戚艷麗，楊方方，金建軍

1.河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院消化內(nèi)科，河南 洛陽471000;2.宜陽縣人民醫(yī)院心血管內(nèi)科

幽門螺桿菌(H.pylori)是很多胃腸疾病的獨(dú)立致病因子或相關(guān)因素，清除后部分疾病可以得到較好的控制，因此越來越受到人們的重視。流行病學(xué)資料顯示，全球半數(shù)以上的人群存在H.pylori 感染，然而大部分感染H. pylori 的患者沒有任何癥狀，只有15% ～20%的感染者產(chǎn)生疾?。?］。其原因可能與宿主、環(huán)境和H.pylori 的基因多態(tài)性有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，不同的基因型其致病力不同，對人體的危害也不同;不同的基因型在各個地區(qū)的分布也不相同。空泡毒素基因(vacuolating cytotoxin gene，VacA)是最常見的基因型，它又分好多亞型，每個亞型的致病力差別很大。那么在洛陽地區(qū)VacA 基因亞型分布怎樣?目前尚未見報道。本研究擬通過檢測來自洛陽不同地區(qū)的H.pylori 感染患者的VacA 基因亞型，探討洛陽地區(qū)H.pylori 感染的優(yōu)勢VacA 基因亞型、分布特征及與胃腸疾病關(guān)系，從而為制定洛陽地區(qū)H. pylori 感染的防治戰(zhàn)略提供幫助。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2013 年9 月-2014 年4 月河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院就診的H.pylori 陽性的胃腸疾病患者546 例，男294 例，女252 例，平均年齡(51.11 ±14.42)歲。納入標(biāo)準(zhǔn):均經(jīng)14C 尿素呼氣試驗檢測為H.pylori(+)，均接受胃鏡及病理檢查，均為洛陽地區(qū)常住人口，無長期外地居住史。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)近2 周內(nèi)用過抑酸劑、抗菌素或鉍劑者。(2)合并嚴(yán)重的心血管、血液、內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病者。(3)酗酒，有藥癮者。入選對象均于治療前清晨空腹抽取肘靜脈血3 ml，室溫下靜置1 h 使血液自然凝集，離心20 min(3 000 r/min)，仔細(xì)收集上清液血清約500 μl，分裝后置于-80 ℃冰箱保存待檢。

1.2 方法 H. pylori 檢測:采用14C 尿素呼氣試驗。儀器購自深圳中核海得威生物科技有限公司。VacA及VacA S1a、VacA S1b、VacA S2、VacA M1、VacA M2亞型的檢測:采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA 法)。試劑盒為美國TSZ 公司生產(chǎn)，上海酶聯(lián)生物科技有限公司分裝。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS 17.0 統(tǒng)計學(xué)分析軟件，計數(shù)資料采用χ2檢驗P ＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 洛陽地區(qū)VacA 的分布情況 在546 例感染H.pylori患者中，VacA 的總陽性率為48.35%，其中洛陽市區(qū)內(nèi)VacA 的陽性率為40.00%，市區(qū)外縣區(qū)VacA 的陽性率為50.70%，三者相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P ＞0.05，見表1)。

表1 洛陽地區(qū)H. pylori 感染VacA 基因型的分布特征［例數(shù)(%)］Tab 1 The distribution of H. pylori infection VacA genotype in Luoyang［n(%)］

2.2 洛陽地區(qū)VacA 亞型的分布特征 VacA 基因型有2 個易變信號區(qū)，S 區(qū)和M 區(qū)，S 區(qū)又可分為S1a、S1b、S2;M 區(qū)，又可分為M1、M2。在264 例VacA 陽性病例中，S 區(qū)陽性率分別為S1a:76.52%(202/264)、S1b:20.45%(54/264)、S2:0.76%(2/264)、未分型6例，以S1a 為最高;與其他兩個分型相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0. 05);M 區(qū)陽性率分別為M1 ∶21. 97%(58/264)、M2∶72.24%(196/264)，未分型10 例，以M2 為最高，與M1 型相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0.05)。

2.3 洛陽地區(qū)VacA 基因亞型嵌合體的分布特征由上可知，S 區(qū)分為S1a、S1b、S2;M 區(qū)分為M1、M2，它們常常以嵌合體的形式存在。在264 例VacA 陽性病例中，VacA 基因亞型嵌合體的陽性率分別為S1a/M1∶12.88%(34/264)、S1a/M2 ∶47. 73% (126/264)、S1b/M1 ∶3.79% (10/264)、S1b/M2 ∶12. 88%(34/264)，未發(fā)現(xiàn)S2 嵌合體，以S1a/M2 為最高，與其他嵌合體相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0.05)。

2.4 洛陽地區(qū)不同胃腸病VacA 基因亞型嵌合體分布特征 病例數(shù)較多的3 種疾病:淺表性胃炎、糜爛性胃炎、十二指腸潰瘍，其感染H.pylori 常見的VacA 基因亞型嵌合體的表現(xiàn)形式是S1a/M1、S1a/M2、S1b/M2。但每一種形式在3 種疾病之間相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。其余疾病因病例數(shù)太少，不做統(tǒng)計(見表2)。

表2 洛陽地區(qū)不同胃腸病VacA 基因亞型嵌合體分布特征［例數(shù)(%)］Tab 2 The distribution of VacA chimeric gene subtypes from different gastrointestinal diseases in Luoyang［n(%)］

續(xù)表2

3 討論

VacA 是H.pylori 主要的毒力相關(guān)基因之一，存在于所有的菌株中，其編碼產(chǎn)物VacA 蛋白(Vacuolating ytotoxin.associated protein A. VacA)是一種空泡毒素，可導(dǎo)致宿主上皮細(xì)胞漿內(nèi)形成空泡。其成熟亞單位以可溶形式釋放入細(xì)胞間空隙或留在細(xì)菌表面，以低聚體復(fù)合物形式插入脂質(zhì)雙分子層，形成陰離子選擇通道，增加已極化上皮細(xì)胞的通透性，使細(xì)胞失去屏障功能，也可引起線粒體破壞、細(xì)胞毒素釋放及胃上皮細(xì)胞凋亡。VacA 蛋白的分子量約87 kD，所有H.pylori 都有VacA 基因，但只有50% ～60%的H.pylori 表達(dá)VacA 蛋白，稱為產(chǎn)毒菌。有毒素活性(Tox+)與無毒素活性(Tox-)的H. pylori 在VacA 基因中間區(qū)DNA 序列上有所不同，將Tox+的H.pylori 菌株中間序列定為M1 型等位基因，33 個氨基酸的信號區(qū)序列定為S1，S1可再分為S1a 和S1b;將Tox-的H. pylori 菌株中間序列定為M2 型等位基因，30 個氨基酸的信號區(qū)序列定為S2。S 區(qū)基因編碼信號肽，是毒素運(yùn)輸?shù)鞍追肿拥囊徊糠?M 區(qū)基因編碼毒素蛋白。研究發(fā)現(xiàn)VacA 基因有5 種信號區(qū)與中間區(qū)組合的亞型，其表達(dá)空包毒素活性能力不同，由強(qiáng)到弱依次為S1a/M1 ＞S1b/M1＞S1a/M2 ＞S1b/M2 ＞S2/M2。大量研究顯示，來自歐美國家的H.pylori VacA 基因型以S1a 或S1b/M1a 或M2a 為主。而來自日本、韓國、中國香港等亞洲國家或地區(qū)的菌株以S1/M1 或M2b 為主。臺灣地區(qū)以S1a 為主［2-3］。本研究發(fā)現(xiàn)，洛陽地區(qū)H. pylori 菌株VacA 總的陽性率為48.35%，市區(qū)和市區(qū)外縣區(qū)之間無顯著性差異，與總陽性率相比也無顯著性差異。VacA 基因信號區(qū)序列中S 區(qū)以S1a 為最高;M 區(qū)以M2為最高;VacA 基因亞型嵌合體以S1a/M2 為最高。由此可知，洛陽地區(qū)感染的H.pylori 菌株約有48%含有VacA 蛋白，在這48%含有VacA 蛋白的菌株中主要表現(xiàn)為S1a/M2 嵌合體形式為優(yōu)勢基因型?？梢娐尻柕貐^(qū)感染的H.pylori 菌株致病力相對較低，引起胃腸疾病幾率相對較小或較輕。公眾在做健康體檢時可不作為常規(guī)項目。另外，我們的研究發(fā)現(xiàn)VacA 基因亞型的分布與不同的胃腸疾病無明顯相關(guān)性，與國內(nèi)外文獻(xiàn)報道一致［4-7］。

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