王毅　習(xí)國平★　劉志明

鼻內(nèi)窺鏡下鼻甲部分切除術(shù)中CTGF表達(dá)的意義

王毅習(xí)國平★劉志明

目的 探討結(jié)締組織生長因子（connective tissue growth factor，CTGF）表達(dá)和下鼻甲部分切除術(shù)后下鼻甲增生的關(guān)系。方法 通過鼻內(nèi)窺鏡手術(shù)取下鼻甲組織部分黏膜，通過免疫組化法對標(biāo)本進(jìn)行抗人CTGF抗體染色。高倍光鏡下應(yīng)用高清晰數(shù)碼相機(jī)拍照，通過ImageJ圖像分析系統(tǒng)對標(biāo)本陽性細(xì)胞進(jìn)行光密度測定。根據(jù)患者鼻腔通氣情況和經(jīng)鼻內(nèi)窺鏡檢查下鼻甲情況將術(shù)后3個月患者分為兩組，復(fù)發(fā)組為A組，改善組為B組，將兩組患者光密度檢查結(jié)果通過SPSS統(tǒng)計(jì)軟件分析。結(jié)果 A組患者標(biāo)本CTGF光密度值大于B組，P=0.0253＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 下鼻甲黏膜CTGF表達(dá)增加可能是導(dǎo)致下鼻甲部分切除術(shù)后患者鼻甲再次肥大的重要原因之一。

下鼻甲 免疫組織化學(xué) 結(jié)締組織生長因子 光密度

慢性鼻-鼻竇炎（chronic rhinosinusitis，CRS）是鼻內(nèi)窺鏡手術(shù)的主要適應(yīng)證。結(jié)締組織生長因子（connective tissue growth factor，CTGF）功能與細(xì)胞增殖，細(xì)胞的粘附、遷移、血管生成以及纖維結(jié)締組織增生等密切相關(guān)［1，2］，作者通過對鼻內(nèi)窺鏡手術(shù)中結(jié)締組織生長因子表達(dá)研究，了解局部黏膜及黏膜下腺體細(xì)胞CTGF的表達(dá)增高，導(dǎo)致術(shù)后術(shù)區(qū)纖維組織增生可能是導(dǎo)致術(shù)后竇口狹窄及鼻竇炎復(fù)發(fā)的因素之一［3］。本實(shí)驗(yàn)通過對慢性肥厚性鼻炎患者行下鼻甲外側(cè)壁切除+下鼻甲外移術(shù)，通過免疫組化法對術(shù)中提取標(biāo)本黏膜細(xì)胞CTGF含量的測定，觀察其含量與術(shù)后3個月末隨訪患者下鼻甲增生程度的關(guān)系，以了解CTGF對鼻內(nèi)鏡術(shù)后術(shù)區(qū)效果的影響。報(bào)道如下。

1　材料和方法

1.1材料 （1）標(biāo)本來源：全部標(biāo)本為2012年10月至3013年5月期間邯鄲市第三醫(yī)院耳鼻咽喉科鼻內(nèi)鏡手術(shù)所取下鼻甲標(biāo)本，為保證所測下鼻甲黏膜不受鼻竇炎患者膿性分泌物影響，選取所測下鼻甲鼻腔環(huán)境相對清潔病例72例，其中單純下鼻甲肥大患者為15例，下鼻甲肥大伴鼻中隔偏曲患者29例，下鼻甲肥大伴中鼻甲肥大患者17例，下鼻甲肥大伴上頜竇囊腫患者7例，一側(cè)下鼻甲肥大伴對側(cè)上頜竇炎患者4例。術(shù)前對患者進(jìn)行編號（1～72號）。實(shí)驗(yàn)施行單盲法。手術(shù)方法為：先提取患者所測下鼻甲部分黏膜（取下標(biāo)本后3min內(nèi)將其放入福爾馬林中固定5h），以鼻科吸切鉆切除下鼻甲外側(cè)壁黏膜，外移下鼻甲骨使總鼻道增寬。術(shù)后所有標(biāo)本石蠟包埋，切片厚度為4μm。所有標(biāo)本制備均告知患者，經(jīng)患者或家屬同意后采集。（2）設(shè)備及試劑：實(shí)驗(yàn)手術(shù)器械及內(nèi)窺鏡成像系統(tǒng)為德國STORZ成像系統(tǒng)，鼻科吸切鉆為瑞士Bine Air動力系統(tǒng)。拍攝系統(tǒng)為OLYMPUSC7070 Wz型數(shù)碼照相機(jī)。石蠟標(biāo)本全部由邯鄲市第三醫(yī)院耳鼻咽喉科提供。圖像分析系統(tǒng)為美國ImageJ圖像分析軟件。數(shù)據(jù)分析應(yīng)用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件。鼠抗人-CTGF單克隆抗體（美國Santa Cruz公司），二抗：HRP AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG（ 艾美捷科技有限公司），牛血清白蛋白（美國Equitech bio公司），抗原稀釋液為0.1%牛血清白蛋白。封閉液為1：20羊血清，修復(fù)液為胰蛋白酶（上海酶聯(lián)生物科技有限公司）。

1.2方法 （1）實(shí)驗(yàn)方法：全部術(shù)中采集標(biāo)本應(yīng)用免疫組織化學(xué)SABC法染色。（2）圖像分析：選用染色背景清晰的實(shí)驗(yàn)切片共計(jì)72張（每例患者1張），在高倍鏡（400×）下采用高清晰數(shù)碼相機(jī)進(jìn)行拍照（圖1），照相過程中，顯微鏡的光線亮度保持恒定。之后在每張所攝數(shù)碼圖片上隨機(jī)選取5例黏膜上皮細(xì)胞，利用ImageJ圖像分析系統(tǒng)分析5例黏膜上皮細(xì)胞的光

密度值，記錄并求平均值。（3）術(shù)后觀察：患者術(shù)后定期隨訪復(fù)查，囑患者鼻腔沖洗，禁用減充血劑。3個月末，根據(jù)患者陳述和檢查患者下鼻甲情況，其中下鼻甲肥大復(fù)發(fā)者13例，術(shù)后鼻甲肥大改善、自覺鼻腔通氣良好者59例。將下鼻甲肥大復(fù)發(fā)患者計(jì)為A組，其余患者計(jì)為B組。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 根據(jù)上述圖像分析所得到的結(jié)果，將樣本A與樣本B的平均光密度值通過SPSS統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件行兩樣本計(jì)量資料的t檢驗(yàn)。所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以表示，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖1　鼻內(nèi)窺鏡手術(shù)患者下鼻甲黏膜CTGF表達(dá)

2　結(jié)果

術(shù)中提取下鼻甲黏膜CTGF光密度表達(dá)平均值，A組為（85.37±4.72），B組為（72.43±6.53）（t=2.373，P=0.0253＜0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3　討論

鼻內(nèi)窺鏡手術(shù)應(yīng)用于臨床，推動鼻科學(xué)領(lǐng)域的發(fā)展。手術(shù)正在從單純的改善通氣和清除鼻腔鼻竇病灶的傳統(tǒng)術(shù)式向降低患者手術(shù)痛苦、提高生活質(zhì)量的功能性手術(shù)方向轉(zhuǎn)變。經(jīng)研究表明，鼻腔鼻竇內(nèi)的細(xì)菌表面有一層生物膜［4］，可抵抗機(jī)體的防御系統(tǒng)及頭孢類和青霉素類抗生素的作用。人們通過口服大環(huán)內(nèi)酯類抗生素和鼻用糖皮質(zhì)激素或鼻腔沖洗［5，6］，來治療鼻-鼻竇炎、鼻息肉等疾病。曾文利等［7］通過保留鉤突的功能性手術(shù)起到減少鼻內(nèi)窺鏡術(shù)后復(fù)發(fā)的效果等。

下鼻甲手術(shù)是解決鼻腔通氣的重要手術(shù)之一。主要術(shù)式包括微波法、單純下鼻甲部分切除術(shù)、黏膜下下鼻甲部分切除術(shù)等。陳傳成等［8］通過臨床實(shí)踐證實(shí)下鼻甲外側(cè)壁黏膜切除術(shù)聯(lián)合下鼻甲骨折外移術(shù)方法較以上方法為優(yōu)，下鼻甲外側(cè)壁切除后，外移空間比較充分，出血量相對較少，內(nèi)壁黏膜保存完好，既使鼻腔通氣得以改善，又不致導(dǎo)致鼻腔干燥，同時下鼻甲骨的支撐作用得以保留，最大限度的保存鼻腔正常解剖結(jié)構(gòu)。故實(shí)驗(yàn)采取了下鼻甲外側(cè)壁切除+下鼻甲外移術(shù)。

CTGF作為組織修復(fù)和增生的重要因子，在促進(jìn)細(xì)胞增殖、粘附、遷移以及胞外基質(zhì)產(chǎn)生等多方面起著重要作用。何蔚等［9］通過對半月板無血管區(qū)CTGF表達(dá)研究發(fā)現(xiàn)，CTGF在維持半月板纖維軟骨細(xì)胞的表型促進(jìn)Ⅰ型膠原、Ⅱ 型膠原和VEGF分泌中發(fā)揮著積極作用。另有研究發(fā)現(xiàn)CTGF作為TGFβ的下游效應(yīng)介質(zhì)，主要介導(dǎo)T GFβ的促纖維化作用，促進(jìn)HSC的活化和膠原纖維的合成［10］。下鼻甲外側(cè)壁切除+下鼻甲外移術(shù)后，下鼻甲外側(cè)壁會出現(xiàn)不同程度的纖維結(jié)締組織增生、血管上皮增生及胞外基質(zhì)產(chǎn)生等，并推動下鼻甲向內(nèi)側(cè)不同程度的內(nèi)移，如果增生過度，可能出現(xiàn)鼻塞癥狀再度發(fā)生。而CTGF是否和術(shù)后下鼻甲再度增生肥大并內(nèi)移相關(guān)。本資料結(jié)果顯示，局部下鼻甲黏膜上皮細(xì)胞CTGF表達(dá)強(qiáng)的患者，術(shù)后鼻甲肥大復(fù)發(fā)的可能性大于表達(dá)相對弱的患者。因此下鼻甲切除術(shù)中取下鼻甲黏膜病理進(jìn)行黏膜上皮細(xì)胞的CTGF光密度測試對術(shù)后療效預(yù)判有一定幫助。

從本實(shí)驗(yàn)可以得出，光密度值＞80.65（具體數(shù)據(jù)可在以后的實(shí)驗(yàn)中得以總結(jié)）可以考慮術(shù)后加大大環(huán)內(nèi)酯類藥物劑量和鼻腔內(nèi)激素用量，告知患者積極復(fù)查治療，在臨床上尤其是患者術(shù)后康復(fù)治療有一定的指導(dǎo)意義。

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Objective Our test is to discover the correlation between the CTGF and hyperplasia of infraturbinal after partial inferior turbinectomy. Methods Samples were collected from the infraturbinal during nasal endoscopic surgery.Through immunohistochemistry The slices were stained with anti-human CTGF.Then we take photos under the high power lens . The optical density through the ImageJ analyse system was analyzed. After 3 months after the operation，we departed the patients to 2 groups on the basis of nasal ventilation and the patients' feeling，The recurrence group name A，and the improvement group named B .The data was analyzed by SPSS statistics software. Results The intensity of CTGF in A group was higher than group B P=0.0253＜0.05. Conclusion The intensity of CTGF expression in infraturbinal increase may be one of the reason of hypertrophic inferior turbinate recurrence after nasal endoscopic surgery.

Infraturbinal Immunohistochemistry Connective tissue growth factor Optical density

邯鄲市科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（1223108151）

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