鄒　燕，程愛平，林　燦

HPLC法同時(shí)測(cè)定氨咖黃敏膠囊中二組分的含量

鄒燕1*，程愛平1，林燦2

[摘要]目的建立高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定氨咖黃敏膠囊中對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因2種成分的含量。方法采用Agilent extend-C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱，流動(dòng)相為乙腈(A)-三乙胺溶液(1 mL三乙胺加79 mL水，調(diào)pH至3.1，B)(17∶83)，流速1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)217 nm；柱溫25 ℃，進(jìn)樣量15 μL。結(jié)果對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因的線性濃度范圍分別為831.33~2 078.33 μg/mL (r=0.999 6)和50.27~125.67 μg/mL (r=0.999 4)，兩組分平均回收率分別為99.99% (RSD=0.02%)和100.14% (RSD=0.52%)。結(jié)論該方法靈敏度、準(zhǔn)確度高，重復(fù)性好，適用于氨咖黃敏膠囊中對(duì)乙酰氨基酚和咖啡因2種有效成分的測(cè)定。

[關(guān)鍵詞]氨咖黃敏膠囊；對(duì)乙酰氨基酚；咖啡因；高效液相色譜；含量測(cè)定

[Abstract]ObjectiveTo establish a method for simultaneous determination of paracetamol and caffeine in paracetamol,caffeine,artificial cow-bezoar and chlorphenamine maleate capsules by HPLC.MethodsThe HPLC system consisted of Agilent extend-C18column (150 mm×4.6 mm,5 μm) with a mobile phase of acetonitrile (A)-triethylamine solution (1 mL triethylamine+ 79 mL water,pH 3.1,B) (17∶83),the flow rate was 1.0 mL/min and the detection wavelength was at 217 nm.The column temperature was 25 ℃,and the sample quantity was 15 μL.ResultsThe linear ranges of paracetamol and caffeine were 831.33~2 078.33 μg/mL (r=0.999 6) and 50.27~125.67 μg/mL (r=0.999 4),and the average recovery rates were 99.99% (RSD=0.02%) and 100.14% (RSD=0.52%).ConclusionThe method is of high sensitivity,accuracy and repeatability,it can be used for the determination of paracetamol and caffeine in paracetamol,caffeine,artificial cow-bezoar and chlorphenamine maleate capsules.

收稿日期：2015-03-28

通信作者*

DOI:10.14053/j.cnki.ppcr.201512021

Content determination of two components in paracetamol,caffeine,artificial cow-bezoar and chlorphenamine maleate capsules by HPLCZOU Yan1*,CHENG Ai-ping1,LIN Can2(1.Jiaxing Institiute for Food and Drug Control,Jiaxing 314000,China;2.Jiaxing University,Jiaxing 314000,China)

Key words：Paracetamol,caffeine,artificial cow-bezoar and chlorphenamine maleate capsules;Paracetamol;Caffeine;HPLC;Content determination

0引言

氨咖黃敏膠囊是感冒用藥類非處方藥，適用于緩解普通感冒及流行性感冒所引起的發(fā)熱、頭痛、打噴嚏、咽喉疼痛、鼻塞等癥狀。本品為復(fù)方制劑，主要有效成分為對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因、馬來酸氯苯那敏和人工牛黃。該藥物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收錄在《中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)》的化學(xué)藥品第三冊(cè)中[1]。在國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)中，對(duì)乙酰氨基酚的含量測(cè)定采用回流后外標(biāo)指示劑法，咖啡因則采用氯仿萃取后滴定法測(cè)定，這兩種方法操作較繁瑣、存在的不確定因素較多。本文主要通過高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因兩種成分的含量，結(jié)果表明方法可行，現(xiàn)報(bào)道如下。

1儀器與試藥

1.1儀器Agilent1200高效液相色譜儀(安捷倫公司)；UV-2501PC紫外分光光度計(jì)(日本島津公司)；XS105DU電子天平(梅特勒-托利多有限公司)；Delta320H酸度計(jì)(梅特勒-托利多有限公司)；超聲波清洗儀(USC502，上海波龍電子設(shè)備有限公司)。

1.2藥品與試劑氨咖黃敏膠囊(標(biāo)示量為對(duì)乙酰氨基酚250 mg/粒、咖啡因15 mg/粒，浙江康恩貝股份有限公司，批號(hào)：20140313、20140827、20141001)，對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品(含量100%，中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：100018-200408)，咖啡因?qū)φ掌?含量100%，中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：171215-201211)。磷酸(杭州化學(xué)試劑有限公司)分析純，乙腈(德國(guó)德姆施塔市墨客股份有限公司)色譜純，三乙胺[賽默飛世爾科技(中國(guó))有限公司]色譜純。

2方法與結(jié)果

2.1分析方法驗(yàn)證

2.1.1色譜條件色譜柱：Agilent extend-C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：A相為乙腈，B相為三乙胺-水(1∶79)，A∶B為17∶83；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：217 nm；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：15 μL。在該色譜條件下對(duì)照品中兩種成分的色譜峰分離度>1.5，理論塔板數(shù)均>2 000，符合使用條件。

2.1.2儲(chǔ)備溶液的配制精密稱取咖啡因?qū)φ掌?.54 mg置10 mL容量瓶中，加流動(dòng)相超聲5 min溶解后定量稀釋至刻度，搖勻，即得儲(chǔ)備液；放入4 ℃冰箱保存?zhèn)溆?。精密稱取對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品12.47 mg置于10 mL容量瓶中，精密加入上述咖啡因?qū)φ掌返膬?chǔ)備溶液1 mL，超聲3 min溶解后用流動(dòng)相定容得混合對(duì)照品溶液。

2.1.3供試品溶液的配制取氨咖黃敏膠囊30粒，取內(nèi)容物精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量(約相當(dāng)于對(duì)乙酰氨基酚250 mg)，置于20 mL容量瓶中，加入少量流動(dòng)相超聲溶解10 min，冷卻后定容。用濾紙過濾后，精密量取1 mL續(xù)濾液至10 mL容量瓶稀釋至刻度，即得供試品溶液。

2.1.4線性范圍取混合對(duì)照品溶液，依次精密吸取10、12、15、17、20、22、25 μL混合對(duì)照溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。見圖1。以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)、對(duì)照品濃度(X，μg/mL)為橫坐標(biāo)，分別繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。得對(duì)乙酰氨基酚方程Y=3.718 1 X+7 606.1 (r=0.999 6)，線性范圍831.33~2 078.33 μg/mL；咖啡因方程Y=40.252 X+1 186.2 (r=0.999 4)，線性范圍50.27~125.67 μg/mL。

圖1　HPLC色譜圖

2.1.5精密度試驗(yàn)取“2.1.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液，按“2.1.1”項(xiàng)條件，連續(xù)平行進(jìn)樣5次。結(jié)果顯示，對(duì)乙酰氨基酚峰面積的RSD為0.21%，咖啡因峰面積的RSD為0.15%。

2.1.6穩(wěn)定性試驗(yàn)為了考察溶液的穩(wěn)定性，取“2.1.3”項(xiàng)下供試品溶液，分別于0、2、4、24 h，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜分析條件進(jìn)行測(cè)定，記錄下2種成分的相應(yīng)峰面積。結(jié)果對(duì)乙酰氨基酚RSD為0.56%，咖啡因RSD為1.22%，表明該樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.1.7重復(fù)性取“2.1.3”項(xiàng)下供試品溶液，按照 “2.1.1”條件連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄兩組分相應(yīng)峰面積，得對(duì)乙酰氨基酚的RSD為0.3%，咖啡因?yàn)?.8%，表明兩組分的重復(fù)性良好。

2.1.8加樣回收率精密稱取對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品1 260.00 mg、咖啡因?qū)φ掌?5.04 mg置50 mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密稱取已知含量的供試品適量(約相當(dāng)于對(duì)乙酰氨基酚250 mg) 3份，分別置于20 mL容量瓶中，各加入上述對(duì)照品混合溶液8、10、12 mL，加入少量流動(dòng)相超聲溶解10 min，冷卻后定容。用濾紙過濾后，精密量取1 mL續(xù)濾液置20 mL容量瓶加流動(dòng)相稀釋至刻度，得加樣回收率溶液。按“2.1.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)行分析，計(jì)算含量，結(jié)果見表1。

表1　回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.2樣品測(cè)定取康恩貝公司生產(chǎn)的3批不同的氨咖黃敏膠囊內(nèi)容物按“2.1.3”項(xiàng)方法制成3份供試品溶液，注入高效液相色譜儀，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件對(duì)3個(gè)供試品進(jìn)行色譜分析，得到實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，計(jì)算得到3批樣品中2種成分的百分含量。同時(shí)，按照國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)對(duì)含量進(jìn)行測(cè)定，并與色譜法所得的結(jié)果進(jìn)行比較，見表2。兩種方法實(shí)驗(yàn)結(jié)果較為接近，相比較而言色譜法耗時(shí)少，操作簡(jiǎn)便。

表2　樣品含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

3討論

3.1波長(zhǎng)的選擇根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)資料[2-5]，選用常用的十八烷基鍵和硅膠色譜柱；另選定乙腈-三乙胺溶液(1 mL三乙胺加79 mL水，用磷酸調(diào)pH至3.1)(17∶83)為初始流動(dòng)相，對(duì)2種成分的對(duì)照品進(jìn)行溶解，然后用于紫外掃描。因每粒膠囊中含有對(duì)乙酰氨基酚250 mg、咖啡因15 mg，含量相差較大，為了避免在含量測(cè)定時(shí)對(duì)乙酰氨基酚濃度過高出現(xiàn)平峰或者咖啡因濃度過低不易出峰，選擇的波長(zhǎng)應(yīng)以Abs值咖啡因>對(duì)乙酰氨基酚為宜，且兩者的Abs差值盡量大。

取對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品、咖啡因?qū)φ掌?，用流?dòng)相制得含對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品8 μg/mL的溶液和含咖啡因?qū)φ掌?0 μg/mL的溶液。用 UV-2501PC紫外分光光度計(jì)在200~300 nm波長(zhǎng)處對(duì)兩種溶液進(jìn)行波長(zhǎng)掃描，見圖2。由圖2可見，在約200~230 nm波長(zhǎng)處，對(duì)乙酰氨基酚的Abs先于217.38處達(dá)到最小值，然后逐漸變大，且與咖啡因的Abs差值較大，故選擇217 nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。

3.2流動(dòng)相比例的調(diào)整選擇乙腈為A相、三乙胺溶液(三乙胺∶水為1∶79，溶液用磷酸調(diào)pH至3.1抽濾)為B相，通過工作站調(diào)整有機(jī)相與水相的比例并保持其他條件不變。結(jié)果顯示，不同流動(dòng)相比例下，各峰的分離度均>1.5，最終選定分離度>3且保留時(shí)間相對(duì)較短的流動(dòng)相比例，即A∶B為17∶83。

圖2　UV圖譜

3.3柱溫的選擇筆者分別對(duì)日常實(shí)驗(yàn)中最為常用的25、30、35 ℃進(jìn)行了試驗(yàn)，結(jié)果顯示，溫度對(duì)該樣品中所測(cè)2種成分含量沒有顯著影響，所以選擇藥品檢驗(yàn)中較為常用的柱溫(25 ℃)作為該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)柱溫。

3.4流速的選擇為了選定適宜的流速，分別選用常用流速0.5、1、1.5 mL/min進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果顯示，當(dāng)流速為1.5 mL/min時(shí)，各峰的理論板數(shù)明顯降低，該流速舍去不考慮。流速為0.5、1 mL/min時(shí)，各參數(shù)均符合要求，此次選擇較為常用的1.0 mL/min。

本法選定的色譜條件效率高，分離度好，柱效理想；樣品的前處理較國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)更簡(jiǎn)單、快速；實(shí)驗(yàn)結(jié)果與傳統(tǒng)方法所得實(shí)驗(yàn)結(jié)果相近。因此，采用HPLC法同時(shí)測(cè)定氨咖黃敏膠囊中的對(duì)乙酰氨基酚和咖啡因的含量是可行的，為該藥品標(biāo)準(zhǔn)的修訂提供了參考。

參考文獻(xiàn)：

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)[S].2002:263.

[2]孫超,崔瀟,成秉辰,等.HPLC法同時(shí)測(cè)定氨咖黃敏膠囊中三種成分[J].哈爾濱商業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2013,29(2):145-147,175.

[3]吳俊芳,張濤,李麗萍.高效液相色譜法測(cè)定氨咖黃敏膠囊的含量[J].中國(guó)藥業(yè),2011,20(4):33-34.

[4]張英芳,李明霞,韓春英.HPLC法同時(shí)測(cè)定氨咖黃敏膠囊中三組分的含量[J].齊魯藥事,2012,21(8):462-463.

[5]陳玉璞,張毅,董智攀.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定氨咖黃敏膠囊中對(duì)乙酰氨基酚和馬來酸氯苯那敏的含量[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2010,7(4):38-39.

作者單位：1.中國(guó)醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，沈陽(yáng) 110001；2.遼寧省建平縣醫(yī)院藥局，朝陽(yáng) 122400；3.遼寧省中藥研究所，沈陽(yáng) 110041