劉曌宇， 曾和松， 李鵬程， 費(fèi)宇杰， 左后娟△

p38MAPK及ERK信號(hào)通路激活在CD151促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞遷移中的作用機(jī)制＊

劉曌宇1， 曾和松2， 李鵬程2， 費(fèi)宇杰2， 左后娟2△

華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院1消化內(nèi)科2心血管內(nèi)科，武漢 430030

目的 研究p38MAPK信號(hào)通路及ERK信號(hào)通路激活在CD151促進(jìn)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）遷移中的機(jī)制。方法 包裝攜帶CD151、antiCD151和GFP的重組腺相關(guān)病毒，轉(zhuǎn)染HUVECs。Western blot檢測(cè)HUVECs中CD151、細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（ERK）、p38絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）蛋白的表達(dá)；利用改良的Boyden趨化小室進(jìn)行細(xì)胞遷移檢測(cè)；在細(xì)胞轉(zhuǎn)染同時(shí)分別給予ERK抑制劑（PD98059，20μmol／L），或p38MAPK抑制劑（SB203580，20 μmol／L），然后檢測(cè)細(xì)胞遷移。結(jié)果 ①CD151組較空白對(duì)照組及GFP組明顯促進(jìn)細(xì)胞遷移的能力，而antiCD151組則顯著抑制細(xì)胞的遷移，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。②CD151高表達(dá)促進(jìn)ERK信號(hào)通路激活，而對(duì)p38MAPK信號(hào)通路無(wú)顯著作用。③ERK抑制劑（PD98059）顯著抑制CD151轉(zhuǎn)染后的促HUVECs遷移的作用（P＜0.05），而p38MAPK抑制劑（SB203580）無(wú)明顯作用。結(jié)論 CD151具有促進(jìn)細(xì)胞遷移的作用，CD151通過(guò)激活ERK信號(hào)通路促進(jìn)細(xì)胞遷移，而p38MAPK信號(hào)通路的激活則在CD151促進(jìn)HUVECs遷移中無(wú)顯著作用。

CD151； 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞； 細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶； 絲裂原活化蛋白激酶； 細(xì)胞遷移

血管再生性治療已成為當(dāng)前冠心病基礎(chǔ)和臨床研究的熱點(diǎn)。四跨膜蛋白超家族（transmembrane-4 superfamily，TM4SF）成員CD151能與多種整合素亞型特異性結(jié)合形成CD151-整合素復(fù)合體，是整合素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的跨膜連接器［1－2］。研究發(fā)現(xiàn)CD151可參與調(diào)節(jié)細(xì)胞多種功能，包括調(diào)節(jié)細(xì)胞形態(tài)、粘附、遷移、半橋粒結(jié)構(gòu)的形成，及與整合素相互作用介導(dǎo)血管生成等［3－5］。本課題組近年來(lái)開(kāi)展了多項(xiàng)有關(guān)CD151促血管生成的研究，我們的研究表明CD151的表達(dá)能夠促進(jìn)缺血組織的血管生成，CD151可作為“治療性血管生成”的一個(gè)新基因治療靶點(diǎn)［6－8］。然而，目前有關(guān)CD151促血管生成的機(jī)制還不清楚。既往研究報(bào)道CD151可促進(jìn)細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（extracellular signal-regulated kinase，ERK）的激活［9］，但Hong等［10］在人黑色素瘤細(xì)胞中轉(zhuǎn)染CD151發(fā)現(xiàn)，CD151通過(guò)激活局部粘著斑激酶（focal adhesion kinase，F(xiàn)AK）、p38絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）介導(dǎo)細(xì)胞的遷移，但ERK卻沒(méi)有參與此作用。因此，ERK信號(hào)通路是否介導(dǎo)CD151的促細(xì)胞遷移作用并不清楚，此外p38MAPK信號(hào)通路是否參與了CD151促內(nèi)皮細(xì)胞遷移作用也需進(jìn)一步研究。本研究主要探討p38MAPK信號(hào)通路和ERK信號(hào)通路在CD151促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞遷移中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要材料 細(xì)菌與質(zhì)粒pZeoSV-CD151由美國(guó)Tennessee大學(xué)惠贈(zèng)。pAAV-CD151-HA重組質(zhì)粒由本課題組前期構(gòu)建［7］。rAAV包裝質(zhì)粒pXX2、腺病毒輔助質(zhì)粒phelper、真核表達(dá)載體pXXUF1含綠色熒光蛋白序列（Green fluorescentprotein，GFP）由美國(guó)Pittsburgh大學(xué)分子遺傳及生物化學(xué)系Xiao Xiao博士惠贈(zèng)。293細(xì)胞購(gòu)自ATCC（美國(guó)）。工程菌株E.coli DH5α由同濟(jì)醫(yī)院心血管研究室保存。人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）購(gòu)自武漢大學(xué)物種保存中心。

1.1.2 主要試劑 所有細(xì)胞培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)試劑、DMEM培養(yǎng)液、胎牛血清（FBS）、胰蛋白酶等均購(gòu)自Gibco公司。蛋白質(zhì)提取試劑Trizol購(gòu)自美國(guó)Life Technologies公司。鼠抗β-actin、羊抗兔CD151、兔抗ERK1／2、兔抗phospho-ERK1／2、兔抗p38MAPK、兔抗phospho-p38MAPK購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz Biotechnology公司。辣根過(guò)氧化酶標(biāo)記兔抗羊IgG、兔抗鼠IgG和羊抗兔IgG購(gòu)自美國(guó)Pierce公司。Western雜交顯影用增強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光試劑（Super Signal Substrate，ECL）購(gòu)自美國(guó)Pierce公司。ERK抑制劑（PD098059）購(gòu)自Gibco公司，p38MAPK抑制劑（SB203580）購(gòu)自Calbiochem公司。Matrigel購(gòu)自德國(guó)R＆D Biosciences公司。聚偏二氟乙烯膜（PVDF）購(gòu)自美國(guó)Life Science公司。微孔多聚碳酸酯濾膜購(gòu)自美國(guó)Millipore公司。其余試劑為國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭?/p>

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 質(zhì)粒構(gòu)建及酶切鑒定 pAAV-CD151、pAAV-antiCD151和pAAV-GFP質(zhì)粒由本課題組前期構(gòu)建［7］。將構(gòu)建的pAAV-CD151、pAAV-antiCD151分別轉(zhuǎn)化E.coli DH5α，挑選陽(yáng)性單克隆，進(jìn)行酶切鑒定。

1.2.2 重組腺相關(guān)病毒的包裝及滴度測(cè)定 堿裂解法分別大量提取pAAV-GFP、pXX2、phelper和pAAV-CD151、pAAV-antiCD151質(zhì)粒，并用聚乙二醇超速離心純化。用磷酸鈣三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染293細(xì)胞［6］，即每15cm培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)染總質(zhì)粒量為85 μg（pAAV-CD151或pAAV-antiCD151或pAAVGFP、phelper和pXX2等3種質(zhì)粒摩爾比為1∶1∶1）；與超純水及2.5mol／L CaCl2混勻，然后逐滴加入2×BBS，邊加邊盡力吹打或振搖混合液，以形成較小的鈣磷顆粒；室溫下孵育20min；吸棄293細(xì)胞培養(yǎng)盤(pán)中的培養(yǎng)液，將磷酸鈣-DNA溶液均勻加入達(dá)60%融合的293細(xì)胞中。包裝并收獲rAAVCD151、rAAV-antiCD151和rAAV-GFP病毒原液，純化后備用。斑點(diǎn)雜交法測(cè)定病毒滴度。

1.2.3 HUVECs的培養(yǎng) HUVECs用含胎牛血清、肝素鈉的DMEM／F12培養(yǎng)液培養(yǎng)，胰酶消化后傳代，挑選生長(zhǎng)良好的HUVECs制成細(xì)胞懸液，細(xì)胞計(jì)數(shù)后傳至6孔板。隨機(jī)分為4組:對(duì)照組、GFP組、CD151組、antiCD151組，待細(xì)胞長(zhǎng)至60%融合時(shí)每孔更換l mL新鮮培養(yǎng)液，根據(jù)病毒滴度于上述4組中按500pfu／個(gè)細(xì)胞分別加入等體積PBS、rAAV-GFP、rAAV-CD151和rAAV-antiCD151轉(zhuǎn)染。在37℃、5%CO2條件下，培養(yǎng)箱中過(guò)夜，次日各孔加入1mL DMEM新鮮培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)5d后更換成不含血清的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)24h，然后用于以下實(shí)驗(yàn)。

1.2.4 細(xì)胞定向遷移能力檢測(cè) 利用改良的Boyden趨化小室進(jìn)行細(xì)胞遷移趨化實(shí)驗(yàn)，使用8μm微孔多聚碳酸酯濾膜。另取4組HUVECs，用DMEM培養(yǎng)液洗滌后調(diào)整密度為1×105／mL。在趨化小室的下層加入200μL含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液，然后蓋上多聚碳酸酯濾膜。在趨化小室的上層加入細(xì)胞懸液800μL。置于5%CO2、37℃條件下繼續(xù)培養(yǎng)16h后拆卸裝置，收取濾膜。擦凈濾膜上層面的細(xì)胞，濾膜及下層細(xì)胞用甲醇固定，蘇木精染色。在200倍顯微鏡下照相，每張膜隨機(jī)觀察5個(gè)視野，計(jì)數(shù)遷移細(xì)胞數(shù)。

1.2.5 Western blot檢測(cè)CD151、ERK、p38MAPK的蛋白表達(dá) HUVECs按上述方法處理48h后，收集各組細(xì)胞并提取總蛋白。配制SDS-PAGE凝膠，取含等量蛋白的裂解液，常規(guī)電泳，轉(zhuǎn)膜，封閉；加入鼠抗人CD151（或ERK或P38）抗體（1∶1 000），4℃過(guò)夜。加入相應(yīng)的二抗（1∶ 5 000），37℃孵育2h；ECL顯色；GENE SNAP TOOL軟件分析目的條帶相對(duì)吸光度值，各組數(shù)據(jù)均用相應(yīng)的β-actin進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理。

1.2.6 CD151促血管生成的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制 為研究CD151促進(jìn)細(xì)胞遷移的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制，在給予細(xì)胞rAAV-CD151感染的同時(shí)給予ERK抑制劑（PD98059，20μmol／L），或p38MAPK抑制劑（SB203580，20μmol／L），然后按1.2.4項(xiàng)方法檢測(cè)細(xì)胞遷移。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ˉx±s）表示，各參數(shù)的組間均數(shù)比較應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 12.0行t檢驗(yàn)或方差分析（ANOVA），以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 基因轉(zhuǎn)染后HUVECs中CD151蛋白的表達(dá)

用rAAV-CD151、rAAV-antiCD151轉(zhuǎn)染HUVECs，結(jié)果發(fā)現(xiàn)CD151組CD151蛋白表達(dá)明顯較對(duì)照組和GFP組增加（P＜0.05），而antiCD151組CD151蛋白表達(dá)明顯低于CD151組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)圖1。

2.2 CD151基因轉(zhuǎn)染促進(jìn)HUVECs遷移

CD151組與對(duì)照組和GFP組比較，HUVECs遷移能力明顯增強(qiáng)（P＜0.05）；antiCD151組與CD151組比較，HUVECs遷移能力明顯減弱，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)果說(shuō)明CD151基因轉(zhuǎn)染能促進(jìn)細(xì)胞的遷移，CD151在HUVECs的遷移過(guò)程中具有重要作用。見(jiàn)圖2。

圖1 病毒轉(zhuǎn)染后細(xì)胞CD151蛋白表達(dá)的Western blot檢測(cè)Fig.1 Western blot analysis of CD151protein expression in HUVECs transfected with rAAVs

圖2 Boyden小室法檢測(cè)HUVECs的遷移能力（蘇木精，×200）Fig.2 Transwell Boyden chamber assay for detection of migrating ability of HUVECs（Hematoxylin staining，×200）

2.3 CD151對(duì)p-ERK、p－p38MAPK蛋白表達(dá)的影響

p-ERK、p－p38MAPK分別用ERK、p38MAPK進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理，即設(shè)對(duì)照組p-ERK／ERK、pp38MAPK／p38MAPK為1，結(jié)果顯示GFP組、CD151組、antiCD151組p-ERK／ERK值分別為（1.01±0.26）、（2.21±0.48）、（0.77±0.09）（圖3），CD151組p-ERK／ERK明顯高于對(duì)照組和GFP組，antiCD151組蛋白表達(dá)明顯低于CD151組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。而pp38MAPK／p38MAPK在各組之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果說(shuō)明CD151可促進(jìn)p-ERK的蛋白表達(dá)，而對(duì)p－p38MAPK蛋白表達(dá)無(wú)影響。

2.4 CD151激活ERK促進(jìn)細(xì)胞的遷移

重組腺相關(guān)病毒介導(dǎo)的CD151轉(zhuǎn)染HUVECs的同時(shí)，分別給予ERK抑制劑（PD98059，20μmol／L），或p38MAPK抑制劑（SB203580，20μmol／L），觀察它們對(duì)細(xì)胞遷移的影響。結(jié)果顯示（圖4），ERK抑制劑顯著抑制CD151促進(jìn)HUVECs遷移的作用（P＜0.05），而p38MAPK抑制劑無(wú)明顯作用。提示ERK介導(dǎo)了CD151促進(jìn)細(xì)胞遷移的作用，而p38MAPK則未參與或者在CD151促進(jìn)HUVECs遷移中的效應(yīng)不明顯。

圖3 Western blot檢測(cè)CD151基因轉(zhuǎn)染對(duì)ERK、p38MAPK通路蛋白表達(dá)的影響Fig.3 Western blot analysis of the expressions of ERK and p38MAPK pathway proteins after CD151transfection

圖4 CD151激活ERK信號(hào)通路促進(jìn)細(xì)胞遷移Fig.4 CD151promotes cell migration through the activation ofERK signaling pathway

3 討論

血管生成（angiogenesis）是指在機(jī)體生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中或者創(chuàng)傷修復(fù)、缺血缺氧和炎癥等情況下，原有微血管內(nèi)皮細(xì)胞（endothelial cell，EC）經(jīng)過(guò)生芽、遷移、增殖與基質(zhì)重塑等形成新毛細(xì)血管的過(guò)程［1112］。內(nèi)皮細(xì)胞的遷移是血管生成過(guò)程的重要步驟之一。

CD151是近年發(fā)現(xiàn)的TM4SF蛋白質(zhì)家族成員，能與多種整合素亞型特異性結(jié)合形成CD151-整合素復(fù)合體，是整合素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的跨膜連接器，也是多種整合素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的交匯點(diǎn)［2－5］。隨著整合素與血管生成方面研究的不斷深入，CD151也日益受到關(guān)注。我們前期的實(shí)驗(yàn)結(jié)果將CD151重組腺相關(guān)病毒轉(zhuǎn)染大鼠后肢缺血模型，發(fā)現(xiàn)后肢微血管密度及運(yùn)動(dòng)耐力明顯高于未轉(zhuǎn)染CD151組，初步確定了CD151在體內(nèi)促血管生成的作用［6］；進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)中，利用裸質(zhì)粒注射的方法在心肌梗死模型大鼠心肌中轉(zhuǎn)染CD151，發(fā)現(xiàn)CD151可明顯促進(jìn)梗死后心肌中微血管的生成，有利于心肌缺血后的血運(yùn)重建［7］；在大鼠心肌梗死模型中導(dǎo)入CD151重組腺相關(guān)病毒，缺血心肌局部毛細(xì)血管密度明顯增加，血流動(dòng)力學(xué)的各項(xiàng)指標(biāo)左室收縮壓峰值（LVPSP）及左室內(nèi)壓最大上升和下降速率（±dp／dtmax）均有明顯提高［8］；在急性心肌梗死小型豬轉(zhuǎn)染CD151則促進(jìn)缺血心肌組織的血流再灌注［13］。這一系列的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明增強(qiáng)CD151的表達(dá)能夠促進(jìn)缺血組織的血管生成，有利于心肌缺血后的血運(yùn)重建。

但是，目前CD151促血管生成的機(jī)制還不清楚。Takeda等［14］報(bào)道在來(lái)源于CD151基因敲除小鼠的肺內(nèi)皮細(xì)胞中觀察到選擇性的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)改變，即CD151基因敲除導(dǎo)致e-NOS、Rac及Cdc42活性減弱，但是，ERK、p38MAPK和FAK的活性未發(fā)生變化；而Hong等［10］發(fā)現(xiàn)CD151通過(guò)激活FAK、p38MAPK介導(dǎo)人黑色素瘤細(xì)胞的遷移，但ERK卻沒(méi)有參與此作用。這些信號(hào)通路在血管生成的過(guò)程中發(fā)揮怎樣的作用尚不清楚。雖然，既往發(fā)現(xiàn)CD151高表達(dá)可促進(jìn)細(xì)胞遷移和ERK信號(hào)通路的激活［9，15－16］，但是，CD151的促細(xì)胞遷移作用是否由ERK介導(dǎo)卻并不清楚；p38MAPK信號(hào)通路在CD151促內(nèi)皮細(xì)胞遷移中的作用未見(jiàn)報(bào)道。本研究中，通過(guò)重組腺相關(guān)病毒攜帶CD151轉(zhuǎn)染，同時(shí)運(yùn)用反義核酸技術(shù)下調(diào)CD151蛋白表達(dá)（antiCD151）。研究發(fā)現(xiàn)，CD151高表達(dá)促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞遷移，抑制CD151蛋白表達(dá)則內(nèi)皮細(xì)胞遷移顯著減少；CD151高表達(dá)促進(jìn)ERK信號(hào)通路激活，這與之前的報(bào)道一致。同時(shí)，我們發(fā)現(xiàn)CD151在內(nèi)皮細(xì)胞高表達(dá)對(duì)p38MAPK信號(hào)通路無(wú)顯著作用。

在上述研究結(jié)果的基礎(chǔ)上，我們進(jìn)一步研究了CD151促進(jìn)細(xì)胞遷移的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。我們?cè)贑D151轉(zhuǎn)染細(xì)胞時(shí)，加用了ERK抑制劑（PD98059）或p38MAPK抑制劑（SB203580），結(jié)果顯示ERK抑制劑（PD98059）能部分逆轉(zhuǎn)CD151對(duì)細(xì)胞遷移的促進(jìn)作用，而p38MAPK抑制劑（SB203580）對(duì)CD151促細(xì)胞遷移無(wú)顯著作用。

本研究中，我們初步探討了CD151促內(nèi)皮細(xì)胞遷移的機(jī)制，發(fā)現(xiàn)CD151通過(guò)激活ERK信號(hào)通路促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的遷移，p38MAPK信號(hào)通路則不參與該過(guò)程。然而，血管生成是一個(gè)極其復(fù)雜的生理過(guò)程，內(nèi)皮細(xì)胞遷移只是其中一個(gè)過(guò)程，要了解其詳細(xì)的機(jī)制還需要進(jìn)一步深入的研究。

［1］ Baldwin L A，Hoff J T，Lefringhouse J，et al.CD151-α3β1integrin complexes suppress ovarian tumor growth by repressing slug-mediated EMT and canonical Wnt signaling［J］.Oncotarget，2014，5（23）:12203－12217.

［2］ Yá?ez-MóM，Alfranca A，Caba?as C，et al.Regulation of endothelial cell motility by complexes of tetraspan molecules CD81／TAPA-1and CD151／PETA-3with alpha3beta1integrin localized atendothelial lateral junctions［J］.J Cell Biol，1998，141（3）:791-804.

［3］ Zhang X A，Kazarov A R，Yang X，et al.Function of the tetraspanin CD151-alpha6beta1integrin complex during cellular morphogenesis［J］.Mol Biol Cell，2002，13（1）:1－11.

［4］ Chometon G，Zhang Z G，Rubinstein E，et al.Dissociation of the complex between CD151and laminin-binding integrins permits migration of epithelial cells［J］.Exp Cell Res，2006，312（7）:983-995.

［5］ Kazarov A R，Yang X，Stipp C S，et al.An extracellular site on tetraspanin CD151determinesα3andβ6integrin-dependent cellular morphology［J］.J Cell Biol，2002，158（7）:1299-1309.

［6］ Liu W F，Zuo H J，Chai B L，et al.Role of tetraspanin CD151－α3／α6integrin complex:Implication in angiogenesis CD151-integrin complex in angiogenesis［J］.Int J Biochem Cell Biol，2011，43（4）:642-650.

［7］ 王麗，劉正湘，楊軍，等.CD151對(duì)大鼠心肌梗死后血管新生及心功能的影響［J］.中華心血管病雜志，2006，34（2）:159－163.

［8］ Zheng Z Z，Liu Z X.CD151gene delivery activates PI3K／Akt pathway and promotes neovascularization after myocardial in-farction in rats［J］.Mol Med，2006，12（9／10）:214-220.

［9］ Yang W，Li P，Lin J，et al.CD151promotes proliferation and migration of PC3cells via the formation of CD151-integrin α3／α6complex.［J］J Huazhong Univ Sci Technolog［Med Sci］，2012，32（3）:383-388.

［10］ Hong I K，Jin Y J，Byun H J，et al.Homophilic interactions of Tetraspanin CD151up-regulate motility and matrix metalloproteinase－9expression of human melanoma cells through adhesion-dependent c-Jun activation signaling pathways［J］.J Biol Chem，2006，281（34）:24279-24292.

［11］ Anisimov A，Tvorogov D，Alitalo A，et al.Vascular endothelial growth factor-angiopoietin chimera with improved properties for therapeutic angiogenesis［J］.Circulation，2013，127（4）:424-434.

［12］ Silva R，D’Amico G，Hodivala-Dilke K M，et al.Integrins:the keys to unlocking angiogenesis［J］.Arterioscler Thromb Vasc Biol，2008，28（10）:1703-1713.

［13］ Zuo H，Liu Z，Liu X，et al.CD151gene delivery after myocardial infarction promotes functional neovascularization and activates FAK signaling［J］.Mol Med，2009，15（9／10）:307-315.

［14］ Takeda Y，Kazarov A R，Butterfield C E，et al.Deletion of tetraspanin CD151results in decreased pathologic angiogenesis in vivo and in vitro［J］.Blood，2007，109（4）:1524-1532.

［15］ Kohno M，Hasegawa H，Miyake M，et al.CD151enhances cell motility and metastasis of cancer cells in the presence of focal adhesion kinase［J］.Int J Cancer，2002，97（3）:336-343.

［16］ 許富英，羅望翠，曾和松，等.整合素β1在CD151促HUVECs遷移增殖中的機(jī)制研究［J］.中國(guó)組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志，2010，19（2）:113-117.

（2015-02-19 收稿）

Role of p38MAPK and ERK Signal Pathways in the CD151-promoted HUVECs Migration

Liu Zhaoyu1，Zeng Hesong2，Li Pengcheng2et al
1Department of Gastroenterology，2Department of Cardiology，Tongji Hospital，Tongji Medical College，Huazhong University of Science and Technology，Wuhan 430030，China

Objective To study the mechanism by which the activation of p38MAPK and ERK signal pathways affects CD151-promoted migration of human umbilical vein endothelial cells（HUVECs）.Methods rAAV-CD151，rAAV-antiCD151 and rAAV-GFP were constructed and transfected into HUVECs.Protein expression levels of CD151，p38MAPK and ERK were measured by Western blot.The migration of HUVECs was detected by using modified Boyden chamber assay.HUVECs were treated with ERK inhibitor（PD98059，20μmol／L）or p38MAPK inhibitor（SB203580，20μmol／L）at the time of transfection and cell migration was determined.Results ①Cell migration was significantly increased in CD151group when compared with blank control and GFP groups.It was significantly inhibited in antiCD151group.There was significant difference.②Overexpression of CD151activated ERK signal pathway but had no effect on p38MAPK signal pathway.③ERK inhibitor（PD98059）rather than p38MAPK inhibitor（SB203580）could significantly suppress the CD151-induced HUVECs migration.Conclusion Activation of ERK signaling pathway，but not p38MAPK，is involved in the CD151-induced HUVECs migration.

CD151； human umbilical vein endothelial cells； extracellular signal-regulated kinase； mitogen-activated protein kinase； cell migration

R329.28

10.3870／j.issn.1672-0741.2015.03.003

＊湖北省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（No.2014CFB437）

劉曌宇，女，1981年生，主管技師，E－mail:zhaoyuliu_33＠hotmail.com

△通訊作者，Corresponding author，E-mail:zuohoujuan＠126.com