王　星，王　琳，張廷劍，孟繁浩*

HPLC法同時(shí)測(cè)定馬來(lái)酸依那普利與尼群地平的含量

王星a，王琳b，張廷劍b，孟繁浩b*

[摘要]目的建立以高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方尼群地平片中馬來(lái)酸依那普利與尼群地平含量的方法。方法色譜柱為Kromasil C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，甲醇-磷酸鹽緩沖液(0.01 mol/L磷酸二氫鉀溶液，用磷酸調(diào)pH值為3.0)(65∶35)為流動(dòng)相，流速0.8 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為215 nm，柱溫50 ℃，進(jìn)樣量為20 μL。結(jié)果馬來(lái)酸依那普利在10.16~193.04 mg/L濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(R2=0.999 7)，平均加樣回收率為100.28%；尼群地平在20.96~338.24 mg/L濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(R2=0.999 8)，平均加樣回收率為99.54%。結(jié)論該方法可用于同時(shí)測(cè)定復(fù)方尼群地平片中馬來(lái)酸依那普利、尼群地平的含量。

[關(guān)鍵詞]高效液相色譜法；復(fù)方尼群地平片；馬來(lái)酸依那普利；尼群地平；含量

[Abstract]ObjectiveTo establish an HPLC method for the content determination of enalapril maleate and nitrendipine in compound nitrendipine tablet.MethodsSamples were determined on a Kromasil C18column (4.6 mm×250 mm,5 μm),the mobile phase consisted of methanol-phosphate buffer (0.01 mol/L potassium dihydrogen phosphate solution adjusted with phosphoric acid to a pH of 3.0) (65∶35) with flow rate at 0.8 mL/min,the UV detection wavelength was 215 nm,column temperature was 50 ℃,and sample size was 20 μL.ResultsThe linear range of enalapril maleate was 10.16~193.04 mg/L (R2=0.999 7),the average recovery rate was 100.28%;the linear range of nitrendipine was 20.96~338.24 mg/L (R2=0.999 8),the average recovery rate was 99.54%.ConclusionThe method is accurate for the simultaneous determination of enalapril maleate and nitrendipine in the compound nitrendipine tablet.

收稿日期：2015-04-18

通信作者*

DOI:10.14053/j.cnki.ppcr.201512023

Content determination of enalapril maleate and nitrendipine by HPLCWANG Xinga,WANG Linb,ZHANG Ting-jianb,MENG Fan-haob*(a.Department of Central Laboratory,b.Department of Medicinal Chemistry,School of Pharmacy,China Medical University,Shenyang 110122,China)

Key words：HPLC;Compound nitrendipine tablets;Enalapril maleate;Nitrendipine;Content

0引言

復(fù)方尼群地平片為自制制劑，西班牙已于2002年批準(zhǔn)Grupo Vita公司的復(fù)方產(chǎn)品ENEAS (Enalapril maleate/nitrendipine)上市，用于對(duì)單獨(dú)用依那普利或尼群地平無(wú)應(yīng)答的原發(fā)性高血壓患者的治療，提高患者順應(yīng)性，降低不良反應(yīng)。國(guó)內(nèi)合用馬來(lái)酸依那普利和尼群地平的臨床報(bào)道也較多[1-4]。馬來(lái)酸依那普利(Enalapril maleate)對(duì)輕中度高血壓效果較好，對(duì)于高血壓患者具有良好的靶器官保護(hù)和心血管終點(diǎn)事件預(yù)防作用[5-7]。尼群地平(Nitrendipine)對(duì)心血管系統(tǒng)具有保護(hù)效應(yīng)，腦卒中發(fā)生率較對(duì)照組降低40%，同時(shí)，心血管事件、癌癥、出血等不良反應(yīng)沒(méi)有明顯增加[8]。中國(guó)藥典對(duì)處方中的單一成分制劑含量測(cè)定的方法均采用HPLC法[9]，國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)報(bào)道多為HPLC法測(cè)定單一成分制劑或與其他成分組成制劑的含量[10-16]。為提高其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，有效控制制劑質(zhì)量，本文采用HPLC法對(duì)復(fù)方尼群地平片中馬來(lái)酸依那普利和尼群地平進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果較為理想。

1儀器與試藥

1.1儀器Agilent 1200系列高效液相色譜儀(美國(guó)安捷倫科技有限公司)，Kromasil C18色譜柱(北京迪馬科技公司)，CP214電子分析天平[奧豪斯國(guó)際貿(mào)易(上海)有限公司]，pH計(jì)(FE20K，梅特勒-托利多儀器有限公司)。

1.2試藥復(fù)方尼群地平片(批號(hào)：131001、131002、131003；規(guī)格：30 mg)，自制。馬來(lái)酸依那普利對(duì)照品(批號(hào)：100705-201301)，尼群地平對(duì)照品(批號(hào)：100585-201301)，均為中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。甲醇(色譜純)、磷酸(分析純)、磷酸二氫鉀(分析純)，均由山東禹王實(shí)業(yè)總公司化工廠提供。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱：Kromasil C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動(dòng)相：甲醇-磷酸鹽緩沖液(0.01 mol/L磷酸二氫鉀溶液，用磷酸調(diào)pH值為3.0)(65∶35)，檢測(cè)波長(zhǎng)：215 nm，流速：0.8 mL/min，柱溫：50 ℃，進(jìn)樣量：20 μL。理論板數(shù)按尼群地平峰計(jì)算不低于3 000。

2.2溶液的制備

2.2.1對(duì)照品溶液的制備避光操作。分別精密稱取馬來(lái)酸依那普利、尼群地平對(duì)照品適量，加甲醇溶解并稀釋至刻度，再精密量取適量加流動(dòng)相定量制成每1 mL中約含0.2 mg馬來(lái)酸依那普利和0.1 mg尼群地平。

2.2.2供試品溶液的制備避光操作。取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量(約相當(dāng)于馬來(lái)酸依那普利100 mg，尼群地平50 mg)置50 mL量瓶中，加甲醇超聲使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液1 mL，加流動(dòng)相溶解稀釋至10 mL，搖勻，作為供試品溶液。

2.2.3陰性對(duì)照溶液的制備按處方比例及制備工藝稱取除主藥以外的所有輔料，按供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.3專屬性試驗(yàn)精密移取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液各20 μL，分別測(cè)定，結(jié)果陰性對(duì)照溶液在主成分峰處未見干擾。對(duì)照品、樣品和陰性對(duì)照色譜圖見圖1。

2.4線性關(guān)系考察分別精密稱取馬來(lái)酸依那普利對(duì)照品與尼群地平對(duì)照品適量，加甲醇溶解并稀釋至不同刻度，得峰面積(Y)與濃度(C)的回歸方程：馬來(lái)酸依那普利Y=25.673 C+120.75 (R2=0.999 7)、尼群地平Y(jié)=53.114 C+176.35 (R2=0.999 8)。線性回歸方程表明，馬來(lái)酸依那普利在20.16~383.04 mg/L濃度范圍內(nèi)、尼群地平在12.44~236.36 mg/L濃度范圍內(nèi)，進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5精密度試驗(yàn)取馬來(lái)酸依那普利與尼群地平對(duì)照溶液，按上述色譜條件，以20 μL進(jìn)樣，記錄峰面積，連續(xù)進(jìn)樣5次，結(jié)果表明，馬來(lái)酸依那普利的RSD為1.33%，尼群地平的RSD為1.00% (n=5)。

2.6重復(fù)性試驗(yàn)取樣品(批號(hào)：131001)，制備6份供試品溶液，按上述色譜條件，以20 μL進(jìn)樣，記錄峰面積，每個(gè)樣品進(jìn)樣2次，結(jié)果表明，馬來(lái)酸依那普利的RSD為1.15%，尼群地平的RSD為1.19% (n=6)。

圖1　HPLC圖譜

2.尼群地平

2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)取供試品溶液，按上述色譜條件，以20 μL進(jìn)樣，記錄峰面積，每隔1 h進(jìn)樣1次，結(jié)果表明，供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定(馬來(lái)酸依那普利的RSD為0.50%，尼群地平的RSD為0.52%)。

2.8加樣回收率試驗(yàn)按處方比例稱取輔料數(shù)份，分別加入處方量80%、100%、120%的馬來(lái)酸依那普利與尼群地平各3份，按上述供試品溶液制備方法制備并測(cè)定，結(jié)果見表1。

2.9樣品測(cè)定分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液，按上述色譜條件，分別以20 μL進(jìn)樣，記錄峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算供試品中馬來(lái)酸依那普利和尼群地平的含量。結(jié)果見表2。

3討論

3.1本文首次采用同一液相條件同時(shí)測(cè)定馬來(lái)酸依那普利和尼群地平的含量，為體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)研究提供依據(jù)。

3.2在200~400 nm處用UV-2100紫外分光光度計(jì)掃描，馬來(lái)酸依那普利和尼群地平在215 nm處有共同吸收峰，因此選擇此波長(zhǎng)作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

表1　加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

表2　樣品含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

3.3馬來(lái)酸依那普利顯酸性，用弱酸性流動(dòng)相可抑制其電離，使峰型穩(wěn)定，分離度好。本文對(duì)多組流動(dòng)相系統(tǒng)進(jìn)行了試驗(yàn)比較，最后選用甲醇-磷酸鹽緩沖液(65∶35)為流動(dòng)相；對(duì)多個(gè)pH值進(jìn)行了試驗(yàn)比較，發(fā)現(xiàn)pH值為3.0時(shí)峰型較好且分離度良好。

參考文獻(xiàn)：

[1]張正輝.尼群地平單用與聯(lián)合依那普利對(duì)原發(fā)性高血壓治療作用比較[J].中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用,2009,3(1):7-8.

[2]李勤.尼群地平聯(lián)合依那普利治療單純收縮期高血壓臨床觀察[J].寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2010,32(2):294-295.

[3]Bryl W,Cymerys M,Kujawska-Luczak M,et al.Hypotensive effectiveness of therapy combined enalapril and nitrendipine and influence on the quality of life [J].Pol Merkur Lekarski,2005,18(105):287-290.

[4]倪前高.馬來(lái)酸依那普利聯(lián)合尼群地平治療原發(fā)性高血壓的臨床分析[J].心理醫(yī)生雜志,2012,(5):317.

[5]Fox KM.European trial on reduction of cardiac events with Perindipril in stable coronary Artery disease Investigators.Efficacy of perindopril in reduction of cardiovascular events among patients with stable coronary artery disease:randomised,double-blind,placebo-controlled,multicentre trial (the EUROPA study)[J].Lancet,2003,362:782-788.

[6]《血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑在腎臟病中正確應(yīng)用》專家協(xié)會(huì)組.血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑在腎臟病中正確應(yīng)用的專家共識(shí)[J].中華腎臟病雜志,2006,22:57-58.

[7]中華醫(yī)學(xué)會(huì)糖尿病學(xué)分會(huì).中國(guó)2型糖尿病防治指南(2007年版)[J].中華醫(yī)學(xué)雜志,2008,88:1227-1245.

[8]肖永海.高血壓病現(xiàn)代治療的觀察[J].醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)資訊,2005,9:46-48.

[9]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(二部)[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2010,46:232.

[10]藍(lán)玉燕,游凱.HPLC法測(cè)定馬來(lái)酸依那普利的含量[J].醫(yī)學(xué)信息,2014,27(17):111-112.

[11]孫瑤.馬來(lái)酸依那普利片有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定及其穩(wěn)定性的研究[J].科技資訊,2010,(2):125.

[12]馬玉榮,孫婷,郭盈杉.HPLC法測(cè)定尼群地平的含量[J].藥物分析雜志,2011,31(3):574-575.

[13]高佳麗,王毅,張曉東,等.HPLC法測(cè)定尼群地平片的含量[J].內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2014,36(2):97-100.

[14]聶世英.測(cè)定尼群地平片含量HPLC法的改進(jìn)[J].中國(guó)民族民間醫(yī)藥,2014,(6):18-20.

[15]吳瑞艷.尼群地平軟膠囊含量測(cè)定[J].科技創(chuàng)新與應(yīng)用,2011,(21):9.

[16]郭潤(rùn)勤,趙建穎,楊金燕,等.梯度洗脫法同時(shí)測(cè)定復(fù)方卡托普利尼群地平膠囊(Ⅱ)中3種成分的含量[J].中國(guó)醫(yī)藥科學(xué),2013,3(11):99-101.

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作者單位：荊州市第一人民醫(yī)院a.藥學(xué)部，b.神經(jīng)外科，湖北 荊州434000