衷敬華，王祥財(cái)，許明君，施華球，王釔力，黃　莉，張積仁（通信作者）

（1贛南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院 腫瘤科，江西贛州341000；2南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院 腫瘤中心，廣東廣州510282）

放射性肺損傷大鼠肺組織MMP-2、TlMP-2蛋白在百令膠囊干預(yù)下表達(dá)變化的實(shí)驗(yàn)研究

衷敬華1，王祥財(cái)1，許明君1，施華球1，王釔力1，黃莉1，張積仁2（通信作者）

（1贛南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院 腫瘤科，江西贛州341000；2南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院 腫瘤中心，廣東廣州510282）

目的：分析放射性肺損傷大鼠肺組織基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP-2）、金屬蛋白酶特異性組織抑制物2（TIMP-2）蛋白在百令膠囊干預(yù)下表達(dá)變化，探討百令膠囊防治放射性肺損傷效果。方法：將141只SD大鼠（清潔級，6周齡，雄性）隨機(jī)分為隨機(jī)分為正常對照組（21只）、模型組（30只）、百令預(yù)防組（30只）、百令治療組（30只）、地塞米松組（30只），每組于不同時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)處死大鼠，免疫組織化學(xué)法觀察肺組織MMP-2、TIMP-2蛋白的表達(dá)。結(jié)果：相比于模型組，百令預(yù)防組、百令治療組MMP-2、TIMP-2蛋白表達(dá)明顯降低（P＜0.01或P＜0.05）。結(jié)論：放射性肺損傷病理變化與TIMP-2和MMP-2表達(dá)失衡相關(guān)，調(diào)節(jié)大鼠肺組織MMP-2/TIMP-2比例平衡是百令膠囊保護(hù)放射性肺損傷大鼠的可能機(jī)制。

放射性肺損傷；百令膠囊；基質(zhì)金屬蛋白酶2；金屬蛋白酶特異性組織抑制物2

作為胸部腫瘤放射治療最為常見并發(fā)癥之一，放射性肺損傷的病理實(shí)質(zhì)為外基質(zhì)成分在肺泡和間質(zhì)內(nèi)沉積及纖維組織過度修復(fù)造成肺組織結(jié)構(gòu)的紊亂。研究表明，基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）及其特異性組織抑制物（tissue inhibitors of metallo proteinase，TIMPs）在放射性肺損傷及纖維化形成過程中起著重要的調(diào)節(jié)作用。本研究通過對放射性肺損傷大鼠肺組織MMP-2、TIMP-2蛋白在百令膠囊干預(yù)下表達(dá)變化進(jìn)行分析探討百令膠囊防治放射性肺損傷效果，進(jìn)而探討可能的發(fā)生機(jī)制。

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：141只6周齡SD大鼠（清潔級，雄性）。

1.2藥物：百令膠囊（杭州中美華東制藥有限公司生產(chǎn)，規(guī)格：0.2克/片，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字Z10910036），取1000粒百令膠囊，加入生理鹽水1000ml制成濃度為0.2g/ml（200/1000）混懸液。醋酸地塞米松片（常州康普藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，規(guī)格：0.75毫克/片，產(chǎn)品批號：201135，國藥準(zhǔn)字H32021354），取24片加入90ml生理鹽水制成濃度為0.2mg/ml（18/90）混懸液。

1.3實(shí)驗(yàn)儀器與試劑：VARIAN23EX型直線加速器（美國瓦里安生產(chǎn)），MMP-2，TIMP-2試劑盒。

1.4方法

1.4.1動(dòng)物分組：將141只6周齡SD大鼠（清潔級，雄性）隨機(jī)分為正常對照組（21只）、模型組（30只）、百令預(yù)防組（30只）、百令治療組（30只）、地塞米松組（30只）。

1.4.2模型制作：采用直線加速器X線全胸單次照射建立放射性肺損傷大鼠模型，300cGy/min，總劑量20Gy。

1.4.3給藥方法：百令預(yù)防組于照射前14d開始灌服百令膠囊，其余各組均于造模后第2天開始灌胃，1次/d。

1.5取材方法及指標(biāo)檢測：照射2、4、6周后空白組取7只，其余各組隨機(jī)取10只，以10%水合氯醛麻醉后取右肺，10%福爾馬林溶液固定24h后石蠟包埋，連續(xù)切片5 μm，采用S-P法進(jìn)行免疫組化。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用單因素方差分析，多重比較采用LSD-t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1　各組大鼠不同時(shí)間下肺組織MMP-2表達(dá)量比較（ˉx±s）

表2　各組大鼠不同時(shí)間下肺組織TIMP-2表達(dá)量比較（ˉx±s）

2　結(jié)果

2.1各組大鼠不同時(shí)間下肺組織MMP-2表達(dá)量比較：模型組大鼠肺組織中MMP-2均高表達(dá)，相比于模型組，百令預(yù)防組，百令治療組各時(shí)間點(diǎn)大鼠肺組織中MMP-2表達(dá)均降低（P＜0.01）；地塞米松組各時(shí)間點(diǎn)與模型組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

2.2各組大鼠不同時(shí)間下肺組織TIMP-2表達(dá)量比較：模型組大鼠肺組織中TIMP-2表達(dá)量呈升高趨勢；模型組2、4、6周大鼠肺組織中TIMP-2表達(dá)量明顯高于百令預(yù)防組（P＜0.05或P＜0.01）。百令預(yù)防組2、4周TIMP-2表達(dá)降低較模型組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）、第6周差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

3　討論

放射性肺損傷可使肺臟發(fā)生廣泛纖維化，危及生命。其主要病理特征為基質(zhì)金屬蛋白酶調(diào)控的肺組織結(jié)構(gòu)的重塑。MMPs是一組金屬依賴性蛋白酶，MMPs/TIMPs則是影響處于不斷產(chǎn)生和降解的動(dòng)態(tài)平衡中的細(xì)胞外基質(zhì)的最主要的一組酶系。本研究結(jié)果顯示，相比于空白組，模型組大鼠2至4周肺組織MMP-2蛋白及TIMPs表達(dá)明顯增加，MMP-2/TIMPs比例升高，提示2～4周降解作用增強(qiáng)可導(dǎo)致肺組織損傷。模型組大鼠肺組織4周后TIMP-2表達(dá)增加而MMP-2蛋白表達(dá)逐漸降低，MMP-2/TIMPs比值降低，因降解作用減弱，基質(zhì)沉積增強(qiáng)而導(dǎo)致肺纖維化出現(xiàn)。上述結(jié)果提示，調(diào)節(jié)大鼠肺組織MMP-2/TIMP-2比例平衡是百令膠囊保護(hù)放射性肺損傷大鼠的可能機(jī)制。百令預(yù)防組在2、4周優(yōu)于百令治療組，第6周差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明百令膠囊干預(yù)越早，對早期炎癥階段的調(diào)節(jié)作用越明顯。本研究結(jié)果可以進(jìn)一步證明MMP-2和TIMP-2的綜合變化可能參與放射性肺損傷的發(fā)生、發(fā)展。

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1002-2376（2015）12-0003-02

江西省衛(wèi)計(jì)委中藥局基金支持［2014A143］

2015-09-12