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HOXA10啟動(dòng)子區(qū)基因多態(tài)性與子宮內(nèi)膜容受性的相關(guān)性研究

符免艾1，黃 林2，冼梅蘭3，周立花1，胡 英1，李 娟1，張?jiān)葡?

(1.海南省農(nóng)墾總醫(yī)院生殖科，海南 ?？?571100；2.海南醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)教研室，海南 ?？?571100；3.海南醫(yī)學(xué)院2012臨本4班，海南 海口 571199)

目的 探討HOXA10啟動(dòng)子區(qū)基因多態(tài)性對(duì)體外受精及胚胎移植(IVF-ET)患者子宮內(nèi)膜容受性的影響。方法將2013年7月至2014年7月在海南省農(nóng)墾總醫(yī)院行IVF-ET的不孕患者220例按照妊娠結(jié)局分為妊娠成功組(117例)和受孕失敗組(103例)，檢測(cè)兩組患者HOXA10基因啟動(dòng)子區(qū)SNP位點(diǎn)rs3779456多態(tài)性，利用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS19.0探討其基因型及等位基因與女性子宮內(nèi)膜容受性的關(guān)聯(lián)性。結(jié)果對(duì)TT基因型和(CC+CT)的比較結(jié)果及對(duì)CC基因型和(TT+CT)的比較結(jié)果顯示P均＜0.05，且TT在受孕并正常發(fā)育組和受孕失敗組的OR值為1.45。對(duì)等位基因T和C的分析顯示差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論基因型TT有利于子宮內(nèi)膜對(duì)胎兒的容受性，而CC則反之。

HOXA10；子宮內(nèi)膜容受性；胚胎移植技術(shù)；啟動(dòng)子；基因多態(tài)性

女性生殖能力的影響因素非常復(fù)雜，任何影響排卵、受精、著床的因素都可能導(dǎo)致女性生殖能力的下降，例如遺傳因素、解剖異常、內(nèi)分泌紊亂、免疫因素、感染及環(huán)境因素等都可導(dǎo)致不孕不育[1-2]。近些年來，遺傳因素在女性生殖能力中所起的作用越來越被醫(yī)學(xué)界所重視，諸多影響女性生殖能力的基因相繼被發(fā)現(xiàn),例如骨橋蛋白編碼基因、整合素基因、白細(xì)胞介素-1基因、雌激素受體基因、孕激素受體基因、同源框基因10等[3]。HOXA10屬于DNA結(jié)合蛋白，表達(dá)量隨月經(jīng)周期呈現(xiàn)周期性變化，且在著床窗口期表達(dá)增加，與胚胎著床密切相關(guān)[4]。

文獻(xiàn)表明該基因通過調(diào)節(jié)大量下游基因的表達(dá)而參與子宮內(nèi)膜容受性的建立過程，并調(diào)節(jié)胚胎的定位和粘附，使胚胎著床成功并正常生長發(fā)育。啟動(dòng)子是控制基因表達(dá)水平的重要元件，其堿基序列的變化將直接影響基因的表達(dá)量，進(jìn)而形成個(gè)體差異。單核苷酸多態(tài)性(SNP)是堿基序列變化最常見的形式，也是形成個(gè)體差異最基本的遺傳因素。HOXA10啟動(dòng)子區(qū)堿基序列SNP多態(tài)性可決定啟動(dòng)子的活性，影響HOXA10基因的表達(dá)量，進(jìn)而影響HOXA10所調(diào)節(jié)的下游基因的表達(dá)，最終影響女性的子宮內(nèi)膜容受性及生殖能力。本文通過體外受精與胚胎移植(IVF-ET)成功與不成功人群的病例比對(duì)研究進(jìn)一步探討其啟動(dòng)子結(jié)構(gòu)對(duì)子宮內(nèi)膜容受性的關(guān)聯(lián)性，為開展女性生殖能力評(píng)價(jià)及開展個(gè)體化醫(yī)療提供理論參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年7月至2014年7月在海南省農(nóng)墾總醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心接受IVF-ET并在3次或3次內(nèi)移植結(jié)束后有妊娠結(jié)局的不孕患者220例，按照妊娠結(jié)局將患者分為成功受孕并繼續(xù)妊娠組117例，受孕失敗組103例。排除標(biāo)準(zhǔn)：排除子宮內(nèi)膜異位癥等其他子宮問題導(dǎo)致的不孕患者，排除因男方因素導(dǎo)致的不孕患者，成功受孕并流產(chǎn)組數(shù)據(jù)不納入本文分析。分組評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)：3次以內(nèi)(含3次)成功受孕且胎兒正常發(fā)育者歸為妊娠成功組，3次以內(nèi)(含3次)成功受孕但發(fā)生生化妊娠或者妊娠過程中胎兒停止發(fā)育、流產(chǎn)等不能成功產(chǎn)下嬰兒者歸為成功受孕并流產(chǎn)組，3次以內(nèi)(含3次)未能移植成功者為受孕失敗組。

1.2 基因多態(tài)性檢測(cè)方法 采集患者空腹靜脈血于EDTA抗凝管中，利用血液基因組提取試劑盒提取患者基因組DNA，DNA編號(hào)排序后委托生物公司進(jìn)行多態(tài)性分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 利用Excel錄入患者信息，利用SPSS19.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，對(duì)組間差異采用四表格卡方檢驗(yàn)，P＜0.05認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。優(yōu)勢(shì)比(OR值)為受孕組中某基因型與其他基因型發(fā)生率的比值/失敗組中該基因型與其他基因型發(fā)生率的比值，OR值大于1說明該基因型有利于子宮內(nèi)膜對(duì)胎兒的容受性，反之則不利。

2 結(jié)果

如表1所示，兩組不孕患者中均可檢驗(yàn)出TT、CT、CC三種基因型，卡方檢驗(yàn)結(jié)果為P=0.27，大于檢驗(yàn)水準(zhǔn)，說明三種基因型在組間的差異不顯著。對(duì)TT基因型和(CC+CT)的比較結(jié)果及對(duì)CC基因型和(TT+CT)的比較結(jié)果顯示P均小于0.05，且TT在受孕并正常發(fā)育組和受孕失敗組的OR值為1.45，說明基因型TT有利于子宮內(nèi)膜的容受性。對(duì)等位基因T和C的分析顯示差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 IVF-ET患者rs3779456多態(tài)性與妊娠結(jié)局的關(guān)聯(lián)分析[例（%）]

3 討論

生殖是物種繁衍的正常生理現(xiàn)象，孕育后代是一個(gè)女性基本的權(quán)利和義務(wù)，也是維持家庭穩(wěn)定和幸福及社會(huì)發(fā)展的必要因素，尤其是在我國，不孕不育往往給家庭及其成員帶來極大的痛苦，甚至?xí)?dǎo)致家庭破裂。目前我國有10%～15%的婦女患有不孕不育癥，研究女性生殖的相關(guān)機(jī)制并采取針對(duì)性的干預(yù)措施，將可能成為解決這一難題的必要途徑。

有研究顯示HOXA10基因的表達(dá)在月經(jīng)周期中呈現(xiàn)波動(dòng)，其中黃體中期呈高表達(dá)，特異性表達(dá)于子宮內(nèi)膜腔上皮細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞，且受雌激素調(diào)控，這與人類的植入窗開放同步[5]。多項(xiàng)對(duì)不明原因的不孕婦女的子宮內(nèi)膜中HOXA10的研究發(fā)現(xiàn)，不孕婦女較自然懷孕婦女子宮內(nèi)膜中mRNA的表達(dá)量明顯降低[6-7]。此外，有學(xué)者等研究發(fā)現(xiàn)[8-9]，當(dāng)HOX10基因表達(dá)量下降時(shí)，受其直接調(diào)節(jié)的下游基因的表達(dá)量也隨之下降。因此我們認(rèn)為，HOXA10基因的表達(dá)量與該基因功能的實(shí)現(xiàn)密切相關(guān)，從而直接影響女性的生殖能力。單核苷酸多態(tài)性(Single nuclear polymorphism，SNP)是基因組DNA最常見的形式，也是形成個(gè)體差異最基本的遺傳因素。從理論上推斷，啟動(dòng)子區(qū)堿基序列SNP多態(tài)性可能會(huì)決定啟動(dòng)子的活性，影響HOXA10基因的表達(dá)量，進(jìn)而影響HOXA10所調(diào)節(jié)的下游基因的表達(dá)，最終影響女性的生殖能力。

我們對(duì)220位具有妊娠結(jié)局的不孕患者進(jìn)行了基因檢測(cè)分析，HOXA10基因啟動(dòng)子區(qū)的一個(gè)多態(tài)位點(diǎn)rs3779456(T→C突變)存在TT、CT、CC三種基因型，其中TT基因型在成功受孕組中出現(xiàn)的頻率是受孕失敗組的1.45倍，猜測(cè)該基因型可能有利于子宮內(nèi)膜容受性的提高，而CC則可能不利之。在對(duì)等位基因T和C的組間差異進(jìn)行χ2檢驗(yàn)時(shí)，P=0.07，該值接近檢驗(yàn)水準(zhǔn)，因此猜測(cè)T和C有可能存在組間差異。但猜測(cè)的證實(shí)需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量進(jìn)行研究。

[1]高愛梅,郭東曉,裴凌云,等.不孕不育癥影響因素的研究[J].中國婦幼保健,2011,26(6):3280-3281,3290.

[2]王思慧,傅 萍,姜 萍.不孕不育與遺傳學(xué)相關(guān)因素的研究進(jìn)展[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志,2012,20(1):126-128.

[3]魏麗坤,張 雷,王靄明.子宮內(nèi)膜容受性的形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)相關(guān)標(biāo)志[J].生殖醫(yī)學(xué)雜志,2008,17(1):74-78.

[4]Zanatta A,Rocha AM,Carvalho FM,et al.The role of the Hoxa10/HOXA10 gene in the etiology of endometriosis and its related infertility:a review[J].J Assist Reprod Genet,2010,27 (12):701-710.

[5]Taylor A,Arici D,Olive A,et al.HOXA10 is expressed in re sponse to sex steroids at the time of implantation in the hu man endometrium[J].ClinInvest,1998,101(7):1379-1384.

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Investigation on the relationship of polymorphism of Hox110 promoter and the endometrial receptivity.

FU Mian-ai1,HUANG Lin2,XIAN Mei-lan3,ZHOU Li-hua1,HU Ying1,LI Juan1,ZHANG Yun-xia2.
1.Department of Reproduction,Hainan Provincial Nongken General Hospital,Haikou 571100,Hainan,CHINA;2.Department of Biochemistry,Hainan Medical University,Haikou 571100,Hainan,CHINA;3.Class 4,2012 Medical Student,Hainan Medical University,Haikou 571199,Hainan,CHINA

Objective To investigate the effect of polymorphism of the HOXA10 promoter on the endometrial receptivity of patients who underwent in vitro fertilization-embryo transfer(IVF-ET).MethodsTwo hundred and twenty infertile patients who underwent IVF-ET from July 2013 to July 2014 in Hainan Provincial Nongken General Hospital were divided into two groups according to pregnancy(117 cases,the success group)or not(103 cases,the failure group).The polymorphism of rs3779456 located in the HOXA10 promoter was detected,and the data were analyzed by SPSS19.0 to investigate the correlation between the genotypes and the endometrial receptivity of patients.ResultsThe difference between TT and(CC+CT)was significant with P＜0.05,and the difference between CC and (TT+CT)was significant as well.The OR value of TT frequency in the success group and the failure group was 1.45. There was no significant difference between the frequency of allele T and C(P＞0.05).ConclusionTT is beneficial to the endometrial receptivity,while CC may be on the contrary.

Endometrial receptivity;In vitro fertilization-embryo transfer(IVF-ET);Promoter;Gene polymorphism

R711

A

1003—6350（2015）15—2221—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.15.0802

2015-04-10)

海南省衛(wèi)生廳科研項(xiàng)目(編號(hào)：13A200036)

張?jiān)葡?。E-mail：zhangyunxia1977@qq.com