、細胞相互重疊的缺點，獲得更好的涂片質(zhì)量，最終提高膀胱腫瘤診斷的敏感性；同時液基細胞學標本還可以用于后續(xù)的免疫組織化學檢查，避免重復取材人力物力的浪費，而且液基細胞學聯(lián)合免疫細胞化學檢測能進一步提高診斷膀胱腫瘤的敏感性，提高膀胱腫瘤無創(chuàng)檢測水平。但目前液基細胞學在膀胱腫瘤診斷的相關(guān)研究相對較少，缺乏大樣本多中心的前瞻性隨機對照試驗研究，而且相關(guān)研究對于液基細胞學檢測次數(shù)及尿液標本留取的時機等均未涉及，得出的研究結(jié)果差異較大，需要進一步研究明確檢測次數(shù)及尿液標本留取時機等，進而為臨床工作提供指導。

綜上，液基細胞學診斷膀胱腫瘤有較高的敏感性，能較早地發(fā)現(xiàn)膀胱腫瘤，在膀胱腫瘤的診斷，尤其早期診斷中有較高的臨床應用價值；此外相對簡便性(患者只需留取尿液標本)、無創(chuàng)性的優(yōu)點，使其在膀胱腫瘤患者術(shù)后隨訪中也將具有廣泛的應用前景。

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(編輯何宏靈)

收稿日期：2015-09-13修回日期：2015-11-30

通訊作者：譚萬龍，教授，博士生導師.E-mail：tanwanlong@gmail.com

作者簡介:唐金琦(1989-),男(漢族),碩士研究生.研究方向：膀胱腫瘤.E-mail：740601236@qq.com

中圖分類號:R737.14

文獻標志碼:A

DOI：10.3969/j.issn.1009-8291.2016.04.023