黃貴蓮　黃滔　曾華哲　金鑫

[摘要]目的評(píng)價(jià)注射用頭孢替坦二鈉的安全性。方法對(duì)注射用頭孢替坦二進(jìn)行了過(guò)敏性、刺激性及溶血性試驗(yàn)。結(jié)果豚鼠全身主動(dòng)過(guò)敏性試驗(yàn)及大鼠被動(dòng)皮膚過(guò)敏性試驗(yàn)未見(jiàn)明顯過(guò)敏反應(yīng)，兔耳緣靜脈及周圍組織均未見(jiàn)明顯刺激性反應(yīng)，未引起新西蘭兔股四頭肌刺激性病理變化，體外溶血試驗(yàn)無(wú)溶血和凝集現(xiàn)象。結(jié)論該藥相關(guān)安全性檢測(cè)結(jié)果符合新藥申報(bào)要求，可供靜脈或肌肉注射給藥。

[關(guān)鍵詞]注射用頭孢替坦二鈉；安全性評(píng)價(jià)；過(guò)敏性；刺激性；溶血性

[中圖分類號(hào)]R96

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]B

[文章編號(hào)]2095-0616（2016）23-52-05

頭孢替坦二鈉對(duì)革蘭陰性菌活性較強(qiáng)，臨床上多用于易感菌所致腹內(nèi)、皮膚軟組織感染和尿路、下呼吸道及婦產(chǎn)科等感染。本品最早由日本山之內(nèi)制藥株式會(huì)社研制，于80年代末首先在日本上市，后授權(quán)瑞典阿斯利康在日本以外的國(guó)家上市，商品名有Cefotan和Apatef等。目前本品還未進(jìn)入國(guó)內(nèi)。本文按照藥品注冊(cè)申報(bào)要求，依照化學(xué)藥物刺激性、過(guò)敏性和溶血性研究技術(shù)指導(dǎo)原則要求，對(duì)我司研制的注射用頭孢替坦鈉（cefotetansodium for injection）進(jìn)行了安全性研究，考察本品是否符合靜脈射藥物的安全性標(biāo)準(zhǔn)，為進(jìn)一步申報(bào)新藥提供研究數(shù)據(jù)。

1.材料與方法

1.1材料

1.1.1藥品與試劑注射用頭孢替坦二鈉（受試物），1g，瓶，批號(hào)S131001，由麗珠集團(tuán)麗珠醫(yī)藥研究所生產(chǎn)；同類上市對(duì)照品，2g，瓶，批號(hào)SPl254，生產(chǎn)廠家為APP Phramaceuticals，LLC；白蛋白，1g/瓶，批號(hào)120423，由上海伯奧生物科技有限公司生產(chǎn)。

1.1.2動(dòng)物Hartley豚鼠，雌雄兼用，體重300～350g，來(lái)源于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，合格證號(hào)SCXK（京）2012-0001；SD大鼠，雌雄兼用，體重200～250g，來(lái)源于湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，合格證號(hào)SCXK（湘）2011-0003；新西蘭兔，雌雄兼用，體重2.0～2.5kg，來(lái)源于廣州市花都區(qū)花東信華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖場(chǎng)，合格證號(hào)SCXK（粵）2009-0023。

1.2研究方法

1.2.1豚鼠全身主動(dòng)過(guò)敏試驗(yàn)試驗(yàn)用Hartley豚鼠36只，按性別和體重隨機(jī)分為6組，每組6只動(dòng)物，雌雄兼用。設(shè)陰性對(duì)照組（0.9%氯化鈉注射液）、陽(yáng)性對(duì)照組（1%白蛋白溶液）、受試物高、低劑量組和同類上市對(duì)照品高、低劑量組。致敏期受試物高、低劑量分別為4.65、2.235mg/只（采用等效劑量折算，約相當(dāng)于臨床靜脈注射日劑量6000mg的1/40和1/80倍），腹腔注射給藥，給藥體積為0.5mL/只，隔日1次，共3次。各組動(dòng)物分別于末次腹腔給藥后第10天進(jìn)行靜脈快速激發(fā)，給藥體積1.5 mL/只，各組動(dòng)物激發(fā)期劑量為致敏劑量的3倍，根據(jù)過(guò)敏反應(yīng)發(fā)生率和發(fā)生程度判斷其全身主動(dòng)過(guò)敏性。

1.2.2大鼠被動(dòng)皮膚過(guò)敏試驗(yàn)致敏期選取SD大鼠24只，按體重和性別隨機(jī)分為6組，每組4只，雌雄各半，即陰性對(duì)照組（0.9%氯化鈉注射液）、陽(yáng)性對(duì)照組（1%白蛋白溶液）、受試物高、低劑量組和同類上市對(duì)照品高、低劑量組。受試物組致敏及激發(fā)劑量相同，高、低劑量分別為216、108mg/只（采用等效劑量折算，約相當(dāng)于臨床靜脈注射日劑量6000mg的2和1倍）。各組腹腔注射佐劑及相應(yīng)藥物，給藥體積為0.5mL/只，隔日1次，共3次。于末次腹腔給藥后10d腹主動(dòng)脈采血，制備抗體血清。試驗(yàn)激發(fā)期，另取SD大鼠48只，按體重和性別隨機(jī)分為6組，每組8只，雌雄各半，并將各受試物抗體血清以1：2、1：4、1：8的稀釋度稀釋，依次在動(dòng)物背部皮內(nèi)注射各對(duì)應(yīng)組的抗體血清0.1mL。被動(dòng)致敏48h后進(jìn)行單次靜脈給藥激發(fā)，30rain后處死動(dòng)物，剪取背部皮膚，鋪平后測(cè)量皮膚內(nèi)層斑點(diǎn)直徑的大小，直徑在5mm以上者判定為陽(yáng)性。

1.2.3家兔血管刺激性試驗(yàn)取12只健康新西蘭兔，設(shè)2組，分別為受試物組和同類上市對(duì)照品組，每組6只，雌雄各半。采用同體左右側(cè)耳自身對(duì)比法，其中動(dòng)物左側(cè)耳緣靜脈給予受試物或同類上市對(duì)照品，給藥濃度為95mg/mL（相當(dāng)于臨床靜脈給藥濃度），給藥體積為3mL/kg，給藥速度約3mL/min，右側(cè)給予等體積的0.9%氯化鈉注射液作對(duì)照。每天給藥1次，共7d。末次給藥后48h每組剖檢3例動(dòng)物。余下動(dòng)物于末次給藥后14d進(jìn)行剖檢。最終根據(jù)肉眼觀察和病理檢查的結(jié)果進(jìn)行綜合判斷。

1.2.4家兔肌肉刺激性試驗(yàn)取12只健康新西蘭兔，設(shè)2組，分別為受試物組和同類上市對(duì)照品組，每組6只，雌雄各半。各組動(dòng)物左側(cè)股四頭肌分別給予受試物或同類上市對(duì)照品，給藥濃度均為400mg/mL（相當(dāng)于臨床肌肉注射給藥濃度），給藥體積均為1.0mL/側(cè)，右側(cè)給予等體積的0.9%氯化鈉注射液作對(duì)照，每天給藥1次，共7d。末次給藥后48h每組剖檢3例動(dòng)物，余下動(dòng)物于末次給藥后14d進(jìn)行剖檢。最終根據(jù)肉眼觀察和病理檢查的結(jié)果進(jìn)行綜合判斷。

1.2.5溶血性試驗(yàn)

向盛有2%紅血球混懸液的各支藥液管中分別加入不等量的受試物，給藥濃度為95mg/mL，混勻后置于恒溫箱中溫育，開始每隔15min觀察一次，1h后，每隔1h觀察一次，持續(xù)觀察3h。結(jié)果判定：當(dāng)陰性對(duì)照管無(wú)溶血和凝聚發(fā)生，陽(yáng)性對(duì)照管有溶血發(fā)生時(shí)，若受試物管中的溶液在3h內(nèi)不產(chǎn)生溶血和凝聚，則受試物可以注射使用；若受試物管中的溶液在3h內(nèi)產(chǎn)生溶血和（或）凝聚，則受試物不宜注射使用。

2.結(jié)果

2.1豚鼠全身主動(dòng)過(guò)敏試驗(yàn)

試驗(yàn)期間，陰性對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、受試物高、低劑量組和同類上市對(duì)照品高、低劑量組的各例動(dòng)物外觀特征、行為活動(dòng)、呼吸及糞便性狀等均未見(jiàn)明顯異常。

激發(fā)反應(yīng)情況：陰性對(duì)照組，2/6例豚鼠出現(xiàn)排尿現(xiàn)象，余下4/6例未出現(xiàn)明顯反應(yīng)。陽(yáng)性對(duì)照組，6/6例豚鼠出現(xiàn)豎毛、呼吸急促、排尿、排糞、呼吸困難、紫癜、步態(tài)不穩(wěn)、喘息、痙攣和潮式呼吸等不同程度的反應(yīng)癥狀，最后全部動(dòng)物均死亡。受試物高劑量組，2/6例豚鼠出現(xiàn)排尿或排糞，2/6例豚鼠出現(xiàn)排尿和排糞現(xiàn)象，余下2/6例未出現(xiàn)明顯反應(yīng)。受試物低劑量組，2/6例豚鼠出現(xiàn)排尿、排糞現(xiàn)象，2/6例豚鼠排糞，余下2/6例未見(jiàn)明顯異常。同類上市對(duì)照品高劑量組，2/6例豚鼠出現(xiàn)排尿、排糞，1/6例豚鼠排糞，余下3/6例未見(jiàn)明顯異常。同類上市對(duì)照品低劑量組，2/6例豚鼠出現(xiàn)排尿、排糞，1/6例豚鼠排尿，余下3/6例未見(jiàn)明顯異常。

單次靜脈快速給藥情況：激發(fā)時(shí)，受試物高、低劑量組和同類上市對(duì)照品高、低劑量組均選取2例未致敏豚鼠進(jìn)行單次靜脈快速給藥。受試物高劑量組，1/2例豚鼠未見(jiàn)明顯異常，1/2例豚鼠排尿。受試物低劑量組，1/2例豚鼠未見(jiàn)明顯異常，1/2例豚鼠出現(xiàn)排尿、排糞。同類上市對(duì)照品高劑量組，1/2例豚鼠排尿，1/2例豚鼠未見(jiàn)明顯異常。同類上市對(duì)照品低劑量組，1/2例豚鼠排糞，1/2例豚鼠未見(jiàn)明顯異常。

2.2大鼠被動(dòng)皮膚過(guò)敏試驗(yàn)

第一批動(dòng)物，從致敏第4天起，肉眼可見(jiàn)各組動(dòng)物均出現(xiàn)腹部脹大的現(xiàn)象，但各組動(dòng)物的行為活動(dòng)、呼吸及糞便性狀等均未見(jiàn)明顯異常；各組動(dòng)物腹主動(dòng)脈采血時(shí)可見(jiàn)腹部積液，肝、胃、脾、腎及腸有不同程度的相互粘連。第二批動(dòng)物，各組動(dòng)物的外觀特征、行為活動(dòng)、呼吸及糞便性狀等均未見(jiàn)明顯異常。詳細(xì)試驗(yàn)結(jié)果如表1所示。

2.3家兔血管刺激性試驗(yàn)

試驗(yàn)期間各組每例動(dòng)物外觀特征、行為活動(dòng)、呼吸及糞便性狀等均未見(jiàn)明顯異常。末次給藥后14d，兩組各例動(dòng)物左右側(cè)進(jìn)針和給藥部位血管輪廓較清晰，兔耳厚薄均勻，均未見(jiàn)明顯改變。剖檢的兩組各例動(dòng)物左右側(cè)兔耳各段皮膚、附件和軟骨結(jié)構(gòu)完好，未見(jiàn)引起各組兔耳靜脈血管及周圍組織刺激性病理改變。

2.4家兔肌肉刺激性試驗(yàn)

試驗(yàn)期間各組每例動(dòng)物外觀特征、行為活動(dòng)、呼吸及糞便性狀等均未見(jiàn)明顯異常。給藥前、末次給藥后24h、48h和14d分別對(duì)各例動(dòng)物左右側(cè)給藥部位進(jìn)行肉眼觀察，均未見(jiàn)明顯異常。

2.4.1第一批剖檢動(dòng)物（末次給藥后48h）受試物組：3/3例動(dòng)物（動(dòng)物編號(hào)F1、F2、F3）左側(cè)（給藥側(cè)）注射部位深層肌肉均出現(xiàn)一塊暗紅色斑塊且質(zhì)硬，其中F1還伴有乳黃色斑塊，此異常現(xiàn)象的范圍約為4.0era×1.5cm×0.8cm至6.0cm×1.7cm×1.0cm，肌肉刺激性分級(jí)均為3分；上述3/3例動(dòng)物右側(cè)（陰性對(duì)照側(cè)）注射部位肌肉均未見(jiàn)明顯異常變化，肌肉刺激性分級(jí)均為0分。鏡檢觀察3/3例動(dòng)物（動(dòng)物編號(hào)F1、F2、F5）左側(cè)異常部位肌肉，均出現(xiàn)局部肌組織損傷，肌纖維變細(xì)小，斷裂不連續(xù)，排列疏松，間隙明顯增寬，間質(zhì)水腫伴大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，間質(zhì)內(nèi)亦可見(jiàn)紅細(xì)胞，其中1例動(dòng)物（F5）局部間質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)嗜堿性顆粒物；上述3例動(dòng)物右側(cè)股四頭肌注射部位未見(jiàn)異常變化。

同類上市對(duì)照品組：3/3例動(dòng)物（動(dòng)物編號(hào)G1、G2、G3）左側(cè)（給藥側(cè)）注射部位深層肌肉均出現(xiàn)一塊暗紅色斑塊且質(zhì)硬，其中G1還伴有乳黃色斑塊，此異?，F(xiàn)象的范圍約為3.0era×2.0era×].00re至5.0cm×1.5cm×0.9cm，肌肉刺激性分級(jí)均為3分；上述3/3例動(dòng)物右側(cè)（陰性對(duì)照側(cè)）注射部位肌肉均未見(jiàn)明顯異常變化，肌肉刺激性分級(jí)均為O分。鏡檢觀察3/3例動(dòng)物（動(dòng)物編號(hào)G1、G2、G5）左側(cè)異常部位肌肉，均出現(xiàn)局部肌組織損傷，肌纖維變細(xì)小，斷裂不連續(xù)，排列疏松，肌纖維間隙明顯增寬，間質(zhì)水腫伴大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，間質(zhì)內(nèi)亦可見(jiàn)紅細(xì)胞，其中2例動(dòng)物（G1、G2）局部間質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)紅細(xì)胞及嗜堿性顆粒物；上述3例動(dòng)物右側(cè)股四頭肌注射部位未見(jiàn)異常變化。

2.4.2第二批剖檢動(dòng)物（末次給藥后14d）受試物組：3/3例動(dòng)物（動(dòng)物編號(hào)F3、F4、F6）左側(cè)（給藥側(cè)）注射部位深層肌肉均出現(xiàn)一塊乳黃色斑塊，此異常現(xiàn)象的范圍約為2.3cm×1.0cm×0.5cm至4.5cm×0.8cm×0.4cm，肌肉刺激性分級(jí)均為3分；上述3/3例動(dòng)物右側(cè)（陰性對(duì)照側(cè)）注射部位肌肉均未見(jiàn)明顯異常變化，肌肉刺激性分級(jí)均為0分。鏡檢觀察3/3例動(dòng)物（動(dòng)物編號(hào)F3、F4、F6）左側(cè)異常部位肌肉，均出現(xiàn)局部肌組織損傷，肌纖維變細(xì)小，斷裂不連續(xù)，排列疏松，間隙明顯增寬，間質(zhì)內(nèi)纖維組織增生伴大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，其中1例動(dòng)物（F6）局部間質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)嗜堿性顆粒物；上述3例動(dòng)物右側(cè)股四頭肌注射部位未見(jiàn)異常變化。

同類上市對(duì)照品組：3/3例動(dòng)物（動(dòng)物編號(hào)G3、G4、G6）左側(cè)（給藥側(cè)）注射部位深層肌肉均出現(xiàn)一塊乳黃色斑塊，此異?，F(xiàn)象的范圍約為1.8cm×0.6cm×0.4cm至2.3cm×0.9cm×0.4cm，肌肉刺激性分級(jí)均為3分；上述3/3例動(dòng)物右側(cè)（陰性對(duì)照側(cè)）注射部位肌肉均未見(jiàn)明顯異常變化，肌肉刺激性分級(jí)均為0分。鏡檢觀察3/3例動(dòng)物（動(dòng)物編號(hào)G3、G4、G6）左側(cè)異常部位肌肉，均出現(xiàn)局部肌組織損傷，肌纖維變細(xì)小，斷裂不連續(xù)，排列疏松，間隙明顯增寬，間質(zhì)內(nèi)纖維組織增生伴大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，間質(zhì)內(nèi)亦可見(jiàn)紅細(xì)胞，其中2例動(dòng)物（G1、G2）局部間質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)紅細(xì)胞及嗜堿性顆粒物；上述3例動(dòng)物右側(cè)股四頭肌注射部位未見(jiàn)異常變化。

2.5溶血性試驗(yàn)

陰性對(duì)照管各支藥液管在3h內(nèi)均未見(jiàn)溶血或紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象。陽(yáng)性對(duì)照管在15min內(nèi)即出現(xiàn)溶血現(xiàn)象。受試物的各支藥液管在3h內(nèi)均未見(jiàn)溶血或紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象。同類上市對(duì)照品的各支藥液管在3h內(nèi)均未見(jiàn)溶血或紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象。詳細(xì)試驗(yàn)結(jié)果如表2所示。

3.討論

注射藥物的安全性評(píng)價(jià)是藥物臨床試驗(yàn)的重要研究?jī)?nèi)容，本文對(duì)受試藥物注射用頭孢替坦二鈉的溶血性、血管刺激性及過(guò)敏性進(jìn)行了系統(tǒng)研究。并且，在文獻(xiàn)報(bào)道的基礎(chǔ)上，還增加了對(duì)家兔肌肉刺激性試驗(yàn)研究。研究結(jié)果表明：注射用頭孢替坦二鈉不會(huì)引起豚鼠全身主動(dòng)過(guò)敏和SD大鼠被動(dòng)皮膚過(guò)敏，也未見(jiàn)溶血或紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象，不會(huì)引起血管變形等刺激反應(yīng)；雖然本品對(duì)家兔股四頭肌產(chǎn)生一定的肌肉刺激反應(yīng)，但與同類上市對(duì)照品的肌肉刺激性程度相當(dāng)，并且在停藥后會(huì)逐漸恢復(fù)。綜上所述，注射用頭孢替坦二鈉在臨床上可以靜脈或肌肉給藥的途徑給患者用藥。