王虎等??

【摘要】目的：建立三拗魚(yú)龍合劑中橙皮苷的含量測(cè)定方法。方法：采用HPLC法測(cè)定，色譜柱為碳十八烷基硅烷鍵合硅膠柱；流動(dòng)相為乙腈-04%磷酸水溶液（20∶80）；檢測(cè)波長(zhǎng)：283nm；流速：10ml/min；柱溫：30℃。結(jié)果：橙皮苷在1391～2226μg/ml范圍呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，平均回收率10011%，RSD=137%（n=6）。結(jié)論：該方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確，重復(fù)性、穩(wěn)定性良好，精密度高，結(jié)果可靠，可作為三拗魚(yú)龍合劑質(zhì)量控制的方法。

【關(guān)鍵詞】三拗魚(yú)龍合劑；橙皮苷；HPLC

【中圖分類(lèi)號(hào)】R2841【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2015）01-0044-02

三拗魚(yú)龍合劑由魚(yú)腥草、浙貝母、陳皮等藥味組成，為太和縣中醫(yī)院醫(yī)院制劑。具有宣肺平喘、止咳消痰的功效，用于急、慢性支氣管炎。作為醫(yī)院制劑，原標(biāo)準(zhǔn)中無(wú)含量測(cè)定項(xiàng)。為了更好的控制醫(yī)院制劑的質(zhì)量，使本制劑療效穩(wěn)定可控，本文采用高效液相色譜法測(cè)定陳皮中橙皮苷的含量，該法靈敏度高，專(zhuān)屬性好，操作簡(jiǎn)單，重復(fù)性好，可作為三拗魚(yú)龍合劑質(zhì)量控制的方法。

1儀器與材料

11儀器安捷倫LC-1220型高效液相色譜儀；紫外檢測(cè)器；101-1A型數(shù)顯恒溫干燥箱（上海光地儀器設(shè)備有限公司）；AL-120型電子天平（瑞士梅特勒-托利多儀器公司）；HS-180型超聲波清洗機(jī)（寧波海曙金蘭教儀科研究所）。

12試藥三拗魚(yú)龍合劑（批號(hào)：20140417、20140712、20140906，太和中醫(yī)院中藥制劑室）；橙皮苷對(duì)照品（批號(hào)：110721-201316，中國(guó)藥品生物制品檢定所）；乙腈為色譜純；水為純化水；其余試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

21色譜條件色譜柱：依利特Hypersil ODS（46mm×250mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-04%磷酸水溶液（20∶80）；檢測(cè)波長(zhǎng)：283nm；流速：10ml/min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：20μl。理論塔板數(shù)以橙皮苷計(jì)應(yīng)不低于4000，分離度大于15。

22對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取橙皮苷對(duì)照品適量，加甲醇-04%磷酸水溶液（1∶1）制成每1ml含50μg的溶液。

23供試品溶液的制備[1]密量取本品5ml，置25ml量瓶中，加甲醇20ml，超聲處理（功率100W，頻率40kHz）20min，放冷，用甲醇定容，搖勻，離心（3000r/min，10min），精密移取上清液5ml置10ml量瓶中，用04%磷酸稀釋至刻度，搖勻，過(guò)045μm濾膜，即得。

24干擾試驗(yàn)按處方比例及生產(chǎn)工藝制備不含陳皮的三拗魚(yú)龍合劑，再按供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照溶液。取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液按上述色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果表明，陰性對(duì)照溶液在與橙皮苷對(duì)照品相同保留時(shí)間處未顯色譜峰，故認(rèn)為無(wú)干擾。

25線(xiàn)性關(guān)系考察精密稱(chēng)取橙皮苷對(duì)照品1113mg，置25ml量瓶中，用甲醇定容，作為儲(chǔ)備液。精密移取儲(chǔ)備液5ml，置10ml量瓶中，用甲醇-04%磷酸溶液（1∶1）稀釋至刻度，搖勻，作為2號(hào)對(duì)照品溶液；同法制成3、4、5號(hào)對(duì)照品溶液。分別精密吸取各對(duì)照品溶液20μl，按上述色譜條件進(jìn)樣。以對(duì)照品的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），得回歸方程：Y=1945×10-9X-0002225532，R=09996。結(jié)果表明，橙皮苷在1391～2226μg/ml范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。

26精密度試驗(yàn)取“25”項(xiàng)下3號(hào)對(duì)照品溶液，按上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積。結(jié)果橙皮苷峰面積RSD為092%。 結(jié)果表明儀器精密度良好。

3結(jié)果與討論

31流動(dòng)相的選擇HPLC法測(cè)定橙皮苷含量的文獻(xiàn)[4-7]較多，常采用甲醇-水系統(tǒng)和乙腈-水系統(tǒng)。由于峰形較差，常會(huì)在流動(dòng)相中添加一定比例酸改善峰形。試驗(yàn)考察了甲醇-04%醋酸水溶液（35∶65）、甲醇-04%磷酸水溶液（20∶80）、乙腈-04%磷酸水溶液（20∶80）等流動(dòng)相，發(fā)現(xiàn)乙腈-04%磷酸水溶液（20∶80）峰形較為滿(mǎn)意，且保留時(shí)間適宜、分離度良好，故選擇此條件作為測(cè)定條件。

32樣品處理分別對(duì)樣品超聲10、15、20、25min后進(jìn)樣考察，結(jié)果顯示超聲20min含量高于15min，而超聲25min被測(cè)組分含量幾乎不再增加，故確定超聲時(shí)間20min即可。由于定容后樣品過(guò)濾較困難，試驗(yàn)時(shí)間長(zhǎng)，故選擇離心法除去雜質(zhì)。且離心后與直接過(guò)濾樣品的色譜峰面積相比較，無(wú)明顯差異。樣品用甲醇處理后直接進(jìn)樣，色譜峰前沿明顯，分離度差。用04%磷酸稀釋后進(jìn)樣，峰形較為滿(mǎn)意。故樣品處理后，故加入適量磷酸以調(diào)整峰形。

采用HPLC法測(cè)定三拗魚(yú)龍合劑的含量，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，重現(xiàn)性好，可用于該品種的質(zhì)量控制和穩(wěn)定性考察，為三拗魚(yú)龍合劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立提供依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1]龍榮，祝文兵，彭芳玲，等.RP-HPLC法測(cè)定鎮(zhèn)咳靈合劑中橙皮苷的含量[J].兒科藥學(xué)雜志，2008，14（2）：37-38.

[2]姜志戎.HPLC法測(cè)定和胃合劑中橙皮苷的含量[J].中醫(yī)藥臨床雜志，2011，23（10）：903-904.

[3]張穎，蔣俊春，孟建升.HPLC法測(cè)定公英健胃合劑中橙皮苷的含量[J].光明中醫(yī)，2009，24（4）：654-655.

[4]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：176 -177.

[5]孫冬梅，畢曉黎，胥愛(ài)麗，等.HPLC法測(cè)定不同產(chǎn)地陳皮藥材中橙皮苷的含量[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2009，15（11）：1-3.

[6]焦志峰，遲棟.HPLC法測(cè)定香砂六君合劑中橙皮苷的含量[J].光明中醫(yī)，2011，26（4）：695-696.

[7]仇雅靜，朱梓文.HPLC法測(cè)定通腸理氣合劑中芍藥苷和橙皮苷的含量[J].中國(guó)藥事，2012，26（12）：1366-1368.

（收稿日期：20141012）