劉曉燕，周靈玲，胡曉蕾（麗水市中心醫(yī)院，浙江 麗水323000）

溫度與抗凝劑對(duì)假性血小板減少的影響

劉曉燕，周靈玲，胡曉蕾
（麗水市中心醫(yī)院，浙江 麗水323000）

目的探討溫度和抗凝劑對(duì)假性血小板減少（PTCP）的影響。方法 選擇確定為假性血小板減少的6例，每例采2管EDTA抗凝血（E1，E2）和1管枸櫞酸鈉抗凝血（C1），其中E2管采血后置37℃水浴孵育15分鐘后置室溫，其余兩管（E1和C1）采血后直接置室溫測(cè)，在采血即時(shí)及15、30、45、60、90、120分鐘后用儀器計(jì)數(shù)各管血小板數(shù)，比較不同抗凝劑在室溫下，以及統(tǒng)一抗凝劑（EDTA抗凝）在37℃水浴15分鐘后和在室溫下的血小板計(jì)數(shù)差異。結(jié)果EDTA抗凝劑和枸櫞酸鈉抗凝劑在各時(shí)間點(diǎn)血小板計(jì)數(shù)值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）；在15分鐘內(nèi)，兩組血小板計(jì)數(shù)均維持在真值的80%左右；EDTA抗凝血在37℃水浴后和在室溫下直接測(cè)定比較，15分鐘內(nèi)兩者均可以將血小板計(jì)數(shù)保持在真值的80%以上，超過(guò)15分鐘，在室溫下測(cè)定的血小板計(jì)數(shù)下降非常明顯（P＜0.05或P＜0.01），而37℃水浴后的血小板計(jì)數(shù)則可以在2小時(shí)內(nèi)計(jì)數(shù)保持真值的80%以上。結(jié)論對(duì)于不能即時(shí)檢測(cè)、手工檢測(cè)以及冬季送檢的標(biāo)本，在37℃水浴15分鐘后再測(cè)定可以避免PTCP的發(fā)生。

假性血小板減少；血小板聚集；EDTA；枸櫞酸鈉；溫度

假性血小板減少（pseudothrombocytopenia，PTCP）是由于血小板聚集導(dǎo)致儀器計(jì)數(shù)血小板數(shù)減少的假象，由Mant等［1］1975年首次報(bào)道。國(guó)內(nèi)大部分報(bào)道認(rèn)為PTCP為EDTA依賴性［2-3］，改用枸櫞酸鈉抗凝標(biāo)本即可排除血小板聚集的影響而得到準(zhǔn)確的計(jì)數(shù)，這一方法甚至被應(yīng)用于臨床，但作者在工作中發(fā)現(xiàn)枸櫞酸鈉抗凝血血小板易聚集，并且冬天多見(jiàn)。國(guó)外近年來(lái)也有非抗凝劑依賴性PTCP的病例報(bào)道［4］。本文重點(diǎn)觀察比較EDTA、枸櫞酸鈉不同抗凝劑及不同溫度對(duì)PTCP的影響，以探討較準(zhǔn)確的血小板計(jì)數(shù)方法。

1　資料與方法

1.1一般資料選擇2012年12月～2014年2月在本院檢查血常規(guī)、標(biāo)本經(jīng)涂片染色鏡檢發(fā)現(xiàn)血小板聚集、排除抽血不當(dāng)?shù)仍?，確認(rèn)為假性血小板減少的病例6例。所有觀察對(duì)象在知情同意原則下參與本次測(cè)試。

1.2方法

1.2.1儀器與試劑Beckman Coulter LH750全自

動(dòng)血細(xì)胞分析儀及配套試劑和質(zhì)控品；OLYMPUS顯微鏡；K2EDTA和枸櫞酸鈉抗凝管由BD公司提供。

1.2.2實(shí)驗(yàn)方法每例分別采集EDTA抗凝血2管（E1，E2）、枸櫞酸鈉抗凝血（1:9）1管（C1），采血后用儀器即時(shí)（5分鐘內(nèi)）檢測(cè)三管的血小板數(shù)，后將E1，C1靜置于25℃，E2置37℃水浴15分鐘后，分別于采血后15、30、45、60、90、120分鐘儀器計(jì)數(shù)血小板數(shù)，并同時(shí)推片染色鏡檢血小板聚集情況及手工計(jì)數(shù)血小板。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)。

3　結(jié)果

2.1總體情況采血后2小時(shí)內(nèi)，室溫靜置的EDTA和枸櫞酸鈉抗凝血血小板計(jì)數(shù)越來(lái)越少，鏡下聚集越來(lái)越明顯，在15分鐘內(nèi)血小板計(jì)數(shù)下降最快，但還基本維持在正常參考范圍內(nèi)；37℃水浴15分鐘后置室溫的EDTA抗凝血血小板計(jì)數(shù)穩(wěn)定在正常參考范圍內(nèi) （＞100×109/L）。詳見(jiàn)圖1。

2.2抗凝劑的影響對(duì)6例PTCP患者進(jìn)行分析，以血小板手工計(jì)數(shù)值為真值，計(jì)算血小板比值（血小板數(shù)比值=實(shí)際測(cè)得血小板數(shù)/真值），可見(jiàn)各時(shí)間點(diǎn)兩種抗凝劑抗凝血的儀器血小板計(jì)數(shù)值無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；在15分鐘內(nèi)，兩組血小板計(jì)數(shù)均維持在真值的80%左右，詳見(jiàn)表1。

圖1　血小板隨時(shí)間變化關(guān)系圖

表1　室溫下EDTA與枸櫞酸鈉對(duì)血小板計(jì)數(shù)影響的比較（±s，%）

表1　室溫下EDTA與枸櫞酸鈉對(duì)血小板計(jì)數(shù)影響的比較（±s，%）

抗凝劑　n　15min　30min　45min　60min　90min　120min EDTA　6　0.85±0.15　0.71±0.21　0.54±0.23　0.35±0.21　0.28±0.21　0.21±0.18枸櫞酸鈉　6　0.78±0.16　0.58±0.16　0.39±0.16　0.33±0.12　0.33±0.15　0.33±0.15

2.3溫度的影響EDTA抗凝血在37℃水浴孵育15分鐘后再進(jìn)行血小板計(jì)數(shù)，可以在2小時(shí)內(nèi)使計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性保持在真值的80%以上，而同樣經(jīng)EDTA抗凝血在室溫中進(jìn)行血小板檢測(cè)，則只有在抽血后15分鐘內(nèi)可以將計(jì)數(shù)保持在真值的80%以上，超過(guò)15分鐘后，與37℃水浴后比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01），詳見(jiàn)表2。

表2EDTA抗凝劑在37℃水浴后與直接室溫中對(duì)血小板計(jì)數(shù)的影響（%）

與室溫比較*P＜0.05，**P＜0.01

3　討論

據(jù)國(guó)際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（ICSH）1993年的建議，血細(xì)胞計(jì)數(shù)用EDTA鹽抗凝。因此，引起假性血小板減少的報(bào)道最多見(jiàn)的是EDTA依賴性，但是EDTA假性血小板減少的機(jī)制目前還不清楚，探索PTCP的原因?qū)τ赑TCP的及時(shí)發(fā)現(xiàn)、解決以及臨床意義的研究均大有裨益。

本文6例PTCP患者在血液離體后，血小板發(fā)生聚集，血小板計(jì)數(shù)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸降低至100×109/L以下。不同的抗凝劑 （EDTA和枸櫞酸鈉）在室溫下，實(shí)驗(yàn)顯示各時(shí)間點(diǎn)血小板計(jì)數(shù)值無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，且在15分鐘內(nèi)，兩組血小板計(jì)數(shù)均維持在真值的80%左右；而將經(jīng)EDTA抗凝血分別置于37℃水溫和室內(nèi)溫度中，發(fā)現(xiàn)經(jīng)過(guò)37℃水浴后的血小板計(jì)數(shù)在2個(gè)小時(shí)內(nèi)血小板計(jì)數(shù)都可以保持真值的80%，而直接放置室內(nèi)的血小板計(jì)數(shù)則只在15分鐘內(nèi)可以保持真值的80%，兩種溫度下比較，除了15分鐘內(nèi)血小板計(jì)數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其余時(shí)間段，室溫組血小板降低明顯，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。

本次檢測(cè)結(jié)果顛覆了“改用枸櫞酸鈉抗凝標(biāo)本即可排除血小板聚集的影響而得到準(zhǔn)確的計(jì)數(shù)”這一結(jié)論，提示用枸櫞酸鈉抗凝來(lái)解決PTCP的方法并不準(zhǔn)確。血液標(biāo)本在抽血15分鐘內(nèi)血小板計(jì)數(shù)尚可以維持在真值的80%以上，但超過(guò)15分鐘即可能造成PTCP，對(duì)于不能即時(shí)檢測(cè)、手工檢測(cè)以及冬季送檢的標(biāo)本，在37℃水浴15分鐘后再測(cè)定可以避免PTCP的發(fā)生。遺憾的是，本文沒(méi)有探討經(jīng)枸櫞酸鈉抗凝血在不同溫度下的血小板計(jì)數(shù)情況，所以結(jié)論不夠全面，需要進(jìn)一步探討。

［1］ Mant MJ，Doery JCG，Gauldie J，et al.Pseudothrombocytopenia due to platelet aggregation and degranulation in blood chelated in EDTA.Scand J Hematol，1975，15（3）:161

［2］張建萍.EDTA依賴性假性血小板減少癥及檢測(cè)方法分析.重慶醫(yī)學(xué)，2010，39（20）:2782

［3］李芳，杜宗孝.乙二胺四乙酸二鈉相關(guān)假性血小板減少現(xiàn)象及糾正方法分析.寧夏醫(yī)學(xué)雜志，2011，33（2）:169

［4］KurataY，HayashiS，JouzakiK，etal.Fourcasesof pseudothrombocytopenia due to platelet cold agglutinins. Rinsho Ketsueki，2006，47（8）:78