■李 敏 崔亞利陳寶江胡 滿(mǎn)

（1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，河北保定 071000；2.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，河北保定 071000）

肌醇（環(huán)己醇）廣泛分布于各種天然動(dòng)植物及微生物的組織中[1]，主要在動(dòng)物的肝臟、腎臟、大腦和睪丸[2-3]等部位合成，是生物生長(zhǎng)所必需的物質(zhì)。肌醇最早是在肌肉組織中被提取出來(lái)的，故命名為肌醇[4]，它屬于維生素B族物質(zhì)，具有生物素與維生素B的類(lèi)似作用。肌醇作為生物營(yíng)養(yǎng)促生長(zhǎng)劑在飼料工業(yè)中得到廣泛地應(yīng)用，尤其是在水產(chǎn)飼料中[1]。在食品工業(yè)中肌醇常作為營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑被推廣使用，但是肌醇在毛用動(dòng)物飼料中的應(yīng)用研究很少。獺兔，是一種典型的皮毛用兔，獺兔的皮張是很好的工業(yè)皮料，如何提高獺兔的皮毛質(zhì)量一直是人們所關(guān)注的熱點(diǎn)。肌醇作為維生素類(lèi)物質(zhì)，與大多數(shù)水溶性維生素不同，在體內(nèi)不是以輔酶的形式參與代謝，而是作為體內(nèi)活性組織的組成部分發(fā)揮多種生理功能[5]。如促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)，參與蛋白質(zhì)的生物合成；促進(jìn)肝臟脂肪代謝，降低血液中膽固醇含量；作為細(xì)胞膜的組成成分之一，在膜磷脂平衡中扮演著重要的角色[4]；促進(jìn)健康毛發(fā)的生長(zhǎng)，防止脫發(fā)。但是肌醇對(duì)毛用動(dòng)物皮毛生長(zhǎng)及毛囊發(fā)育影響的研究很少。本試驗(yàn)通過(guò)在飼料中添加肌醇，研究肌醇對(duì)生長(zhǎng)獺兔毛囊發(fā)育的影響，為以后肌醇在獺兔養(yǎng)殖中的應(yīng)用提供試驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物選擇和分組

選取同期斷奶40日齡小兔120只，公母各半，隨機(jī)分為4組，每組30只，每籠3只，常規(guī)飼養(yǎng)，預(yù)試期7 d，試驗(yàn)時(shí)間為3個(gè)月。試驗(yàn)期對(duì)照組和試驗(yàn)1組、試驗(yàn)2組、試驗(yàn)3組飼糧中分別添加肌醇量為0、25、50、75 mg/kg。

1.2 樣品的采集

分別在試驗(yàn)開(kāi)始后的第30、60、90 d，每組隨機(jī)各選取6只健康獺兔，頸靜脈放血處死，去除預(yù)定部位的被毛后，分別取肩部、腹部、背中部和臀部皮膚（約1 cm2）展平并固定在吸水紙（防止皮樣卷曲）上，固定于多聚甲醛中。

1.3 石蠟切片的制作與觀(guān)察

常規(guī)制作厚為7 μm的石蠟切片，H-E染色，測(cè)定單位體表面積（mm2）初級(jí)毛囊以及次級(jí)毛囊的數(shù)量。每組兔子每個(gè)部位分別選取4張切片，每張皮膚切片隨機(jī)連續(xù)選取3個(gè)視野拍照，用ImageJ軟件對(duì)每個(gè)視野內(nèi)的初級(jí)毛囊和次級(jí)毛囊進(jìn)行計(jì)數(shù)，計(jì)算初級(jí)毛囊密度和次級(jí)毛囊密度(個(gè)/mm2)以及次級(jí)毛囊和初級(jí)毛囊的比值（S/P值）。

1.4 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”來(lái)表示，試驗(yàn)結(jié)果用SPSS 16.0進(jìn)行描述性統(tǒng)計(jì)與方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同月齡獺兔毛囊密度變化

表1 獺兔不同月齡毛囊密度（個(gè)/mm2）

從表1中可以看出，腹部和臀部皮膚的初級(jí)毛囊密度隨著月齡的增加極顯著減?。≒＜0.01），背中部皮膚4月齡初級(jí)毛囊密度與2、3月齡比較極顯著降低（P＜0.01），肩部皮膚3月齡與4月齡的初級(jí)毛囊密與2月齡比較極顯著降低（P＜0.01）。

從2月齡到3月齡時(shí)，腹部次級(jí)毛囊密度極顯著降低（P＜0.01），臀部次級(jí)毛囊顯著降低（P＜0.05）；肩部次級(jí)毛囊密度極顯著增加（P＜0.01），背中部次級(jí)毛囊密度顯著增加（P＜0.05）。從3月齡到4月齡，除腹部次級(jí)毛囊密度極顯著增加外（P＜0.01），肩部、背中部和臀部皮膚次級(jí)毛囊密度沒(méi)有顯著變化（P＞0.05）。

皮膚各個(gè)部位的次級(jí)毛囊與初級(jí)毛囊的比值隨著月齡的增加而不斷增大。腹部、臀部和背中部皮膚的S/P值，從2月齡到3月齡差異不顯著（P＞0.05），從3月齡到4月齡S/P值極顯著增加（P＜0.01）；而肩部皮膚的S/P值3月齡與2月齡的差異極顯著（P＜0.01），與4月齡的差異不顯著（P＞0.05）。

2.2 飼糧中肌醇水平對(duì)初級(jí)毛囊密度的影響

兔皮膚橫切，顯微鏡觀(guān)察并計(jì)數(shù)，不同月齡獺兔4個(gè)部位的皮膚初級(jí)毛囊密度的變化情況見(jiàn)表2。獺兔2月齡時(shí)，各試驗(yàn)組背中部、臀部皮膚的初級(jí)毛囊數(shù)與對(duì)照組比較極顯著降低（P＜0.01）。試驗(yàn)3組背中部皮膚的初級(jí)毛囊密度顯著低于試驗(yàn)1組和試驗(yàn)2組（P＜0.05）；試驗(yàn)2組臀部皮膚的初級(jí)毛囊密度極顯著低于試驗(yàn)1組和試驗(yàn)3組（P＜0.01）。腹部皮膚的初級(jí)毛囊，試驗(yàn)1組與對(duì)照組相比顯著降低（P＜0.05），肩部皮膚的初級(jí)毛囊，試驗(yàn)1組和試驗(yàn)2組與對(duì)照組比較極顯著降低（P＜0.01）。

表2 飼糧中肌醇水平對(duì)初級(jí)毛囊密度的影響（個(gè)/mm2）

3月齡獺兔，各試驗(yàn)組背中部和臀部皮膚初級(jí)毛囊密度與對(duì)照組比較極顯著降低（P＜0.01)。腹部皮膚初級(jí)毛囊密度，試驗(yàn)3組與對(duì)照組比較極顯著增加（P＜0.01)。肩部皮膚初級(jí)毛囊密度，試驗(yàn)1組與對(duì)照組比較，極顯著降低（P＜0.01)。

4月齡獺兔(見(jiàn)圖1)，背中部皮膚初級(jí)毛囊密度，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)2組初級(jí)毛囊密顯著增加（P＜0.05）。臀部皮膚初級(jí)毛囊密度各組之間差異不顯著（P＞0.05）。肩部皮膚初級(jí)毛囊密度，試驗(yàn)1組與對(duì)照組比較差異不顯著（P＞0.05），試驗(yàn)2組和試驗(yàn)3組與對(duì)照組比較極顯著降低（P＜0.01)。腹部皮膚初級(jí)毛囊密度，試驗(yàn)3組初與對(duì)照組比較極顯著增加（P＜0.01)，試驗(yàn)1組與對(duì)照組比較顯著增加（P＜0.05）。

圖1 獺兔4月齡皮膚橫切面

2.3 飼糧中肌醇水平對(duì)次級(jí)毛囊密度的影響

由表3可見(jiàn)，2月齡獺兔背中部次級(jí)毛囊密度，試驗(yàn)1組、試驗(yàn)2組與對(duì)照組比較極顯著增加（P＜0.01），試驗(yàn)3組次級(jí)毛囊密度極顯著低于對(duì)照組（P＜0.01）。臀部皮膚次級(jí)毛囊密度，試驗(yàn)1組和試驗(yàn)3組與對(duì)照組比較極顯著降低（P＜0.01）。肩部皮膚次級(jí)毛囊密度，試驗(yàn)1組與對(duì)照組比較顯著降低（P＜0.05）。腹部皮膚次級(jí)毛囊密度，試驗(yàn)2組與對(duì)照組比較極顯著降低（P＜0.01）。

表3 飼糧中肌醇水平對(duì)次級(jí)毛囊密度的影響（個(gè)/mm2）

3月齡獺兔，肩部和臀部皮膚次級(jí)毛囊密度，試驗(yàn)1組與對(duì)照組比較極顯著減?。≒＜0.01），試驗(yàn)3組毛囊密度與對(duì)照組比較顯著降低（P＜0.05）。腹部皮膚次級(jí)毛囊密度，試驗(yàn)3組與對(duì)照組比較極顯著增加（P＜0.01），試驗(yàn)1組毛囊密度與對(duì)照組比較顯著增加（P＜0.05）。背中部皮膚次級(jí)毛囊密度，試驗(yàn)2組與對(duì)照組比較極顯著增加（P＜0.01），試驗(yàn)3組與對(duì)照組比較顯著增加（P＜0.05）。

4月齡獺兔(見(jiàn)圖1)，肩部皮膚次級(jí)毛囊密度，3個(gè)試驗(yàn)組與對(duì)照組比較均極顯著降低（P＜0.01）。腹部皮膚，試驗(yàn)2組和試驗(yàn)3組與對(duì)照組相比有所增加，但是不顯著（P＞0.05），試驗(yàn)1組與對(duì)照組比較顯著降低（P＜0.05）。背中部皮膚次，試驗(yàn)2組和試驗(yàn)3組與對(duì)照組比較極顯著增加（P＜0.01），試驗(yàn)1組與對(duì)照組比較顯著增加（P＜0.05）。臀部皮膚，試驗(yàn)2組和3組與對(duì)照組比較極顯著增加（P＜0.01）。

2.4 飼糧中肌醇水平對(duì)S/P值的影響

從表4可見(jiàn)，2月齡獺兔肩部和臀部皮膚，試驗(yàn)2組較對(duì)照組S/P值極顯著增大；腹部皮膚試驗(yàn)1組與對(duì)照組相比S/P值顯著增大（P＜0.05），試驗(yàn)2組和3組較對(duì)照組S/P值極顯著降低（P＜0.01）；背中部皮膚各個(gè)試驗(yàn)組相對(duì)于對(duì)照組S/P值均極顯著增大（P＜0.01）。

表4 飼糧中肌醇水平對(duì)不同月齡獺兔S/P值的影響

3月齡獺兔，腹部皮膚S/P值變化各組間差異不顯著（P＞0.05）；背中部皮膚各試驗(yàn)組較對(duì)照組S/P值極顯著增大（P＜0.01）；肩部皮膚各試驗(yàn)組之間S/P值差異不顯著（P＞0.05），與對(duì)照組比較均極顯著降低（P＜0.01）。臀部皮膚試驗(yàn)2組與對(duì)照組比較S/P值顯著增加（P＜0.05）。

4月齡獺兔，肩部皮膚試驗(yàn)2組S/P值極顯著增大（P＜0.01），試驗(yàn)1組和對(duì)照組相比S/P值顯著降低（P＜0.05）。背中部和臀部皮膚，試驗(yàn)3組S/P與對(duì)照組比較極顯著增大（P＜0.01），試驗(yàn)2組與對(duì)照組比較S/P值顯著增加（P＜0.05）。腹部皮膚試驗(yàn)1組和試驗(yàn)3組較對(duì)照組S/P值極顯著減?。≒＜0.01）。

3 討論與分析

獺兔以其獨(dú)特的被毛風(fēng)格深受人們的喜愛(ài)，被毛密度是獺兔皮張質(zhì)量的重要指標(biāo)之一，而獺兔被毛密度是由毛囊密度決定的[6]。根據(jù)發(fā)生時(shí)間以及形態(tài)結(jié)構(gòu)特征，毛囊可分為初級(jí)毛囊和次級(jí)毛囊。初級(jí)毛囊的直徑相對(duì)較大，毛球深陷真皮內(nèi)；次級(jí)毛囊直徑較細(xì)，分布較淺，毛球位于真皮的淺層。毛囊作為產(chǎn)毛動(dòng)物皮膚的重要組織結(jié)構(gòu)，其遺傳力與被毛特征的遺傳相關(guān)性中等偏高，增加毛囊大小、深度和密度等成為提高被毛重量的途徑[7]，因動(dòng)物出生后不再有新的毛囊發(fā)生[8]。

3.1 不同月齡獺兔毛囊密度

動(dòng)物出生后，雖然皮膚結(jié)構(gòu)已基本發(fā)育完全，但真皮內(nèi)的毛囊會(huì)繼續(xù)生長(zhǎng)發(fā)育。人們對(duì)力克斯兔皮膚毛囊密度變化的研究結(jié)果不盡相同。有研究結(jié)果表明，力克斯兔出生后1、2、5、6月齡時(shí)皮膚毛囊密度無(wú)顯著性差異[9]。張自強(qiáng)等研究結(jié)果顯示，力克斯兔出生后15 d到出生后60 d，背部初級(jí)毛囊密度和次級(jí)毛囊密度均在逐漸增加，但次級(jí)毛囊密度的增長(zhǎng)速度大于初級(jí)毛囊，出生90 d時(shí)初級(jí)毛囊密度降低，次級(jí)毛囊密度增高，毛囊發(fā)育趨于穩(wěn)定[10]。本研究結(jié)果顯示，獺兔單位面積初級(jí)毛囊密度從2月齡到4月齡顯著減少（P＜0.05）。次級(jí)毛囊密度的變化，不同部位變化規(guī)律不同。結(jié)合S/P值的變化，腹部、臀部和背中部皮膚次級(jí)毛囊密度從3月齡到4月齡時(shí)增長(zhǎng)很快，而肩部皮膚次級(jí)毛囊密度3月齡時(shí)增長(zhǎng)最快，與張自強(qiáng)等研究結(jié)果一致。這可能是由于獺兔不同月齡皮膚面積增加速度不同[11]，不同部位皮膚面積增長(zhǎng)速度也不同。對(duì)濟(jì)寧青山羊的研究顯示，1～5月齡,隨著年齡的增長(zhǎng)，毛囊群中次級(jí)毛囊的數(shù)量稍有增加（P＞0.05），而初級(jí)毛囊的數(shù)量稍有下降（P＞0.05）[12],本結(jié)果變化趨勢(shì)與上述研究一致。

3.2 飼糧中肌醇水平對(duì)各期毛囊密度的影響

毛囊位于富含脂肪細(xì)胞的真皮內(nèi)。研究表明，真皮內(nèi)脂肪細(xì)胞的更新動(dòng)力學(xué)與毛的生長(zhǎng)周期同步，毛囊細(xì)胞和脂肪細(xì)胞之間存在相互作用。真皮內(nèi)成熟的脂肪細(xì)胞表達(dá)骨形態(tài)發(fā)生蛋白2（BMP2）、表皮生長(zhǎng)因子（EGF）、游離脂肪酸（FFAs）等因子[13]，而這些因子參與了毛囊的形態(tài)發(fā)生和發(fā)育[14]。真皮脂肪組織作為毛囊發(fā)育必需的微環(huán)境，脂肪細(xì)胞系細(xì)胞與毛的生長(zhǎng)密切相關(guān)[15]。研究證實(shí)，毛囊生長(zhǎng)周期與脂肪細(xì)胞層厚度的變化一致[16]。據(jù)此推測(cè)，肌醇很可能通過(guò)調(diào)節(jié)脂代謝，改變皮膚真皮脂肪層，影響毛囊發(fā)育。在本試驗(yàn)中，飼料中添加50 mg/kg肌醇后，試驗(yàn)2組2～4月齡背中部和臀部S/P值顯著增加。對(duì)次級(jí)毛囊密度的測(cè)定結(jié)果也顯示，與對(duì)照組比較試驗(yàn)2組2～4月齡的背中部和臀部密度顯著增加。2～3月齡背中部和臀部初級(jí)毛囊密度顯著降低（P＜0.05），這可能是由于2～4月齡獺兔生長(zhǎng)速度較快，皮面積顯著增加[11]導(dǎo)致初級(jí)毛囊密度下降，因此，50 mg/kg肌醇的添加量能顯著促進(jìn)2～3月齡獺兔背中部和臀部皮面積的增加，而且2～4月齡次級(jí)毛囊密度的增加超過(guò)相應(yīng)皮面積的增加。但是50 mg/kg肌醇的添加量對(duì)2～4月齡腹部皮面積的增加沒(méi)有顯著影響。

4 結(jié)論

飼糧中添加50 mg/kg肌醇可以顯著增加2～4月齡獺兔背中部和臀部次級(jí)毛囊密度，顯著降低2～3月齡背中部和臀部初級(jí)毛囊密度，S/P值顯著增加。