李兆龍，徐義策，周潔 （華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬孝感醫(yī)院耳鼻咽喉科，湖北 孝感432000）

藥物性耳聾是耳毒性藥物引起內(nèi)耳毛細(xì)胞損傷后所造成的一種感音神經(jīng)性耳聾，以往的研究主要集中在氨基甙類藥物作用后損傷內(nèi)外毛細(xì)胞、螺旋神經(jīng)節(jié)、血管紋等部位以及氧自由基對(duì)線粒體損傷等［1］。而水楊酸鈉是臨床上常用的解熱鎮(zhèn)痛藥，也是一種自由基清除劑［2］。本實(shí)驗(yàn)通過同時(shí)給予慶大霉素及水楊酸鈉注射液腹腔注射，觀察大鼠聽覺功能的改變，為以后研究傳入神經(jīng)神經(jīng)突觸性聽力損傷提供實(shí)驗(yàn)方面的依據(jù)。

l 材料與方法

1.1 動(dòng)物分組

選用5周齡清潔級(jí)SD大鼠44只，雌雄不限，體重100～110g（由湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供），隨機(jī)分成慶大霉素（GM）組、水楊酸鈉（SA）組、聯(lián)合用藥（GM＋SA）組、正常對(duì)照組。

1.2 動(dòng)物給藥

GM組給予慶大霉素150mg／kg腹腔注射，1次／d；SA組給予水楊酸鈉溶液150mg／kg腹腔注射，1次／d；GM＋SA組同時(shí)給予慶大霉素及水楊酸鈉注射液腹腔注射，劑量同上。硫酸慶大霉素注射液：8萬單位／mL，天津藥業(yè)焦作有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：10021721；水楊酸鈉，北京化工二廠生產(chǎn)，批號(hào)：910418；10%水合氯醛：湖北省孝感市中心醫(yī)院生產(chǎn)。正常對(duì)照組不予任何處理。

1.3 聽性腦干反應(yīng)（ABR）閾值測(cè)試

各組大鼠均于用藥后第7、10、14天檢測(cè)ABR閾值，正常對(duì)照組同時(shí)檢測(cè)。ABR閾值檢測(cè)方法見文獻(xiàn) ［3］。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

ABR閾值檢測(cè)數(shù)據(jù)以 （±s）表示，組間差異性檢驗(yàn)采用SPSS 18.0for windows統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行方差分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 動(dòng)物一般狀況觀察

所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在用藥后飲食正常，部分動(dòng)物用藥后體重?zé)o明顯下降，各組之間體重?zé)o明顯差異，無偏頭、肢體外展、強(qiáng)迫環(huán)繞運(yùn)動(dòng)、站立不穩(wěn)等前庭功能異常現(xiàn)象，無死亡大鼠。

2.2 大鼠ABR閾值

給藥7d后GM組（150mg／kg）12只大鼠Click聽閾有所下降，給藥第10、第14天后大鼠Click聽閾繼續(xù)下降，與正常對(duì)照組比較ABR（Click）閾值差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。給藥第7天、10、14天后，SA組（150mg／kg）12只大鼠ABR（Click）聽閾未有明顯下降，與正常對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。給藥第7、10、14天后，GM＋SA組（150mg／kg）12只大鼠ABR（Click）聽閾未有明顯下降，與正常對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。見表1。

表1 不同藥物對(duì)大鼠ABR閾值的影響

3 討論

本實(shí)驗(yàn)中GM組大鼠在給藥第7天，各頻率ABR閾值開始下降，繼續(xù)給藥至第14天，大鼠聽力下降明顯。主要是氨基甙類藥物在耳蝸有一個(gè)蓄積的過程并損傷內(nèi)外毛細(xì)胞，有實(shí)驗(yàn)［1，4］證實(shí)在氨基甙類藥物暴露后的大鼠，內(nèi)外毛細(xì)胞有不同程度的缺失。部分毛細(xì)胞胞核發(fā)生凋亡，這也可能是機(jī)體啟動(dòng)了一系列保護(hù)性的機(jī)制來對(duì)抗氨基甙類藥物造成的耳毒性。實(shí)驗(yàn)亦證實(shí)內(nèi)外毛細(xì)胞能主動(dòng)吸收慶大霉素，尤其是低回毛細(xì)胞吸收作用更強(qiáng)［1］，這也可能是我們常常所見到的高頻聽力下降的一種原因。

在本實(shí)驗(yàn)中SA組大鼠在給藥第10天，各頻率ABR閾值未有明顯變化，繼續(xù)給藥至第14天，大鼠聽力下降輕度下降（P＞0.05）對(duì)大鼠進(jìn)行行為學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)部分大鼠偶爾有方向缺失感，反應(yīng)靈敏性下降，但停藥觀察后大鼠均反應(yīng)正常。大量研究表明神經(jīng)的可塑性變化可導(dǎo)致耳鳴［5］，而且停藥后大鼠恢復(fù)原有狀態(tài)是否為神經(jīng)可塑性的結(jié)果還需進(jìn)一步研究。目前有研究表明在耳蝸傳入神經(jīng)與內(nèi)毛細(xì)胞之間存在著一種帶狀突觸結(jié)構(gòu)，這種突觸結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜主要成員有RIBEYE，Bassoon及Piccolo，而RIBEYE被認(rèn)為是內(nèi)毛細(xì)胞帶狀突觸結(jié)構(gòu)的組成部分，可能具有酶活性，含有A domain及B domain，現(xiàn)可用抗CtBP2抗體標(biāo)記RIBEYE中的B domain從而起到標(biāo)記整個(gè)帶狀突觸結(jié)構(gòu)［6，7，4］。聽覺過程包括聲－電－化學(xué)－點(diǎn)神經(jīng)沖動(dòng)－中樞信息等多個(gè)環(huán)節(jié)，包括內(nèi)外毛細(xì)胞，支持細(xì)胞，傳入神經(jīng)纖維，傳入神經(jīng)突觸。有研究表明注射水楊酸鈉使位于外毛細(xì)胞上的驅(qū)動(dòng)蛋白prestin蛋白特異性表達(dá)增強(qiáng)從而使外毛細(xì)胞的電致運(yùn)動(dòng)增強(qiáng)；注射水楊酸鈉能夠引起氯化物轉(zhuǎn)運(yùn)體家族多個(gè)成員mRNA表達(dá)的改變。多種因素的協(xié)同作用可能使外毛細(xì)胞所處內(nèi)環(huán)境中的Cl－濃度發(fā)生改變，最終導(dǎo)致外毛細(xì)胞內(nèi)的Cl－濃度增加而使耳蝸主動(dòng)性增加［8］。

在本實(shí)驗(yàn)中GM＋SA組大鼠聽力未發(fā)生明顯變化，表明水楊酸鈉對(duì)低劑量硫酸慶大霉素耳毒性具有一定的保護(hù)作用。以往研究表明自由基和鐵離子在GM的耳毒性中起重要作用，而SA對(duì)GM造成的耳毒性有一定的保護(hù)作用［9］，而在這個(gè)過程中內(nèi)毛細(xì)胞的帶狀突觸究竟發(fā)生了怎么樣的變化尚需進(jìn)一步的研究。

［1］丁大連，Richard S.氨基糖苷類抗生素耳毒性研究 ［J］.中華耳科學(xué)雜志，2007，5（2）：125～131.

［2］Song B B，Anderson D J，SchachT J.Protection from gentamicinot otoxicity by iron chelators in guinea pig in vivo ［J］.J Pharmacol Exp Ther，1997，282：369～377.

［3］袁分錢；楊仕明；孫建和，等 .速尿與硫酸卡那霉素聯(lián)合用藥對(duì)大鼠內(nèi)耳毒性的實(shí)驗(yàn)觀察 ［J］.中華耳科學(xué)雜志，2011，9（1）：66－71.

［4］李姝娜，柳柯，任重，等 .慶大霉素對(duì)耳蝸內(nèi)毛細(xì)胞帶狀突觸數(shù)量的影響 ［J］.解剖科學(xué)進(jìn)展，2008，14（3）：298～301.

［5］劉丹政，王德輝，周梁，等.水楊酸對(duì)C57BL／6小鼠耳蝸聲損傷的作用 ［J］.中國臨床醫(yī)學(xué)，2008，15（2）：239～242.

［6］Liu K，Li S，Jang X J，et al.Quantitative analysis of the ribbon synapse number of cochlear inner hair cells in C57BL／6Jmice using the three－dimensional modeling method.Sci China ［J］.C Life Sci，2009，52：807～812.

［7］徐義策，王雪峰，柳柯，等 .氨基甙類藥物毒性對(duì)耳蝸內(nèi)毛細(xì)胞傳入神經(jīng)突觸谷氨酸受體的影響 ［J］.解剖科學(xué)進(jìn)展，2012，18（5）：401～404，408.

［8］馮爽，韋嘉章，高萌，等.水楊酸鈉抑制大鼠螺旋神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元電壓門控鈉通道的研究 ［J］.廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，27（1）：1～4.

［9］Su Huasha，Jochen S.Antioxidanta attenuate gentamicin－induced free radical formation in vitro and ototoxicity in vivo：D－methionine is a potential protectant ［J］.Heart Res，1999，142：34～40.