姚小玲??

【摘要】目的：測定不同生產(chǎn)廠家生產(chǎn)的抗宮炎片中齊墩果酸和熊果酸的含量，為抗宮炎片質(zhì)量控制和評價(jià)提供依據(jù)。方法：采用高效液相色譜法。結(jié)果：不同廠家抗宮炎片中齊墩果酸和熊果酸含量存在較小差異。結(jié)論：該方法可用于抗宮炎片中齊墩果酸和熊果酸的含量測定。

【關(guān)鍵詞】抗宮炎片；齊墩果酸；熊果酸；HPLC

【中圖分類號(hào)】R2841【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2015）01-0016-02

抗宮炎片由廣東紫珠干浸膏、益母草干浸膏和烏藥干浸膏等成分組成。具有清濕熱、止帶下的作用，臨床主要用于濕熱下注所致的帶下病，如宮頸糜爛、白帶量增多等。研究發(fā)現(xiàn)，紫珠中含有黃酮、酚酸、三萜和苯丙素等類別化合物[1-4]，黃酮是其抗宮頸炎有效成份[5]，三萜主要含齊墩果酸和熊果酸等成分[6-7]，有良好的護(hù)肝作用和對肝臟的抗脂質(zhì)過氧化（LPO）作用[8-9]；益母草主要含有生物堿、黃酮和二萜類等成分，總生物堿具有明顯的抗炎鎮(zhèn)痛作用和改變血流動(dòng)力學(xué)及血液流變學(xué)作用[10-11]；烏藥主要含有生物堿和萜類成分，生物堿具有較好的抗菌和抗病毒作用[12-13]。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法對抗宮炎片中齊墩果酸和熊果酸的含量進(jìn)行測定，為抗宮炎片的質(zhì)量評價(jià)提供依據(jù)。

1儀器與材料

11儀器Agilent1260高效液相色譜儀、G1311B四元泵（帶在線脫氣機(jī)）、G4212B DAD陣列二極管檢測器、Agilent漢化版色譜工作站；迪馬Diamonil C18（ 250mm ×46mm，5μm）色譜柱；電子分析天平（島津AUW120D）；超聲波中藥處理機(jī)（LC-350A）。

12試劑齊墩果酸對照品（批號(hào)：110709-201206）、熊果酸對照品（批號(hào)：110742 -201220）由中國藥品生物制品檢定研究院提供；甲醇、乙腈為色譜純（天津賽福瑞科技有限公司）；水為重蒸水；其它試劑均為分析純。

13試藥抗宮炎片分析樣品購置于湖南懷化龍?jiān)此帢I(yè)，分別為2個(gè)廠家8個(gè)批次的樣品，編號(hào)見表3。

2方法與結(jié)果

21色譜條件色譜柱：迪馬Diamonil C18（250mm ×46mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-水（92∶8）；流速：05ml/min；進(jìn)樣量：10μl；檢測波長210nm。上述條件下齊墩果酸和熊果酸基線基本能夠分離，峰形對稱，色譜圖見圖1。

22對照品溶液的制備分別精確稱取齊墩果酸40mg、熊果酸44mg于10ml容量瓶，用甲醇溶解并定容至刻度，即得040mg/ml齊墩果酸儲(chǔ)備液和044mg/ml熊果酸儲(chǔ)備液。

23供試品溶液的制備取抗宮炎片1片，去包衣，干燥碾碎，稱取樣品粉末（過40目篩）02g于10ml容量瓶中，加入甲醇約8ml，放入超聲波中藥處理機(jī)中處理45min，取出，放至室溫，用甲醇定容至刻度，進(jìn)樣前用微孔濾膜（045μm）過濾，得到供試品溶液。

24線性關(guān)系考察分別精密量取01、05、10、15、20、25、30ml的齊墩果酸和熊果酸于10ml容量瓶，用甲醇定容至刻度，即得40、200、400、600、800、1000、1200μg/ml齊墩果酸系列濃度校正液和44、220、440、660、880、1100、1320μg·ml-1系列濃度校正液，按照21色譜條件進(jìn)樣，以濃度為橫坐標(biāo)，面積響應(yīng)值為縱坐標(biāo)，分別得齊墩果酸和熊果酸的標(biāo)準(zhǔn)回歸方程：Y=50672X-15431（R=09997）；Y=41054X+10553（R=09995），表明齊墩果酸和熊果酸分別在00400～12000μg、00440～13200μg范圍內(nèi)線性良好。

25精密度試驗(yàn)吸取同一對照品溶液與同一供試品溶液各10μl，分別連續(xù)7次進(jìn)樣，測定峰面積，對照品與供試品峰面積的RSD分別為069%和055%。

26穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取同一供試品溶液，分別于0、1、2、4、8、16、24h時(shí)段進(jìn)樣，其峰面積的RSD為138%，結(jié)果表明樣品溶液24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

27重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一批次的抗宮炎片7份，精密稱取02g，按照“23項(xiàng)”處理，“21項(xiàng)”色譜條件進(jìn)樣，測得齊墩果酸和熊果酸含量分別為：01116mg/g，02209mg/g，RSD（n=7）分別為187%和135%。

28加樣回收率試驗(yàn)精密稱取同批次已知含量的抗宮炎片6份，分別置于10ml容量瓶中，并加入齊墩果酸和熊果酸，按照“23項(xiàng)”處理、“21項(xiàng)”色譜條件進(jìn)樣分析，測定齊墩果酸和熊果酸的含量，計(jì)算回收率見表1、2。

29樣品含量測定精確稱取兩個(gè)廠家的抗宮炎片，每個(gè)廠家5批，每批取5個(gè)平行樣，按照“23項(xiàng)”進(jìn)行樣品處理、“21項(xiàng)”色譜條件進(jìn)樣分析，用外標(biāo)法分別對齊墩果酸和熊果酸進(jìn)行含量測定，結(jié)果見表3。

3討論

實(shí)驗(yàn)過程中試用了不同的流動(dòng)相，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，流動(dòng)相為乙腈-水（92∶8）時(shí)峰形對稱，出峰時(shí)間適宜，雜質(zhì)峰對被檢測峰干擾小。因此，實(shí)驗(yàn)采用乙腈-水（92∶8）作為流動(dòng)相。

實(shí)驗(yàn)采用試用無水乙醇和甲醇作為超聲提取溶劑，超聲提取45min，齊墩果酸和熊果酸基本能提取完全，乙醇作為提取溶劑時(shí)有較強(qiáng)的溶劑峰，故本實(shí)驗(yàn)采用甲醇作為提取溶劑。

藥典規(guī)定，抗宮炎片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)以廣東紫珠中連翹酯苷B和金石蠶苷為標(biāo)志物來評價(jià)其質(zhì)量，固定相為十八烷基鍵合硅膠，以乙腈-05%磷酸溶液（18∶82）為流動(dòng)相[14]。此色譜條件極易讓弱極性物質(zhì)在色譜柱上形成強(qiáng)吸附而降低柱效，而采用本實(shí)驗(yàn)色譜條件則不會(huì)出現(xiàn)以上狀況，借此作為抗宮炎片質(zhì)量評價(jià)方法有一定的意義。

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（收稿日期：20140928）