逯小萌

（濮陽市食品藥品檢驗所，河南濮陽457000）

RP-H PLC測定酚酞片的含量

逯小萌

（濮陽市食品藥品檢驗所，河南濮陽457000）

目的：建立酚酞片含量測定的反相高效液相色譜法。方法：色譜柱為Thermo-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相：甲醇∶乙腈∶水（25∶30∶45），流速為1.0 mL/min，柱溫為30℃，檢測波長為275 nm。結果：酚酞進樣量在0.150 7～1.506 6 μg范圍內與峰面積呈良好線性關系，r=0.999 8，平均回收率為99.36%，RSD= 0.35%（n=9）。結論：該方法準確度、靈敏度及重復性均較好，可作為酚酞片的含量測定方法。

酚酞片；反相高效液相色譜法；含量測定

酚酞片為白色或微黃色片，藥品別名輕瀉片，用于治療習慣性頑固性便秘，收載于《中國藥典》2010年版二部［1］，標準中含量測定項使用紫外分光光度分析方法進行測定。本研究建立反相高效液相色譜法測定酚酞片的含量，該方法簡便準確、專屬性強、重現(xiàn)性好，可以更好地控制酚酞片的質量。

1　儀器和試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；G1314B型Agilent 1200可變波長檢測器（美國安捷倫公司）；H4033A型色譜工作站（美國安捷倫公司）；Precisa92SM--202A型電子天平（瑞士普利賽斯公司）；UVIKON XL型雙光束掃描紫外/可見分光光度計（法國賽克曼公司）；KS-500E11型超聲儀（寧波海曙科生超聲設備有限公司）；0.45 μm微孔濾膜（天津市津騰實驗設備有限公司）；酚酞對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：100091-199601，供含量測定用）；酚酞片（山西亨瑞達制藥有限公司：批號141107，140103，141205，規(guī)格均為50 mg）；甲醇、乙醇、乙腈為色譜純；水為純化水；其余試劑均為分析純。

2　方法與結果

2.1色譜條件

色譜柱：Thermo-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：甲醇∶乙腈∶水（25∶30∶45）；流速：1.0 mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：275 nm；進樣量：20 μL。理論板數(shù)＞5 000。按此色譜條件進樣測定，色譜圖見圖1。

2.2溶液的制備

取本品20片，精密稱定，研細，精密稱取細粉適量（約相當于酚酞50 mg），置100 mL量瓶中，加乙醇適量，超聲使酚酞片溶解，放冷，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5 mL，置50 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液［2-5］。精密稱取酚酞對照品25.11 mg，加乙醇適量，超聲使其溶解，放冷，用流動相稀釋至濃度為50 μg/mL的溶液作為對照品溶液；按供試品溶液制備方法制備不含酚酞的溶液，即得陰性對照溶液［2-5］。

2.3方法學考察

2.3.1專屬性試驗分別精密吸取經(jīng)微孔濾膜濾過的對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。由圖1可見，供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應位置上有相同保留時間的色譜峰，陰性對照溶液無干擾，證明方法可行。

2.3.2線性關系考察精密吸取經(jīng)微孔濾膜濾過的對照品溶液3，5，10，15，20，25，30 μL注入液相色譜儀，以對照品進樣量為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，回歸方程：

Y=38.066X-0.835 4，

r=0.999 8（n=7）。結果表明，酚酞在0.150 7～1.506 6 μg范圍內線性關系良好。

圖1　酚酞高效液相色譜圖

2.3.3精密度試驗精密吸取經(jīng)微孔濾膜濾過的同一供試品溶液20 μL，注入高效液相色譜儀，重復6次。結果峰面積平均值為768.66，RSD= 0.25%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.3.4穩(wěn)定性試驗精密吸取同一供試品溶液，分別于0，2，4，6，8，10，12，24 h進樣20 μL，結果峰面積的平均值為771.22，RSD=0.27%（n=8）。表明供試品溶液在24 h內基本穩(wěn)定。

2.3.5重復性試驗取同一批樣品，按擬定方法平行制備6份供試品溶液，分別進行測定。結果得RSD=0.29%（n=6），表明該方法重復性良好。

2.3.6加樣回收率試驗精密量取已知含量的同一批號的樣品（山西亨瑞達制藥有限公司，批號：141107，規(guī)格：50 mg，平均片重0.111 1 g）9份，加入適量對照品依“2.2.2”項下擬定的方法配成高（120%）、中（100%）、低（80%）3個量級的樣品溶液，進行測定，計算回收率和RSD值，結果見表1。

表1　酚酞加樣回收試驗結果

2.4樣品含量測定

分別精密量取3批樣品適量，依法制備供試品溶液并進樣測定，用外標法計算酚酞片的含量，并與《中國藥典》2010年版二部方法進行比較，結果見表2。

表2　樣品含量測定結果（%）

3　討論

在試驗波長的選擇上，取對照品溶液在UVIKON XL型雙光束掃描紫外/可見分光光度計200～300 nm波長范圍內進行掃描，測得在229 nm與275 nm波長處有最大吸收。因為大多數(shù)溶劑都在短波長處有最大吸收，為了減少干擾和得到準確的數(shù)據(jù)［3］，故選擇275 nm為檢測波長。

在流動相及其比例的選擇上分別選擇了甲醇∶水、乙腈∶水、甲醇∶乙腈∶水及甲醇-0.1%磷酸二氫鉀等進行試驗，結果用甲醇∶乙腈∶水（25∶30∶45）作為流動相，樣品主成分峰型良好，峰型尖銳，保留時間合理，且陰性對照溶液峰對其無干擾，分離效果滿意，故選擇甲醇∶乙腈∶水（25∶30∶45）為流動相。

采用RP-HPLC測定酚酞片的含量，操作簡單易行，重現(xiàn)性好，準確度高，線性關系良好，提高了含量測定結果的準確度，與《中國藥典》2010年版二部紫外分光光度法的測定結果比較基本一致，可用于酚酞片含量的測定。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：882.

［2］王玫，曹霞.HPLC法測定酚酞片的含量探討［J］.黑龍江醫(yī)藥，2009，22（3）：260-261.

［3］孫銀華.HPLC法測定酚酞片中酚酞的含量［J］.中國實用醫(yī)藥，2011，6（25）：15-16.

［4］萬慶，錢世兵.RP-HPLC法測定酚酞片的含量［J］.安徽醫(yī)藥，2006，10（12）：922-923.

［5］胡丹.RP-HPLC法測定酚酞片中酚酞的含量［J］.中國現(xiàn)代醫(yī)生，2013，51（23）：81-82.

Content Determination of Phenolphthalein Tablets by RP-HPLC

Lu Xiaomeng
（Puyang Municipal Institute for Food and Drug Control，Henan Puyang 457000，China）

Objective：To establish a method to determine the content of phenolphthalein tablets by reversed phase high-performance liquid chromatography（RP-HPLC）.Methods:The chromatographic column was Thermo-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）with a mobile phase of methanol-acetonitrile-water（25∶30∶45），the flow rate was 1.0 mL/min，the column temperature was at 30℃，and the detection wavelength was at 275 nm.Results:A good linear relationship was showed between the peak area and phenolphthalein sample volume of 0.150 7～1.506 6 μg，r=0.999 8.The average recovery rate was 99.36%，RSD=0.35%（n=9）.Conclusion:The method is accurate，sensitive and repeatable，and can be used for the content determination of phenolphthalein tablets.

Phenolphthalein Tablets；RP-HPLC；Content Determination

10.3969/j.issn.1672-5433.2015.10.003

2015-06-10）

逯小萌，男，主管藥師。研究方向：藥品檢驗。E-mail：lumeng911@163.com