楊辛欣，潘 雪，李超英，王書丹，莊 碩

（長春中醫(yī)藥大學(xué)，長春 130117）

降低中藥斑蝥刺激性的實驗研究

楊辛欣，潘 雪，李超英*，王書丹，莊 碩

（長春中醫(yī)藥大學(xué)，長春 130117）

目的 研究降低中藥斑蝥對結(jié)直腸的刺激性的方法和技術(shù)。方法 本實驗對斑蝥的不同提取方法和采用包合技術(shù)前后斑蝥素含量進(jìn)行比較，考察其對大鼠結(jié)腸組織的刺激性作用。結(jié)果 斑蝥經(jīng)乙醇提取物中斑蝥素含量大于經(jīng)水提取物中斑蝥素含量，并且2種提取物對大鼠結(jié)腸組織均有刺激性，但是斑蝥乙醇提取物采用環(huán)糊精包合后，對大鼠結(jié)腸無刺激性作用。結(jié)論 斑蝥乙醇提取物經(jīng)環(huán)糊精包合后可以降低斑蝥的刺激性，且不影響藥效。

斑蝥;提取物;環(huán)糊精包合;結(jié)腸組織

斑蝥，能破血消髒，攻毒蝕瘡，引赤發(fā)泡，辛，熱，有大毒［1］?，F(xiàn)代研究［2-7］表明，中藥斑蝥含有斑蝥素及其衍生物等物質(zhì)，具有誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡的功效，對多種原發(fā)性癌癥具有明顯的療效。但是斑蝥素也具有較大的毒性，用量不當(dāng)能對機(jī)體產(chǎn)生較大的不良反應(yīng)，因此中醫(yī)應(yīng)用斑蝥，多采用炮制后應(yīng)用。目前，許多學(xué)者［8-10］對斑蝥炮制方法及其機(jī)理等進(jìn)行了深入研究，但是對斑蝥提取和制劑后毒副作用毒性研究較少［11］。本實驗利用中藥提取和制藥新技術(shù)，觀察炮制后的斑蝥不同提取方法、包合技術(shù)對其斑蝥素含量的影響，且對大鼠結(jié)直腸刺激性進(jìn)行比較研究，從而在保證斑蝥臨床安全應(yīng)用基礎(chǔ)上，并降低其對機(jī)體產(chǎn)生的刺激性。

1 材料

1.1 樣品 炮制斑蝥、斑蝥水提物、斑蝥醇提包合物，本研究室自制。斑蝥素對照品（購自中國藥品生物制品檢定院）。

1.2 動物 Wistar大鼠80只，雌雄各半，動物合格證號:SCXK（吉）2010-0001，體質(zhì)量220 ～240 g。

1.3 儀器 1260安捷倫高效液相色譜儀（上海天美科學(xué)儀器有限公司）;KQ3200DB型速控超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;AL204電子天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司。

2 方法

2.1 炮制方法 取凈斑蝥與大米拌炒，至米呈黃棕色，取出，除去頭、翅、足。每100 kg斑蝥，用米20 kg。

2.2 提取方法

2.2.1 乙醇提取方法 取炮制斑蝥適量，用10倍量75%乙醇提取3次，每次1.5 h，合并濾液。50℃低溫?fù)]干，研成粉末，備用。

2.2.2 水提取方法 取炮制斑蝥適量，用10倍量的純凈水提取3次，每次1.5 h，合并濾液，50℃低溫?fù)]干，研成粉末，備用。

2.3 乙醇提取和β-環(huán)糊精包合方法 本實驗取上述斑蝥乙醇提取物，加入適量的β-環(huán)糊精和蒸餾水，保持70℃溫度，磁力攪拌400 r/min，4 h。50℃低溫?fù)]干，研成粉末，備用。

2.4 含量測定 采用測定方法:色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-水（23∶77）為流動相，檢測波長為230 nm，柱溫30℃，流速1 mL/min，進(jìn)樣量10 μL。理論板數(shù)按斑蝥素峰計算應(yīng)不低于3 000。

斑蝥素對照品的配制:精密稱量斑蝥素對照品適量，置容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得斑蝥素對照品儲備液。其濃度為2.14 mg/mL，備用。

供試品的制備:分別取每種供試品3分，每分0.5 g，置于錐形瓶中，加氯仿 20 mL，超聲 20 min，2次，過濾，合并濾液，用氯仿少量多次洗滌容器。50℃水浴揮干，加甲醇溶解，定容至2 mL容量瓶，過0.22 μm濾膜，備用。測定結(jié)果見表1。

表1 斑蝥提取和研制樣品中斑蝥素含量測定結(jié)果（n=3）

2.5 刺激性實驗方法 參照《中藥藥理研究方法學(xué)》［12］進(jìn)行。

2.5.1 單次給藥刺激性試驗 禁食不禁水36 h后，取40只雌雄各半大鼠，隨機(jī)分為斑蝥水提組、斑蝥乙醇提組、斑蝥乙醇提并包合組、空白組，斑蝥的用量按《中華人民共和國藥典》［13］斑蝥標(biāo)準(zhǔn)，并且各種斑蝥的用量相同?？瞻捉M給予同體積的生理鹽水。分別經(jīng)直腸給予各組藥液0.2 mL，至結(jié)腸8 cm處。于24 h后處死大鼠，取出直腸組織，觀察有無充血、水腫、黏膜下出血等現(xiàn)象。按局部黏膜刺激性反應(yīng)分級標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評分，并根據(jù)黏膜刺激性強(qiáng)度評價標(biāo)準(zhǔn)，按平均分值判定受試藥物的黏膜刺激性強(qiáng)度;如有變化應(yīng)作病理組織學(xué)檢查，并與空白對照組比較。

2.5.2 多次給藥刺激性試驗 禁食不禁水36 h后，取40只雌雄各半大鼠隨機(jī)分為斑蝥水提組、斑蝥乙醇提組、斑蝥乙醇提并包合組、空白組。1次/d，分別經(jīng)直腸給藥各組藥液0.2 mL（按照1.08 mL/kg），連續(xù)7 d?？瞻捉M給藥同體積的生理鹽水。

末次給受試藥物后1 h處死動物，觀察指標(biāo)和要求同單次刺激性試驗。

3 結(jié)果

3.1 單次給藥刺激性試驗結(jié)果 斑蝥水提組、斑蝥乙醇提組、斑蝥乙醇提并包合組大鼠結(jié)腸組織均正常，黏膜刺激性評分為0分（形態(tài)無改變或無明顯改變），分別證明斑蝥水提物、斑蝥乙醇提物、斑蝥乙醇提并包合物對大鼠結(jié)腸組織無刺激性。

3.2 多次給藥刺激性試驗結(jié)果 斑蝥乙醇提取組對大鼠結(jié)腸具有強(qiáng)刺激性，結(jié)腸黏連、黏膜水腫、充血嚴(yán)重，并且大鼠體質(zhì)量有明顯下降;水提取組大鼠，大部分狀態(tài)良好，尤其雌性大鼠臟器與結(jié)腸均無異常，但有2只雄性大鼠結(jié)腸末端有輕微黏連，1只雄性大鼠腸組織充血水腫，1只狀態(tài)不好、體質(zhì)量明顯減輕，斑蝥水提物對雄性大鼠有輕度刺激性;而乙醇提取并包合組大鼠均狀態(tài)良好，臟器與結(jié)腸均無異常。

4 小結(jié)

多次給藥刺激性試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn):炮制斑蝥乙醇提取物對大鼠結(jié)腸具有強(qiáng)刺激性，結(jié)腸黏連、黏膜水腫、充血嚴(yán)重，并且大鼠體質(zhì)量有明顯下降。而炮制斑蝥經(jīng)過水提取不但斑蝥素提取含量低，而且對雄性大鼠有一定的刺激性。將炮制斑蝥乙醇提取物進(jìn)行環(huán)糊精包合，結(jié)果對大鼠臟器與結(jié)腸均無異常，大鼠狀態(tài)良好，顯著降低了斑蝥的刺激性，且保留其藥效成分。

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Reducing of Chinese medicine Mylabris stimulation

YANG Xinxin，PAN Xue，LI Chaoying*，WANG Shudan，ZHUANG Shuo
（Changchun University of Chinese Medicine，Changchun 130117，China）

ObjectiveExperimental study on reducing of Mylabris stimulation.MethodsThe experiment of Mylabris different extracting method and the inclusion technology cantharidin content before and after comparison，and investigation of its irritating effect on rat colon tissue.ResultsCantharidin content in Mylabris approved by ethanol extract than the water extract，and both extract had irritation on rats colon tissue，but Mylabris ethanol extracts using cyclodextrin inclusion had no irritation on rats colon tissue.ConclusionMylabris ethanol extract by cyclodextrin inclusion irritability tends to decrease，and does not affect the efficacy.Therefore，this experimental study for the clinical safety and application of Mylabris provided the scientific basis and reference.

Mylabris;extraction;inclusion;colon tissue

R285.5

A

2095－6258（2015）04－0688－03

10.13463/j.cnki.cczyy.2015.04.010

吉林省科技發(fā)展計劃項目（20120927）。

楊辛欣，碩士，講師，主要從事炮制與中藥制劑方向研究。

李超英，博士，教授，電話－13504417829，電子信箱－ chaoying li@126.com

2014－11－05）