杜秀麗　王慧

[摘 要]目的：建立銀黃解毒膠囊的質(zhì)量標準。方法：采用TLC法對銀黃解毒膠囊中茯苓、金銀花、連翹進行了薄層鑒別；采用HPLC法測定蒙花苷的含量，為銀黃解毒膠囊的質(zhì)量控制提供依據(jù)。結果：薄層鑒別方法專屬性強；在10.1～50.5μg范圍內(nèi)蒙花苷峰面積與進樣量線性關系良好，r=0.9998；樣品加樣回收率為99.75%（n=6）。RSD為0.48。結論：所建立的方法準確可行，重復性好，可有效控制銀黃解毒膠囊的質(zhì)量。

[關鍵詞]銀黃解毒膠囊；質(zhì)量標準；蒙花苷；高效液相色譜法

該制劑是由野菊花、茯苓、金銀花、連翹、板藍根、甘草等十三味中藥材組方而制成的膠囊劑。具有滋陰清熱，解毒利濕功效，用于病毒引起的帶狀皰疹，單純性皰疹等癥。為控制本制劑的質(zhì)量，實驗采用薄層色譜法對制劑中的茯苓、金銀花、連翹進行了鑒別，并以蒙花苷為指標，用高效液相色譜法測定制劑中野菊花的含量。

1 儀器與試藥

（1）儀器。LC-15C高效液相色譜儀（日本島津）；SPD-15C紫外檢測器（日本島津）；Wondasil C18 柱（4.6mm×150mm，Φ5μm）（日本島津）；

（2）試藥。高效液相色譜用試劑均為色譜純；薄層層析用試劑為分析純；茯苓對照藥材（120925-200407）、連翹苷（110821-200711）、綠原酸對照品（110753-201314）、蒙花苷對照品（111528-201308）均由中國食品藥品檢定研究院提供。自制銀黃解毒膠囊，批號：20140106、20140107、20140108。

2 方法與結果

2.1 鑒別

（1）茯苓的鑒別。取本品內(nèi)容物10g，加乙醚50ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取茯苓對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B）試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（20∶5∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%香草醛硫酸溶液-乙醇（4∶1）混合溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點。結果見圖1。

（2）金銀花的鑒別。取本品內(nèi)容物10g，加甲醇30ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液濃縮至2ml，作為供試品溶液。另取綠原酸對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B）試驗，吸取供試品溶液10～20μl、對照品溶液10μl，分別點于同一硅膠H薄層板上，以乙酸丁酯-甲酸-水（7∶2.5∶2.5）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。

（3）連翹的鑒別。取本品內(nèi)容物10g，加石油醚（30℃～60℃）30ml，密塞，超聲處理15分鐘，濾過，棄去石油醚液，殘渣揮干石油醚，加甲醇20ml，密塞，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇5ml使溶解，作為供試品溶液。另取連翹苷對照品，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B）試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇（8∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

2.2 含量測定

（1）色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗。填充劑：十八烷基硅烷鍵合硅膠，色譜柱為Wondasil C18 柱（4.6mm×150mm，Φ5μm）柱；流動相：甲醇-水-冰醋酸（26∶23∶1）為流動相；檢測波長為334nm。流速1.0ml/min；柱溫36℃；進樣量10μl。理論板數(shù)按蒙花苷峰計算，應不低于2000。

（2）對照品溶液的制備。取蒙花苷對照品適量，精密稱定，加甲醇溶解（必要時加熱）制成每1ml含25μg的溶液，即得。

（3）供試品溶液的制備。取本品內(nèi)容物1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密甲醇100ml，稱定重量，加熱回流3小時，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液5ml，加甲醇至10ml即得。

（4）陰性對照溶液的制備。取陰性樣品（不含野菊花藥材）1g，精密稱定，同法制成陰性對照溶液。

（5）測定法。按上述色譜條件，精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，測定色譜圖，見圖4～6。從色譜圖可見，其他成分對蒙花苷的測定無干擾，符合測定要求。

（6）線性關系考察。精密稱取蒙花苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含101μg的溶液，作為對照品儲備液備用，分別精密量取上述蒙花苷對照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，各精密量取10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積A為縱坐標，以濃度C為橫坐標，按最小二乘法進行線性回歸，其回歸方程為Y=34480×2081.7，r=0.9998。結果表明蒙花苷在10.1～50.5μg/ml范圍內(nèi)進樣量與峰面積呈良好的線性關系。

（7）精密度試驗。精密吸取對照品溶液10μl，注入液相色譜儀，重復進樣6次，記錄色譜圖，結果顯示儀器具有良好精密度，RSD=0.39%。

（8）穩(wěn)定性實驗。取對照品溶液和供試品溶液分別于0、2、4、8、12、24小時各精密量取10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，量取峰面積，計算RSD%。RSD分別為0.72%和0.93%。由試驗結果可知，本品在室溫自然光條件下存放，在24小時內(nèi)基本穩(wěn)定。

（9）重復性試驗。取樣品（批號：20140108）平行制備6份供試品溶液，按上述色譜條件測定峰面積，計算出蒙花苷的含量，結果表明有良好重復性，RSD=0.99%。

（10）加樣回收率試驗。取已知含量的樣品適量，精密稱取6份，分別加入一定量的蒙花苷對照品，制備成供試品溶液，按上述色譜條件測定峰面積，得出蒙花苷的回收率。結果見表1。

由以上試驗結果可知，該方法回收率良好，可用于本品的蒙花苷含量測定。

（11）樣品測定。取樣品3批，分別制成供試品溶液，精密吸取供試品溶液與對照品溶液各10μl，按上述色譜條件測定峰面積（n=6），對樣品中蒙花苷的含量進行計算，結果見表2。

3 結 論

（1）在檢測波長的選擇中，參考《中國藥典》2010年版一部野菊花項下含量測定方法，對蒙花苷對照品溶液進行紫外掃描，在（334±2）nm處有最大吸收，故選擇334 nm作為測定波長。

（2）茯苓、金銀花、連翹的薄層色譜鑒別專屬性強，易操作，無干擾，分離效果好；高效液相色譜法測定野菊花的含量，提取方法簡便，重復性良好，回收率高?？勺鳛楸局苿┑馁|(zhì)量控制標準。