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高效液相色譜法測(cè)定三七血傷寧分散片中重樓皂苷Ⅰ的含量

吳莉1江偉1劉永忠2

（1江西省上高縣人民醫(yī)院上高336400；2江西中醫(yī)藥大學(xué)南昌330006）

摘要：目的：建立高效液相色譜法測(cè)定三七血傷寧分散片中主要成分重樓皂苷Ⅰ的含量。方法：Waters Symmetry ShieldTMRP18柱（150×4.6 mm，5 μm）；以乙腈-水（40∶60）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長203nm；流速：l ml/min；柱溫：40℃。結(jié)果：重樓皂苷Ⅰ在具有良好的線性關(guān)系（r=0.9986，n=6）；平均加樣回收率為99.68%（n=6），說明回收率良好。結(jié)論：用高效液相色譜法測(cè)定三七血傷寧分散片中重樓皂苷Ⅰ，方法簡便，重現(xiàn)性好。

關(guān)鍵詞：三七血傷寧分散片；重樓皂苷Ⅰ；HPLC法；含量測(cè)定

三七血傷寧分散片由三七血傷寧膠囊經(jīng)改變劑型加工制成。分散片具有多種優(yōu)良性能，在水中可迅速崩解，均勻分散，相對(duì)于普通固體制劑，具有服用方便、溶解吸收快速、生物利用度高、能降低藥物的不良反應(yīng)等特點(diǎn)[1]。而且，它制備簡單，工藝和普通片劑相同，對(duì)生產(chǎn)設(shè)備無特殊要求。三七血傷寧膠囊臨床上主要用于止血鎮(zhèn)痛、祛瘀生新，對(duì)瘀血阻滯、血不歸經(jīng)之各種血證及瘀血腫痛有良好療效，具有涼血、收澀止血之功效[2]。

1　儀器與試劑

Waters高效液相色譜儀（515型雙元泵，996光電二極管矩陣檢測(cè)器，7725進(jìn)樣閥，Waters色譜工作站）；Waters Symmetry ShieldTMRP18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；EJ-2000電子分析天平（日本AND）。乙腈（色譜純），甲醇（色譜純），水（重蒸餾水）。三七血傷寧分散片（自制，批號(hào)：20140801、20140802、20140803、20140804）；重樓皂苷Ⅰ（上海一基生物試劑有限公司，批號(hào)：200802）。

2　實(shí)驗(yàn)方法

用高效液相色譜法測(cè)定自制三七血傷寧分散片中重樓皂苷Ⅰ的含量[3~5]。

2.1色譜條件Waters Symmetry ShieldTMRP18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈－水（40∶60）；檢測(cè)波長203 nm；流速：l ml/min；柱溫：40℃。

2.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取對(duì)照品重樓皂苷Ⅰ適量，加甲醇適量使之完全溶解，制成每1 ml 含0.5 mg重樓皂苷Ⅰ的溶液，備用。

2.3供試品液的制備隨機(jī)取三七血傷寧分散片10片，稱重，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于重樓皂苷Ⅰ125 mg），置50 ml具塞燒瓶中，加40 ml甲醇，超聲處理40 min（功率250 W，頻率25 kHz）。取出后放冷至室溫，加甲醇至刻度，搖勻后過濾，甲醇洗滌3次，合并濾液，以0.45 μm微孔濾膜濾過，25 ml甲醇定容，即得。

2.4回收率實(shí)驗(yàn)取一定量供試品，采用加樣回收法，加入一定量對(duì)照品溶液，按供試品溶液的制備進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，n=6，本品所擬的含量測(cè)定方法測(cè)定均有良好的回收率。見表1。

表1　三七血傷寧分散片中重樓皂苷Ⅰ回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.5標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)定精密稱取對(duì)照品5.08 mg 置5 ml定量瓶中，加甲醇使之完全溶解，并稀釋至刻度，搖勻。準(zhǔn)確吸取2 μl、5 μl、10 μl、15 μl、20 μl注入高效液相色譜儀中，測(cè)定，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，將進(jìn)樣量與峰面積進(jìn)行回歸處理，回歸方程為：Y=2 130 407.3X+2 658.65，r=0.998 6，重樓皂苷Ⅰ在2.032~20.320 μg范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積有較好的線性關(guān)系。

2.6樣品含量測(cè)定精密吸取上述對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μl，按2.1項(xiàng)下條件，分別注入高效液相色譜儀進(jìn)行含量測(cè)定，測(cè)定4批三七血傷寧分散片中重樓皂苷Ⅰ含量。見表2。

表2　三七血傷寧分散片中重樓皂苷Ⅰ含量測(cè)定結(jié)果

3　討論

三七血傷寧中的重樓為百合科重樓屬植物華重樓ParispolyphyllaSmithvar.chinenisi（Franch）Hara、云南重樓ParispolyphyllaSmithvar.yunnanensis （Franch.）Hand.-Mazz.或七葉一枝花ParispolyphyllaSmithvar,chinensis（Franch.）Hara的干燥根莖。具有消腫止血、清熱解毒、涼肝定驚的功效。是國家重點(diǎn)保護(hù)的野生植物藥材品種，是著名的中成藥云南白藥、季德勝蛇藥的主要成

分?，F(xiàn)代藥理研究表明重樓皂苷Ⅰ具有抗炎、抗腫瘤、抗病毒、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、降低膽固醇、降低血壓、止血等作用[6]，黃河以南大部分省區(qū)有產(chǎn)，但各地的藥材中重樓皂苷Ⅰ含量不同[7]。

三七血傷寧為常用中成藥，我們對(duì)其進(jìn)行劑型改革，研制成分散片，分散片與原膠囊、散劑等劑型相比有許多優(yōu)點(diǎn)，可以補(bǔ)充原產(chǎn)品的形式，滿足患者的需要，本實(shí)驗(yàn)是為該品的質(zhì)量控制建立方法。

由于重樓中的甾體皂苷易溶于水，易產(chǎn)生大量泡沫，給提取操作帶來一定困難，而重樓皂苷Ⅰ（分子式：C44H70O16，分子量855.02）不溶于水、石油醚，可溶于甲醇，所以用甲醇提取簡單易行。本實(shí)驗(yàn)建立了重樓皂苷Ⅰ的HPLC含量測(cè)定方法，回收率好，結(jié)果準(zhǔn)確，證明該方法可控制本產(chǎn)品的質(zhì)量。

參考文獻(xiàn)

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[2]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典一部[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005.401

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[6]李晞,王繼紅,亞雄.重樓提取液對(duì)結(jié)腸癌SW480細(xì)胞增殖的影響及其作用機(jī)制[J].中國生物制品學(xué)雜志,2010,23(6):619-622

[7]李峰,蔣桂華.中藥商品學(xué)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2014.173-174

●綜述與進(jìn)展●

收稿日期：（2015-06-03）

doi:10.13638/j.issn.1671-4040.2015.09.055

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

中圖分類號(hào)：R284.1