陳子松 李磊 周杭杰 應玲紅

ESAT-6 INF-γ和ADA在結核性腦膜炎早期診斷中的應用

陳子松 李磊 周杭杰 應玲紅

目的 探討早期分泌性靶抗原-6（ESAT-6）、干擾素-γ（INF-γ）和腺苷脫氨酶（ADA）在結核性腦膜炎患兒早期診斷中的應用價值。方法 采用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）檢測ESAT-6和INF-γ水平，采用酶動力學終點法檢測ADA水平，并將各組結果進行對比分析。結果 結核性腦膜炎患兒急性期ESAT-6、INF-γ和ADA濃度均顯著高于其恢復期水平和對照組（P＜0.05）。重癥組ESAT-6、INF-γ和ADA濃度均顯著高于輕癥組，輕癥組明顯高于對照組（P＜0.05）。單項檢測陽性率較低，三項聯合檢測能提高陽性檢出率。結論 ESAT-6、INF-γ和ADA對結核性腦膜炎患兒早期診斷具有重要的臨床價值，三者聯合檢測能減少漏診。

結核性腦膜炎 早期分泌性靶抗原-6 干擾素-γ 腺苷脫氨酶

結核性腦膜炎（結腦）是由結核分枝桿菌引起的腦膜非化膿性炎癥，其臨床癥狀不典型，但病情進展迅速，及時診斷和合理治療是降低病死率和減輕后遺癥的關鍵。隨著免疫學的發(fā)展，較多免疫因子在臨床上受到重視，腦脊液中早期分泌性靶抗原-6（ESAT-6）、干擾素-γ（INF-γ）和腺苷脫氨酶（ADA）濃度升高與結腦發(fā)病有密切聯系，現報道如下。

1　臨床資料

1.1一般資料 2010年10月至2013年9月在本院就診的患兒32例，其中男18例，女14例；年齡3個月～14歲，平均（7.5±4.0） 歲。嚴格按照《實用兒科學》第7版診斷標準［1］。對照組25例為同期住院患兒，男13例，女12例；年齡5個月～14歲，平均（7.0±4.5）歲。排除中樞神經系統(tǒng)感染性疾病。

1.2標本采集和保存 所有患兒于入院后24h內（頭痛、發(fā)熱、腦膜刺激證）無菌條件下腰椎穿刺留取腦脊液2ml，2000r/min離心10min，取上清液貯存于-20℃冰箱。結腦患兒經抗結核治療有效，臨床癥狀體征好轉，腦脊液細胞數、蛋白、糖和氯化物基本恢復正常為恢復期，此時留取腦脊液2ml，標本處理和貯存方法同上。1.3 檢測方法和試劑 采用ELISA方法檢測ESAT-6和INF-γ水平，用酶動力學終點法檢測ADA水平。ESAT-6試劑盒由上海百沃科貿有限公司提供，INF-γ試劑盒由北京晶美生物工程有限公司提供，ADA試劑盒購自北京利德曼公司。

1.4統(tǒng)計學方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件。計量資料以（x±s）表示，組間比較采用t檢驗， P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結果

2.1結腦組急性期、恢復期和對照組ESAT-6、INF-γ和ADA檢測結果 見表1。

表1　結腦組三項指標檢測結果

表1　結腦組三項指標檢測結果

注：與恢復期和對照組比較，*P＜0.01

組別nEAST-6（ng/ml）INF-γ（pg/ml）ADA（U/L）結腦組32急性期63.5±19.2*58.0±21.4*15.1±6.5*恢復期12.0±3.810.7±4.56.3±3.7對照組2510.6±2.99.2±2.35.2±2.1

2.2結腦組患者重癥組、輕癥組和對照組ESAT-6、INF-γ和ADA檢測結果 見表2。

表2　結腦組三項指標檢測結果

表2　結腦組三項指標檢測結果

注：與輕癥組比較， *P＜0.05；與對照組比較， #P＜0.05

組別nEAST-6（ng/ml）INF-γ（pg/ml）ADA（U/L）重癥組1287.1±28.6*76.5±29.3*24.7±10.8*輕癥組2048.2±15.5#42.4±18.9#10.0±6.3#對照組2510.6±2.99.2±2.35.2±2.1

2.3結腦組ESAT-6、INF-γ和ADA單獨和三項聯合檢測結果 單獨檢出陽性率較低，三項聯合檢測能提高陽性檢出率。見表3。

表3　三項指標單獨和三項聯合檢測結果比較

3　討論

結腦的傳統(tǒng)實驗室診斷主要是腦脊液常規(guī)、涂片找結核分枝桿菌和結核分枝桿菌培養(yǎng)，前者陽性率低，后者培養(yǎng)時間長，均不能滿足臨床要求。結腦發(fā)病后，在結核分枝桿菌的刺激下，腦脊液中ESAT-6、INF-γ和ADA等表達水平顯著升高，故檢測其濃度的動態(tài)改變有助于對結腦的及時診斷。

EAST-6由結核分枝桿菌在早、中期分泌并釋放于菌體外的一組蛋白，編碼EAST-6的基因序列是卡介苗傳代過程中丟失的一段基因，位于RD1區(qū)， 該基因序列在卡介苗和非致病性環(huán)境分枝桿菌中缺失，因此，EAST-6具有結核分枝桿菌特異性［2］。結核分枝桿菌直接分泌的ESAT-6濃度較低，但結核分枝桿菌被單核巨噬細胞吞噬并在細胞內生長后，ESAT-6蛋白的量會明顯增高［3］。一旦腦脊液中檢測到高濃度的EAST-6表達，其不僅代表有結核分枝桿菌感染，更表明結核分枝桿菌在體內大量繁殖。吳曉牧等［4］采用ELISA檢測腦脊液中ESAT-6，敏感度為76.09%，特異度為98.18%。

INF-γ是主要由活化的T細胞和NK細胞產生，具有調節(jié)免疫系統(tǒng)作用的一個免疫調節(jié)因子。INF-γ是一種非常重要的促炎性細胞因子，能夠促進巨噬細胞、T細胞等免疫細胞增殖和活性。ESAT-6是刺激淋巴細胞分泌INF-γ的重要抗原分子，因此檢測ESAT-6及其刺激后產生的INF-γ對結腦的診斷有重要幫助［5］。INF-γ具有雙重作用，高濃度的INF-γ加強免疫反應，對中樞神經系統(tǒng)損傷加重；另一方面，免疫有利于機體對結核分枝桿菌的清除［6］。ADA是一種巰基酶其是嘌呤核苷酸代謝的關鍵酶。體液免疫和細胞介導免疫在結腦的病理生理產生過程中起到關鍵作用，ADA活性可以用來作為鑒別診斷結核與其他感染性和非感染性疾病的指標［7］。本資料結果表明，結腦患兒急性期ESAT-6、INF-γ和ADA濃度均顯著高于其恢復期水平，亦顯著高于對照組（P＜0.05）。重癥組ESAT-6、INF-γ和ADA濃度均顯著高于輕癥組，輕癥組顯著高于對照組（P＜0.05）。單項檢測陽性率較低，三項聯合檢測能提高陽性檢出率。

綜上所述，ESAT-6、INF-γ和ADA在結腦患兒早期診斷中具有重要的應用價值，三者聯合檢測能彌補單項檢測的缺陷，提高結腦的檢出率。

1 胡亞美，吳瑞萍，主編.諸福棠實用兒科學（上冊）.第7版.北京：北京衛(wèi)生出版社，2002.759～762.

2 何俊瑛，劉士甫，朱艷霞，等.腦脊液單核細胞內EAST-6檢測對結核性腦膜炎的診斷意義. 腦與神經疾病雜志，2010，18（3）：209～212.

3 徐苗，王國治，羅永艾.ESAT-6蛋白在結核病診斷中的研究進展.國外醫(yī)學內科學分冊，2006，33（11）：481～484.

4 吳曉牧，劉麗娟，許志強，等.早期診斷結核性腦膜炎的新方法：檢測濃縮腦脊液中CFP-10和ESAT-6.中國免疫學雜志，2012，28（4）：347～350.

5 程言博，周延龍，董艷，等.ESAT-6誘導的外周血單個核細胞γ-干擾素反應對結核性腦膜炎的診斷價值.徐州醫(yī)學院學報，2012，32（7）：448～450.

6 李志惠，崔丹，趙杰，等.結核性胸膜炎胸液結核分枝桿菌特異性INF-γ與ADA的關系.河北醫(yī)藥，2013，35（21）：3232～3233.

7 陳仕檢，石勝良，張躍齡，等. 結核性和非結核性腦膜炎患者腦脊液中ADA及NSE表達水平的對比分析. 內科，2013，8（1）：16～18.

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