王 晗，陳云婷，楊希凡，王中彥

(1.吉林省食品藥品認(rèn)證中心，吉林 長春 130062;2.沈陽藥科大學(xué)，遼寧 沈陽 110015)

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HPLC法測定姜蒲清眩片中丹酚酸B含量研究

王 晗1，陳云婷1，楊希凡1，王中彥2*

(1.吉林省食品藥品認(rèn)證中心，吉林 長春 130062;2.沈陽藥科大學(xué)，遼寧 沈陽 110015)

目的：采用高效液相色譜( HPLC)法測定姜蒲清眩片中丹酚酸B的含量。方法：色譜柱為Linksil C18柱 (4.6 mm×200 mm，5μm)，流動(dòng)相為甲醇-乙腈-甲酸-水(30∶10∶1∶59)，流速為1mL·min-1，柱溫為30℃，檢測波長286nm。結(jié)果：丹酚酸B在8.69～139.00 μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0.9995，平均加樣回收率為100.4%，RSD為1.13%。結(jié)論：采用HPLC法可測定姜蒲清眩片中丹酚酸B的含量，樣品處理方法簡單，測定方法準(zhǔn)確、可靠,專屬性強(qiáng)。

姜蒲清眩片；HPLC；丹酚酸B

姜蒲清眩片是源于中藥經(jīng)驗(yàn)方研制的復(fù)方新藥，主要用于治療糖尿病視網(wǎng)膜病變。該復(fù)方中藥成分復(fù)雜，質(zhì)量難以控制，其中丹酚酸B為主要有效成分。本研究建立HPLC法測定姜蒲清眩片中丹酚酸B的含量，方法準(zhǔn)確可靠，易于操作，可用于蒲清眩片的質(zhì)量控制。

1 儀器與材料

1.1 儀器

島津LC-10AT高效液相色譜儀，HW-2000工作站，SPD-10AV檢測器；KQ-4000KDE型超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；FA1104電子天平(上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司)。

1.2 材料

丹酚酸B對(duì)照品(批號(hào)：111562-201009)，購自中國食品藥品檢定研究院；甲醇、乙腈(色譜純，山東禹王實(shí)業(yè)有限公司)；甲酸(分析純，天津市富宇精細(xì)化工有限公司)；姜蒲清眩片(沈陽藥科大學(xué)，批號(hào)：110430、110501、110502)。

2 方法與結(jié)果

2.1 檢測波長的選擇

稱取丹酚酸B對(duì)照品適量，以適量75%的甲醇溶液定容，制備對(duì)照品溶液，行空白溶劑做對(duì)照，采用紫外可見分光光度法在200～600nm波長范圍內(nèi)掃描，以確定最大吸收波長。結(jié)果見圖1。

由圖1可以看出，丹酚酸B在287nm處有最大吸收，與《中國藥典》中規(guī)定的286nm相差不大，故確定286nm為檢測波長。

2.2 色譜條件[1]

色譜柱為Linksil C18(4.6 mm×200mm，5μm)；甲醇-乙腈-甲酸-水(30∶10∶1∶59)；流速1mL·min-1；柱溫30℃；檢測波長286nm。

圖1 丹酚酸B紫外吸收光譜

2.3 丹酚酸B對(duì)照品溶液的制備

取丹酚酸B對(duì)照品適量，加75%的甲醇稀釋制備濃度為347.52μg/mL的對(duì)照品儲(chǔ)備液，取儲(chǔ)備液2mL，置于10mL容量瓶中，加75%的甲醇稀釋制備69.5μg/mL的對(duì)照品溶液。

2.4 供試品溶液的制備

取姜蒲清眩片10片，研成細(xì)粉，精密稱取細(xì)粉約0.25g，置于具塞錐形瓶中，加70%的乙醇25mL，超聲處理30min，放冷后加70%的乙醇補(bǔ)足減失重量，濾過，取續(xù)濾液進(jìn)樣。

2.5 空白干擾試驗(yàn)

按姜蒲清眩片的制備工藝制備無丹參的陰性制劑，并按供試品溶液的制備方法處理陰性制劑作為陰性對(duì)照溶液，精密吸取陰性對(duì)照液、丹酚酸B對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μL，進(jìn)樣。

結(jié)果表明：陰性對(duì)照溶液在丹酚酸B對(duì)照溶液出峰處無色譜峰，不會(huì)干擾供試品中丹酚酸B的檢測。見圖2。

圖2 空白干擾試驗(yàn)HPLC色譜

2.6 線性關(guān)系考察

精密量取丹酚酸B對(duì)照品儲(chǔ)備液2.5mL置于100mL容量瓶，取2.5mL置于50 mL容量瓶，取2.5、5.0、7.5、10.0mL置于25mL容量瓶中，加75%的甲醇稀釋并定容，配制濃度分別為8.69、17.38、34.75、69.50、104.25、139.00μg/mL系列溶液，進(jìn)樣。

以峰面積(Y)對(duì)質(zhì)量濃度(X)進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程：Y=5 567.7X+742.19，r=0.999 5。結(jié)果表明，丹酚酸B在8.69～139.00μg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。結(jié)果見表1。

表1 線性關(guān)系考察結(jié)果

2.7 精密度試驗(yàn)

取供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，表明精密度良好。結(jié)果見表2。

2.8 重復(fù)性考察

取同一批號(hào)供試品粉末6份，按供試品溶液的制備方法處理后進(jìn)樣，計(jì)算含量，平均結(jié)果為4.113mg·g-1，RSD為0.87%，說明該方法重復(fù)性良好。

表2 精密度考察

2.9 溶液穩(wěn)定性

取供試品溶液，室溫下放置，分別在0、4、6、8、10、12h進(jìn)樣10μL，記錄峰面積。結(jié)果表明，供試品溶液在室溫條件下12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。結(jié)果見表3。

表3 溶液中穩(wěn)定性考察

2.10 加樣回收率

精密稱取己知含量的供試品粉末9份，分別加入丹酚酸B對(duì)照品溶液適量，制備高、中、低三組濃度樣品，按“2.4”項(xiàng)下方法處理后進(jìn)樣測定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表4。

表4 加樣回收率

2.11 樣品含量測定

對(duì)3批姜蒲清眩片樣品進(jìn)行測定，結(jié)果見表5。

表5 樣品測定結(jié)果 (n=3)

3 討論

本實(shí)驗(yàn)比較了3種品牌的色譜柱：Linksil C18(4.6mm×200mm，5μm)、Diamonsil C18(4.6mm×250mm，5μm)、 Kromasil C18(4.6mm×250mm，5μm)，結(jié)果表明供試品在3種色譜柱上均可較好地分離，表明該方法耐用性良好。在提取方法上，本實(shí)驗(yàn)比較乙醇回流提取和超聲提取方法，結(jié)果無顯著差異，因超聲提取操作簡便，故選用超聲提取方法。

本研究建立HPLC法測定姜蒲清眩片中丹酚酸B的含量，準(zhǔn)確可靠，專屬性強(qiáng)，易于操作，可用于蒲清眩片的質(zhì)量控制。

[1] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2009:71.

(責(zé)任編輯：李嵐春)

2015-07-14

王晗(1986-)，男，碩士，吉林省食品藥品認(rèn)證中心藥師，研究方向?yàn)樗巹W(xué)及藥學(xué)管理。

王中彥(1965-)，沈陽藥科大學(xué)副教授,碩士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)槲⒘７稚⑺幬镏苿┡c中藥緩控釋給藥體系設(shè)計(jì)。E-mail：wangzhongyanlab@163.com

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1673-2197(2015)20-0030-02

10.11954/ytctyy.201520013