張曉偉 劉香云 張紅利

血站是采集、檢驗、制備、儲存血液，并向臨床提供合格用血的醫(yī)療衛(wèi)生機構(gòu)，保證血液質(zhì)量安全是血站的職責［1］。2013年4月26日，檢驗科在工作過程中，發(fā)現(xiàn)4月25日采集的同為O型的兩份血樣中，初檢與復檢均發(fā)現(xiàn)一檢測管(稱其為A，以下同)抗-HIV有反應性，對應的血袋(A1)小辮抗-HIV亦有反應性;另一檢測管(B)抗-HIV反應性，對應的血袋小辮(B1)無反應性。為了探究問題出現(xiàn)的原因，我們設(shè)計了本實驗。

1 資料與方法

1.1 一般資料 我們將與檢測管(B)同車采集的20袋血液重新剪樣，用兩種HIV試劑進行了抗-HIV檢測，所有留樣檢測結(jié)果均為無反應性，把與檢測管同血型同日檢測的66袋同血型血液(除外檢測管A及A1)重新剪血樣，用兩種HIV試劑進行了抗-HIV檢測，66個血檢測結(jié)果均為無反應性，由此可以得出，該檢測管(B)的抗-HIV反應性是孤立，我們找不到與之對應的血袋的。在采血過程中，有可能發(fā)生的情況是:采血者違規(guī)操作，誤將檢測管(B)留了(A)的樣，或檢測管(B)的樣沒有留夠加一定量的(A)樣補足。做DNA試驗驗證檢測管(B)和血袋B1的同源性、檢測管(B)與(A)是否具有同源性是最簡單的方法，遺憾的是聯(lián)系省內(nèi)多家專業(yè)檢驗機構(gòu)(包括公安刑偵部門)，都以抗-HIV反應性為由拒絕檢測。為此，我們采取了RH血型小因子方法進行了區(qū)分。

1.2 試劑

1.2.1 上海血液生物醫(yī)藥有限責任公司生產(chǎn)抗-C、抗-c、抗-E、抗-e，北京金豪生物藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)抗-D，檢測用血型試劑均在有效期內(nèi)使用。

1.2.2 北京金豪生物藥業(yè)股份有限公司的抗-HIV檢測試劑，批號:2012111031。

1.2.3 北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司的HIV-Ag/Ab檢測試劑，批號:H20130101。

1.3 方法

1.3.1 通過Rh血型檢測驗證兩個檢測管是否來自不同獻血者，以及與血袋的同源性;

1.3.2 通過全血標本混合后檢測Rh血型差別，排除人為留樣不足后，補充留樣時錯誤造成標本污染;

1.3.3 找到獻血者使用不同抗凝劑對血液進行抗凝;1.3.4 模擬實驗:將同時檢測反應性血漿，在滅活后，分別取 5 μl、10 μl、20 μl，30 μl，40 μl，50 μl加入無反應性5 ml血漿中，同樣使用兩種HIV試劑進行ELISA檢測。

2 結(jié)果

2.1 經(jīng)過檢測發(fā)現(xiàn)，該檢測管與血袋檢測抗-HIV均有反應性的標本，檢測管與血袋Rh血型均為CCDee;檢測管檢測抗-HIV有反應性而血袋檢測抗-HIV無反應性的標本，檢測管與血袋Rh血型均為CcDEe;檢測結(jié)果能夠證實兩個檢測管來自不同獻血者。

2.2 模擬以Rh血型為CCDee的全血混入Rh血型為CcDEe的全血標本中，以1∶6比例混合，混合后的標本檢測c、E抗原時，能發(fā)現(xiàn)明顯的游離紅細胞;而平行檢測，檢測管檢測抗-HIV有反應性而血袋檢測抗-HIV無反應性的檢測管樣本c、E抗原時，沒有發(fā)現(xiàn)明顯的游離紅細胞，能夠排除檢測管留樣不足后補充留樣的情況。

2.3 與獻血者溝通，抽取獻血者的血液分別用肝素、EDTA和MAP等抗凝，對抗凝的血液分別進行血液檢測，檢測結(jié)果一致，均為無反應性，排除了該份標本因抗凝劑造成假反應性的可能性。

2.4 模擬實驗結(jié)果，不同劑量反應性血漿混入5 ml血漿抗-HIV均有反應性，并且檢測結(jié)果的S/CO值很相近，能夠肯定在操作中如果有大于5 μl反應性血漿，不小心污染了另一支5 ml血漿的檢測管，完全可以導致另一支檢測管亦出現(xiàn)抗-HIV反應性。見表1。

表1 不同劑量反應性血漿混入5 ml血漿檢測管ELISA檢測結(jié)果分析

3 討論

排除采血過程中的污染。為了徹底查清檢測管(B)抗-HIV反應性原因，我們派人驅(qū)車百里，找到了檢測管(B)的主人，即25日獻血者本人。在進行耐心的說服解釋工作后，采集兩份血樣標本，回站后檢驗科進行了全面檢測，HIV試劑檢測為無反應性，且所有結(jié)果檢測結(jié)果均為合格。獻血者本人的血是清白的，但獻血者的檢測管(B)卻是抗-HIV反應性，而且抗-HIV結(jié)果呈強反應性。用RH血型小因子方法得出結(jié)論，檢測管(B)與對應血袋小辮(B1)具有同源性。由此可得出，采血過程中的污染可以排除。

在檢驗過程中是否存在污染。排除體采環(huán)節(jié)污染的因素后，實驗室是否存在污染應該認真探究。通過對檢驗過程的反復回放，發(fā)現(xiàn)檢驗人員在生物安全柜中檢測管開蓋的過程，存在單手同時開啟兩個以上檢測管的情況。而巧合的是，離心后的檢測管A和檢測管B，為同一批次接受檢驗，無法排除單手操作在開蓋過程中的震動(因檢測管內(nèi)為負壓，有時較難開啟)或放入試管架時的震動，加之生物安全柜的負壓更易導致液滴的飛濺，導致檢測管A微量的血漿飛濺入檢測管B，而我們設(shè)計的試驗證明5 μl的陽性血漿即可造成檢驗結(jié)果抗-HIV反應性，也驗證了這一點。

血站檢驗科在出現(xiàn)檢測管結(jié)果抗-HIV反應性后，應留取對應母袋血液進行檢測結(jié)果確認，如有差異，必須進行原因分析，首先通過母袋血液的檢測結(jié)果以及該批同血型母袋血液的檢測結(jié)果，判斷采血護士在留取標本的工作中是否出現(xiàn)差錯;再使用不同抗凝劑抗凝血液的檢測結(jié)果，排除抗凝劑的影響因素;如果不是以上兩種原因，檢驗科應考慮哪個工作環(huán)節(jié)存在漏洞。

血站檢驗科不能像醫(yī)院的檢驗科一樣只對檢驗標本負責，血站的工作性質(zhì)是必須保證血液質(zhì)量，同時也要對無償獻血者的獻血權(quán)利負責，必須對我們給出的結(jié)果負責，對異常結(jié)果必須查明原因，心知肚明。雖然我們無法排除試劑的假陽性，以及窗口期的問題，但是對于出現(xiàn)的血樣污染必須重視，檢驗科在標本再次混勻、離心、開蓋、擺架、轉(zhuǎn)移過程中必須小心操作，嚴防標本飛濺，灑漏［2］。特別是在生物安全柜中開蓋，由于存在負壓，必須逐一小心開啟，嚴禁手握兩個或多個試管同時開蓋，以防出現(xiàn)血樣污染，造成檢驗結(jié)果差異或操作者自身暴露［3］。

通過上述分析，雖然只是一項違規(guī)操作，但是值得引起我們注意，也有必要提醒其他血站對此加以重視，嚴格操作規(guī)程中的每一個細小環(huán)節(jié)。我們必須在保證臨床用血安全的同時，在采血形式緊張的情況下，一定要對我們檢測的每一份血液負責，為獻血者負責，最大限度的保證血液安全和減少血液浪費。

1 樊鳳艷，張松，劉曉莉.Tn多凝集致ABO血型鑒定疑難1例.臨床輸血與檢驗，2012，14:83-84.

2 馮秋霞，楊忠思，潘海平，等.青島地區(qū)首次、重復無償獻血者HIV流行率及血液篩查后殘余風險度評估.中國輸血雜志，2012，25:868-869.

3 孫蕊娟，范乃權(quán)，桂麗，等.咸陽地區(qū)無償獻血者抗-HIV感染情況分析.中國輸血雜志，2013，26:159-160.