李玉芳，沈文香，楊 蘊(yùn)，陳長(zhǎng)廣，付愛(ài)林

（昆山市第一人民醫(yī)院腫瘤二科，江蘇215300）

組織芯片檢測(cè)胃癌組織中TOB1蛋白的表達(dá)及臨床意義

李玉芳，沈文香，楊 蘊(yùn)，陳長(zhǎng)廣，付愛(ài)林

（昆山市第一人民醫(yī)院腫瘤二科，江蘇215300）

目的 利用胃癌組織芯片研究胃腺癌及癌旁組織中ErbB2轉(zhuǎn)錄因子1（TOB1）的表達(dá)及臨床意義。方法 通過(guò)免疫組織化學(xué)法檢測(cè)含有90對(duì)胃腺癌及其癌旁組織的組織芯片中TOB1表達(dá)情況。結(jié)果 TOB1在胃癌組織中呈低表達(dá)為75.6%（68/90）、高表達(dá)為24.4%（22/90）；癌旁組織中TOB1呈低表達(dá)為14.4%（13/90）、高表達(dá)為85.6%（77/90）；TOB1在胃癌組織中表達(dá)較癌旁組織明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。TOB1表達(dá)于胃癌組織及癌旁組織的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中。TOB1在胃癌組織及癌旁組織細(xì)胞核中的表達(dá)水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；就細(xì)胞質(zhì)而言，TOB1在胃癌組織中呈低表達(dá)為 82.2%（74/90）、高表達(dá)為17.8%（16/90）；癌旁組織中 TOB1呈低表達(dá)，為 22.2%（20/90）、高表達(dá)為77.8%（70/90）；TOB1在胃癌組織細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)較癌旁組織明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），并與腫瘤大小、分化程度、浸潤(rùn)深度、腫瘤分期明顯相關(guān)（P＜0.05）。結(jié)論 TOB1在胃癌組織細(xì)胞質(zhì)中的低表達(dá)，并且與腫瘤分化、分期有關(guān)。TOB1作為一種抑癌基因可能在胃癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用，對(duì)判斷胃癌生物學(xué)行為和預(yù)后有一定的價(jià)值。

胃腫瘤； 轉(zhuǎn)錄因子； 染色與標(biāo)記； 細(xì)胞分化

胃癌是消化系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤[1]，研究發(fā)現(xiàn)胃癌發(fā)生發(fā)展多基因共同作用，這其中癌基因的活化是促使腫瘤發(fā)生的關(guān)鍵因素，但抑癌基因的失活在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中往往發(fā)揮著更為重要的作用[2]。ErbB2轉(zhuǎn)錄因子1（TOB1）基因是B細(xì)胞異位基因/ErbB2轉(zhuǎn)錄因子（BTG/TOB1）抗增殖蛋白家族中研究最多的一個(gè)成員，TOB1基因定位于染色體17q21，編碼含345個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)分子，可以通過(guò)多種途徑影響腫瘤細(xì)胞惡性增殖、轉(zhuǎn)移和侵襲[3-5]。本實(shí)驗(yàn)利用組織芯片研究胃癌及癌旁正常組織中TOB1的表達(dá)情況，并探討其與胃癌臨床病理學(xué)參數(shù)之間的關(guān)系及其意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 90對(duì)胃腺癌及癌旁組織標(biāo)本取自上海芯超生物科技有限公司組織庫(kù)2010年2月至2015年1月新鮮手術(shù)切除標(biāo)本，全部病例術(shù)前均未作化療或放療。90例患者中男 65例，女25例；年齡38～87歲，平均62歲；臨床分期：胃癌Ⅰ期15例，Ⅱ期27例，Ⅲ期38例，Ⅳ期10例；其中低分化腺癌37例，中分化腺癌50例，高分化腺癌3例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移59例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移31例。每例胃腺癌患者均取癌旁組織作為對(duì)照。所有患者均知情同意，本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核通過(guò)。所有組織標(biāo)本取出后迅速用10%中性甲醛溶液固定，常規(guī)脫水、石蠟包埋備用。

1.2 方法

1.2.1 試劑與組織芯片制備 抗TOB1單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司，二抗由上海芯超生物科技有限公司提供。組織芯片由上海芯超生物科技有限公司制作。首先，對(duì)每一個(gè)標(biāo)本蠟塊進(jìn)行切片、蘇木精-伊紅（HE）染色；然后，在顯微鏡下對(duì)需穿取的組織進(jìn)行定位，每一個(gè)標(biāo)本選取癌組織及癌旁正常組織各1個(gè)點(diǎn)，共計(jì)180個(gè)位點(diǎn)。用組織陣列儀（基泰公司）設(shè)計(jì)抽提的組織陣列塊在52℃恒溫烤箱中加熱融合，用全自動(dòng)組織切片機(jī)（萊卡公司）依次從標(biāo)本蠟塊上穿取直徑為1.0 mm的組織芯，按5mm的厚度連續(xù)切片，切片裱附在防脫片處理的載玻片上，陣列切片置于60℃恒溫烤箱中烤片16h，置于5℃冰箱保存。所得組織芯片的每個(gè)點(diǎn)均需經(jīng)過(guò)病理診斷。采用二步法進(jìn)行免疫組織化學(xué)（免疫組化）染色。用檸檬酸高溫高壓法進(jìn)行抗原修復(fù)。

1.2.2 免疫組化染色結(jié)果判斷 結(jié)果采用半定量積分法，即對(duì)每個(gè)點(diǎn)的陽(yáng)性細(xì)胞率及陽(yáng)性細(xì)胞著色強(qiáng)度分別進(jìn)行分級(jí)記分。按表達(dá)為陽(yáng)性的細(xì)胞數(shù)量占這個(gè)組織芯中該類(lèi)細(xì)胞總數(shù)的比率作為這個(gè)組織芯的陽(yáng)性率。以5%為一個(gè)遞增值，染色的細(xì)胞數(shù)陽(yáng)性率0為（0）；5%～30%為（1）；35%～70%為（2）；75%～95%為（3），結(jié)果由二者相乘而得，0～2分為低表達(dá)，≥3分為高表達(dá)。細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)含棕黃色顆粒者為陽(yáng)性。TOB1陽(yáng)性著色位于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中。按染色強(qiáng)度分為0、1、2、3這4個(gè)級(jí)別，即0表示陰性；1表示染色強(qiáng)度為淡黃或淺棕色；2表示染色強(qiáng)度為黃或棕色；3表示染色強(qiáng)度為棕黃或深棕色。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以率或構(gòu)成比表示，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

TOB1在胃癌組織中呈低表達(dá)為75.6%（68/90）、高表達(dá)為24.4%（22/90）；癌旁組織中TOB1呈低表達(dá)為14.4%（13/90）、高表達(dá)為85.6%（77/90）；TOB1在胃癌組織中表達(dá)較癌旁組織明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。TOB1在胃癌組織及癌旁組織的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中均有表達(dá)，主要位于細(xì)胞質(zhì)。就細(xì)胞質(zhì)而言，TOB1在胃癌組織中呈低表達(dá)為82.2%（74/90）、高表達(dá)為17.8%（16/90）；癌旁組織中TOB1呈低表達(dá)為22.2%（20/90）、高表達(dá)為77.8%（70/90），見(jiàn)圖1；TOB1在胃癌組織細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)較癌旁組織明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），并與分化程度、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、腫瘤分期明顯相關(guān)（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

圖1 TOB1在胃癌及癌旁正常組織中的表達(dá)情況

表1 胃癌患者臨床病理特征與TOB1表達(dá)的關(guān)系

續(xù)表1 胃癌患者臨床病理特征與TOB1表達(dá)的關(guān)系

3 討 論

TOB1蛋白是1996年日本學(xué)者M(jìn)atsuda在篩選與ErbB2相互作用的蛋白時(shí)首次發(fā)現(xiàn)，因此被命名為T(mén)OB1。TOB1基因定位于染色體17q21，編碼含345個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)分子[6]。TOB1是TOB/BTG抗增殖蛋白家族中研究最多的一個(gè)成員，有研究表明，TOB1基因在抑制腫瘤細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮重要的作用[7]。

目前，組織芯片技術(shù)已廣泛用于人類(lèi)腫瘤的研究，在腫瘤相關(guān)基因的生物學(xué)功能及篩選腫瘤相關(guān)標(biāo)志物等方面發(fā)揮了重要作用。其與基因芯片技術(shù)聯(lián)合可用于新的腫瘤候選基因的篩選；與免疫組化聯(lián)合可用于蛋白水平的腫瘤標(biāo)志物的篩選[8]。目前臨床上TOB1在胃癌組織中表達(dá)水平的研究甚少，本試驗(yàn)采用組織芯片技術(shù)研究胃癌及癌旁組織中TOB1的表達(dá)及臨床意義。研究發(fā)現(xiàn)，TOB1在胃癌組織中的表達(dá)水平較癌旁組織明顯降低，并與分化程度、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、腫瘤分期明顯相關(guān)。綜合既往的研究結(jié)果，作者認(rèn)為T(mén)OB1在胃癌的發(fā)生發(fā)展、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮重要作用[9]，其作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究，這將為T(mén)OB1為靶點(diǎn)進(jìn)行腫瘤靶向治療提供新的理論依據(jù)。

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10.3969/j.issn.1009-5519.2015.22.024

B

1009-5519（2015）22-3431-03

2015-08-04）

李玉芳（1968-），女，湖北麻城人，主任醫(yī)師，主要從事腫瘤的臨床與基礎(chǔ)研究工作；E-mail：18952455458@126.com。