王 倩

（遼寧省沈陽市渾南區(qū)疾病預(yù)防控制中心，遼寧 沈陽 110015）

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熒光PCR法與細(xì)菌培養(yǎng)法在鼠傷寒沙門菌食物中毒檢測中的應(yīng)用比較

王 倩

（遼寧省沈陽市渾南區(qū)疾病預(yù)防控制中心，遼寧 沈陽 110015）

【摘要】目的 把熒光PCR法與細(xì)菌培養(yǎng)法在鼠傷寒沙門菌食物中毒檢測中的應(yīng)用進(jìn)行比較。方法 使用以往的細(xì)菌培養(yǎng)方式和熒光PCR方式對10份樣本實(shí)施檢驗(yàn)。結(jié)果 這10份樣本經(jīng)過檢驗(yàn)之后，PVR檢驗(yàn)出沙門菌5株，陽性概率相對較高為50%，以往的方式檢驗(yàn)出3株沙門菌，陽性概率為30%相對較低。結(jié)論 與以往的培養(yǎng)方式進(jìn)行對比，使用PCR方式能夠增強(qiáng)檢驗(yàn)出鼠傷寒沙門菌的概率，節(jié)約檢驗(yàn)時長，合適用在食物中毒這一方面的檢驗(yàn)。

【關(guān)鍵詞】熒光PCR法；細(xì)菌培養(yǎng)法；鼠傷寒沙門菌；食物中毒；檢測；應(yīng)用

對于沙門菌的檢驗(yàn)，在現(xiàn)階段都是依據(jù)以往的細(xì)菌培養(yǎng)方式實(shí)施分離鑒別，為食物中毒提供重要的理論依據(jù)，可是這種方式具有一定的限制性，例如，檢驗(yàn)時間過長，程序復(fù)雜與過多的干擾因子等[1-3]。在生物技術(shù)不斷發(fā)展的今天，研制出一種檢驗(yàn)細(xì)菌新技術(shù)，PCR檢驗(yàn)方式有著較強(qiáng)的靈敏性，以及比較高的特殊性，使用方式方便簡單和速度較快等優(yōu)勢，被寬泛使用。在這次的食物中毒事件中使用這兩種方式進(jìn)行對比，只是希望能夠加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)速度，可以快速的掌控疫情變化。

1 回顧分析

在2012年3月28日上午10點(diǎn)整，疾病防御中心接到疾控報(bào)告：某村村民出現(xiàn)食物中毒事件，依據(jù)資料表明，某鄉(xiāng)5戶共40例，在飯后有31例接連產(chǎn)生惡心，嘔吐與發(fā)熱等現(xiàn)象，此中有4例進(jìn)入醫(yī)院進(jìn)行診治，潛藏時間較短的為7 h，最久的是15 h。通過檢查就餐食品有飯、豬肉與青菜以及鵪鶉蛋等，有31例都食用過鵪鶉蛋，而其他9例沒有食用該食品所以為出現(xiàn)病情癥狀。通過檢查病情癥狀之后最初的判斷為有細(xì)菌導(dǎo)致的食物中毒。

2 檢驗(yàn)

2.1 儀器：熒光PCR儀器，與自動化的微生物鑒別體系，均來自美國。2.2 試劑：不同的增菌培養(yǎng)基于分離培養(yǎng)基、革蘭陰性菌鑒別卡、基因提取液以及熒光檢驗(yàn)試劑。

2.3 樣本與類別：收集有懷疑的樣本10份，包含患者肛拭子3份，糞便樣本3份，餐后鵪鶉蛋3份，工商局送檢鵪鶉蛋1份。

2.4 熒光PCR檢驗(yàn)：依據(jù)多種細(xì)菌實(shí)施檢驗(yàn)，例如，沙門菌與金黃色葡萄球菌等，進(jìn)行一系列標(biāo)準(zhǔn)的檢驗(yàn)，查看最后的反應(yīng)體例是多少。2.5 細(xì)菌傳統(tǒng)分離：依據(jù)國家的相關(guān)規(guī)定實(shí)施檢驗(yàn)。把以上收集的樣本接種培養(yǎng)基，此中，糞便與肛拭子樣本先進(jìn)行增菌，接著選取培養(yǎng)基，把收集的樣本按照或許導(dǎo)致食源性疾病實(shí)施檢驗(yàn)，去除金黃色葡萄球菌與變形桿菌等造成的中毒。然后使用試劑對菌株進(jìn)行鑒別，得出結(jié)論通過血清學(xué)分離鑒別[4-5]。

3 檢測結(jié)果

3.1 PCR檢驗(yàn)數(shù)據(jù)：此次中毒的10份樣本之中，就是以上所給糞便等的樣本，經(jīng)過PVR檢驗(yàn)出沙門菌5株，陽性概率相對較高為50%。

3.2 細(xì)菌培養(yǎng)數(shù)據(jù)：此次中毒的10份樣本之中，就是以上所給糞便等的樣本，以往的方式檢驗(yàn)出3株鼠傷寒沙門菌，陽性概率為30%相對較低。檢驗(yàn)得出的該細(xì)菌通過自動化的鑒別之后明確為沙門菌。

4 討 論

在此次使用者兩種技術(shù)對于該細(xì)菌中毒事件進(jìn)行檢驗(yàn)剖析，由于此次檢驗(yàn)中采集的樣本較多，份數(shù)也比較多，檢驗(yàn)內(nèi)容也是比較多，使用以往的方式，程序比較復(fù)雜，例如，樣本的增菌以及分離等步驟，很消耗時間，檢驗(yàn)陰性的時間也是相對較久，通常需要1周左右，所以，使用以往的鑒別方式在一定程度上檢驗(yàn)的效率較低，無法快速的給出此次中毒的病因。而使用新型的方式，包含有增菌過程一起，全部的檢驗(yàn)時長只需要大約7 h，有著比較高正確性，顯著的加強(qiáng)檢驗(yàn)速度，提供最初的數(shù)據(jù)進(jìn)行分離培養(yǎng)，提醒在實(shí)驗(yàn)過程中要對分離進(jìn)行觀察與思考，減少復(fù)雜的實(shí)驗(yàn)程序[6]。尤其是功效效率較高，便于實(shí)施對病原體的的快速檢驗(yàn)。但是該技術(shù)也缺陷，PCR主要檢驗(yàn)的對象是核酸，但是不論樣本中因子的死活，都可以加大核酸的變化，進(jìn)而導(dǎo)致假陽性增多的現(xiàn)象[7-8]。

根據(jù)以上的檢驗(yàn)數(shù)據(jù)，PVR檢驗(yàn)出沙門菌5株，陽性概率相對較高為50%，以往的方式檢驗(yàn)出3株沙門菌，陽性概率為30%相對較低。使用PCR方式能夠有效的加強(qiáng)該病菌的檢驗(yàn)概率，節(jié)約檢驗(yàn)時長，比起以往的檢驗(yàn)方式，該技術(shù)相對來說比較合適用對中毒進(jìn)行判斷。

參考文獻(xiàn)

[1] 王蔣麗，李彩云，曾強(qiáng)，等.熒光PCR法與細(xì)菌培養(yǎng)法在鼠傷寒沙門菌食物中毒檢測中的應(yīng)用比較[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2010，20 （12）：3304-3305.

[2] 高杰，王輝，李潔，等.熒光PCR法與細(xì)菌培養(yǎng)法在食源性致病檢測中的應(yīng)用[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2011，21（10）：2498-2499.

[3] 郭敏，郎中凱，向曉霞.實(shí)時熒光PCR在一起沙門菌食物中毒檢測中的應(yīng)用[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2013，23（2）：372-374.

[3] 黃薇，趙翔，唐曉旻，等.核酸檢測技術(shù)在細(xì)菌性食源疾病檢測中的應(yīng)用探討[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2011，38（2）：344-347.

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[7] 宋士利，檀薇，張麗.Real-Time PCR探針法檢測食物中毒中沙門菌方法建立及應(yīng)用[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2012，22（1）：16-18.

[8] 袁慕云，許龍巖，曹際娟，等.基于TaqMan探針雙重?zé)晒釶CR檢測食品中鼠傷寒沙門菌和腸炎沙門菌[J].衛(wèi)生研究，2013，42（3）：491-497.

中圖分類號：R155.3

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B

文章編號：1671-8194（2016）07-0292-01