夏愛華，鄒　琳，蘭建云△

(南通大學(xué)第四附屬醫(yī)院/鹽城市第一人民醫(yī)院：1.檢驗(yàn)科；2.病理科，江蘇鹽城 224001)

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鹽城地區(qū)109例肺腺癌患者EGFR基因19、21號(hào)外顯子突變研究

夏愛華1，鄒琳2，蘭建云2△

(南通大學(xué)第四附屬醫(yī)院/鹽城市第一人民醫(yī)院：1.檢驗(yàn)科；2.病理科，江蘇鹽城 224001)

摘要:目的探討該地區(qū)肺腺癌患者表皮生長因子受體(EGFR)基因19、21號(hào)外顯子突變情況及其在不同人群中的分布差異。方法收集該院2013年4月至2014年9月109例肺腺癌患者相關(guān)標(biāo)本，應(yīng)用突變特異性擴(kuò)增系統(tǒng)-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(ARMS-PCR)對(duì)標(biāo)本EGFR基因外顯子19、21號(hào)進(jìn)行檢測。結(jié)果109例患者中，19、21號(hào)外顯子突變56例(51.38%)，其中19號(hào)外顯子突變24例(22.02%)，21號(hào)外顯子突變33例(30.28%)；男性共59例，突變型19例(32.20%)，女性50例，突變型37例(74.00%)；大于或等于60歲患者64例，突變型34例(53.13%),小于60歲患者45例，突變型22例(48.89%)；男性吸煙者33例，突變型7例(21.21%)，非吸煙者25例，突變型12例(48.00%)。結(jié)論該地區(qū)肺腺癌患者EGFR基因19、21號(hào)外顯子總突變率較高，21號(hào)外顯子突變率稍高于19號(hào)外顯子，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；突變類型及突變率與性別、吸煙史相關(guān)，與年齡不相關(guān)。

關(guān)鍵詞:表皮生長因子受體基因；肺腺癌；突變

肺癌是全球發(fā)病率最高的惡性腫瘤之一，中國肺癌的發(fā)病率逐年上升。非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)占80%~85%，主要是腺癌或鱗癌。該病起病隱匿、轉(zhuǎn)移早、擴(kuò)散快。大部分患者發(fā)現(xiàn)時(shí)即已失去手術(shù)機(jī)會(huì)，故化療已成為肺癌的主要治療手段。但傳統(tǒng)的化療對(duì)大多數(shù)患者的預(yù)后沒有明顯的改善，其緩解率為15%~21%，中位生存期為7.4~8.2月，一年生存率為31%~36%,5年生存率僅為10%~15%[1-2]。靶向藥物酪氨酸激酶抑制劑(TKI)的問世，為晚期肺癌患者的治療開辟了新的路徑，并取得了很好的療效。NSCLC人群中表皮生長因子受體(EGFR)基因突變狀態(tài)是決定EGFR-TKI療效的重要預(yù)測因子。不同位點(diǎn)突變的生物學(xué)功能不同，18、19、21外顯子突變型患者對(duì)EGFR-TKI有明顯的療效，而20號(hào)外顯子突變型患者形成對(duì)EGFR-TKI繼發(fā)性耐藥。因此，美國國立綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)(NCCN)指南中明確規(guī)定在接受EGFR-TKI治療前需檢測EGFR基因狀態(tài)。進(jìn)一步研究顯示，EGFR基因突變頻率、類型存在明顯的地域、人種、性別等差異[3]，因此本研究對(duì)鹽城地區(qū)109例肺腺癌患者EGFR基因突變檢測結(jié)果進(jìn)行回顧，分析該地區(qū)肺腺癌患者EGFR基因突變狀況。

1資料與方法

1.1一般資料收集2013年4月至2014年9月本院確診的肺腺癌患者109例，均來自鹽城市及市轄各區(qū)縣(市)。其中男59例，女50例；男性中包括吸煙者33例，未吸煙者25 例(有1例吸煙史不詳)；大于或等于60歲64例，小于60歲45 例。

1.2方法

1.2.1DNA提取檢測標(biāo)本包括組織標(biāo)本、穿刺細(xì)胞、淋巴結(jié)活檢、胸腔積液標(biāo)本等，每份標(biāo)本經(jīng)病理科確認(rèn)保證足夠數(shù)量的癌細(xì)胞，所有標(biāo)本按標(biāo)本類型用相應(yīng)的QIAGEN試劑盒進(jìn)行DNA提取，所提DNA用UNIC 2802型紫外可見分光光度計(jì)進(jìn)行濃度檢測和質(zhì)量評(píng)估，260與280 nm處的吸光度比值(A260/A280)在1.8~2.0，保證DNA的質(zhì)量和濃度達(dá)到檢測試劑盒所規(guī)定的要求。

1.2.2EGFR基因突變檢測采用廈門艾德生物技術(shù)有限公司提供的突變特異性擴(kuò)增系統(tǒng)(ARMS)熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)試劑進(jìn)行EGFR基因突變的檢測，檢測嚴(yán)格按試劑盒規(guī)定的程序在ABI公司StepOne Plus PCR擴(kuò)增儀進(jìn)行，每批次加陰陽性質(zhì)控，保證檢測質(zhì)量。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)及百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1109例肺腺癌患者總突變情況109例患者中，共檢出56例存在19、21外顯子的突變(有1例19、21外顯子同時(shí)突變)，突變率51.38%，其中19號(hào)外顯子24例(22.02%)，21號(hào)外顯子33例(30.28%)。

2.219、21號(hào)外顯子突變率比較21號(hào)外顯子突變率稍高于19號(hào)外顯子，但其差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1　　19、21號(hào)外顯子突變率比較(n)

2.319、21號(hào)外顯子突變率的性別差異女性患者EGFR基因19、21號(hào)外顯子突變率明顯高于男性患者(χ2=18.926，P<0.05)。男性不吸煙患者EGFR基因19、21號(hào)外顯子突變率高于男性吸煙患者,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.634，P<0.05)。女性患者EGFR基因19、21外顯子突變率高于男性不吸煙患者,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.974，P<0.05)。見表2。

表2　　19、21號(hào)外顯子突變率的性別差異

2.419、21號(hào)外顯子突變率年齡差異高齡患者(≥60歲)、低齡患者(<60歲)EGFR基因19、21號(hào)外顯子突變率分別為53.13%(34/64)，47.89%(22/45)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.190，P>0.05)。

3討論

隨著吉非替尼、厄羅替尼等TKI類靶向藥物越來越廣泛地用于NSCLC的治療，EGFR基因突變相關(guān)的研究受到了臨床的普遍關(guān)注和重視。EGFR是酪氨酸激酶Ⅰ型受體家族成員，是一種跨膜糖蛋白，廣泛分布于各種上皮細(xì)胞的細(xì)胞膜，分為胞外區(qū)、跨膜區(qū)和胞內(nèi)區(qū)。EGFR基因突變主要發(fā)生于胞內(nèi)酪氨酸激酶區(qū)域18、19、20、21號(hào)4個(gè)外顯子，其中19、21號(hào)外顯子的突變約覆蓋整個(gè)突變的90%，本研究對(duì)鹽城地區(qū)肺腺癌患者EGFR基因19、21號(hào)外顯子的突變情況進(jìn)行了分析。

本研究顯示EGFR突變率與突變類型存在人種和區(qū)域差異：EGFR基因突變在亞洲肺腺癌人群為25%~50%，明顯高于白種人[4-6]；國內(nèi)相關(guān)報(bào)道也不盡相同，如四川地區(qū)肺腺癌突變率為53.85%，21號(hào)外顯子的突變明顯高于19號(hào)外顯子[7]；臺(tái)灣地區(qū)以21號(hào)外顯子突變?yōu)橹?云南地區(qū)以19號(hào)外顯子突變?yōu)橹?，上海地區(qū)19、21號(hào)外顯子突變率基本相同[8-10]；另有文獻(xiàn)報(bào)道，肺腺癌EGFR基因突變率高達(dá)60.3%[11]。鹽城地區(qū)肺腺癌EGFR19、21號(hào)外顯子突變率為51.38%，與相關(guān)報(bào)道基本相符；21號(hào)外顯子突變稍高于19號(hào)外顯子，但其差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

本研究還對(duì)EGFR基因突變與一些臨床因素的相關(guān)性進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)本地區(qū)女性患者突變率明顯高于男性患者；吸煙患者突變率低于非吸煙患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；由于女性吸煙者較少，將男性非吸煙患者與女性患者進(jìn)行了比較，結(jié)果女性患者突變率仍高于男性非吸煙患者，提示在排除吸煙因素影響的情況下，EGFR基因突變?nèi)源嬖谛詣e差異；以60歲為界，筆者將患者分為高齡和低齡患者，比較后認(rèn)為EGFR基因的突變與年齡無明顯相關(guān)性；上述結(jié)論與國內(nèi)外相關(guān)報(bào)道較為一致[7,10,12]。

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·論著·

Research of exons 19 and 21 mutations of epidermal growth factor receptor gene

in 109 cases of lung adenocarcinoma in Yancheng area

XiaAihua1,ZouLin2,LanJianyun2

(1.DepartmentofClinicalLaboratory;2.DepartmentofPathology,FourthAffiliatedHospitalofNantong

University/YanchengMunicipalFirstPeople′sHospital,Yancheng,Jiangsu224001,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the 19 and 21 exon mutation status of the epidermal growth factor receptor(EGFR) gene in the patients with lung adenocarcinoma and its distribution differences among different groups.MethodsThe related samples in 109 cases of lung adenocarcinoma were collected in our hospital during 2013-2014.The 19 and 21 exons of EGFR gene were detected by adopting the ARMS-PCR method.ResultsAmong 119 cases,19 and 21 exons mutations were found in 56 cases(51.38%),in which 24 cases (22.02%) were in exon 19 and 33 cases (30.28%) were in exon 21.59 cases were male with 19 cases(32.20%) of mutant type and 50 cases were female with 37 cases (74.00%) of mutant type;64 cases were ≥60 years old with 34 cases(53.13%) of mutant type,45 cases were <60 years old with 22 cases(48.89%) of mutant type;33 male cases were smoking with 7 cases(21.21%) of mutant type and 25 male cases were non-smoking with 12 cases (48.00%) of mutant type.ConclusionThe 19 and 21 exon mutation rate of EGFR gene in the patients with lung adenocarcinoma is higher in this area,the 21 exon mutation rate is slightly higher than that of 19 exon;the mutation type and mutation rate are correlated with sex and smoking history,but have no correlation with age.

Key words:epidermal growth factor receptor gene;lung adenocarcinoma;mutation

作者簡介：侯海燕，女，主管檢驗(yàn)師，主要從事病原微生物檢驗(yàn)工作。

收稿日期：(2015-08-05)

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2015.24.025A

文章編號(hào)：1673-4130(2015)24-3568-02