何亞利，梁順容，鐘一梅

（江門市五邑中醫(yī)院檢驗科，廣東江門 529000）

T淋巴細胞亞群與炎性因子在評估再生障礙性貧血病情及預后中的應用

何亞利，梁順容，鐘一梅

（江門市五邑中醫(yī)院檢驗科，廣東江門 529000）

目的研究T淋巴細胞亞群與炎性因子檢測在再生障礙性貧血（AA）病情及預后評估中的價值。方法選取本院收治的40例AA患者作為AA組，并進一步分為急性再生障礙性貧血（AAA）組和慢性再生障礙性貧血（CAA）組；同時選取同期于本院體檢的40例健康者作為對照組。比較兩組患者的血常規(guī)指標、外周血T淋巴細胞亞群百分率和血清炎性因子水平。結果AA組患者外周血輔助性T淋巴細胞（Th）Th1、Th17細胞百分率及Th1/Th2、Th17/調節(jié)性T淋巴細胞（Treg）比例均高于對照組（P＜0.05），Th2、Treg細胞百分率低于對照組（P＜0.05）；AAA組外周血Th1、Th17細胞百分率及Th1/Th2、Th17/Treg比例高于CAA組，Th2、Treg細胞水平低于CAA組（P＜0.05）。AA組患者血清白細胞介素（IL）-2、IFN-γ、IL-17水平高于對照組，IL-4、IL-6、IL-10水平低于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；AAA組血清中IL-2、干擾素-γ（IFN-γ）、IL-17水平高于CAA組，IL-4、IL-6、IL-10水平低于CAA組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；血紅蛋白（Hb）水平、PTL與Th1、Th17細胞水平及IL-2、IFN-γ、IL-17水平呈負相關，與Th2、Treg細胞水平及IL-4、IL-6、IL-10水平呈正相關。結論AA患者外周血中T淋巴細胞亞群百分率及血清炎性因子水平存在異常，而且與反映病情嚴重程度及預后的指標具有良好的相關性。

再生障礙性貧血； 輔助性T淋巴細胞； 調節(jié)性T淋巴細胞； 炎性因子

再生障礙性貧血（AA）是血液系統(tǒng)的常見疾病，是骨髓造血功能衰竭所致的全血細胞減少綜合征，臨床主要表現(xiàn)為貧血、出血、感染，無肝脾淋巴結腫大，該病的發(fā)生與細胞免疫功能異常密切相關［1］。T淋巴細胞是調節(jié)細胞免疫功能的重要細胞，不同的T淋巴細胞亞群在細胞免疫調節(jié)過程中發(fā)揮了不同的作用［2］。筆者分析了T淋巴細胞亞群與炎性因子在評估AA病情及預后中的應用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年4月至2014年9月本院收治的40例AA患者作為AA組，所有患者均符合《血液病診斷及療效標準》中AA的診斷標準［3］；選取同期于本院進行體檢且合格的40例健康者作為對照組。兩組人群均在告知研究事項后簽署知情同意書。AA組：男24例、女16例，年齡（36.92± 5.52）歲，再按照病情嚴重程度分為急性再生障礙性貧血（AAA）和慢性再生障礙性貧血（CAA）亞組。AAA組：20例，其中男13例、女7例，年齡（37.12±5.61）歲；CAA組：20例，其中男11例、女9例，年齡（36.86±5.48）歲。對照組：共40例，男23例、女17例，年齡（37.20±4.93）歲。各組人群性別比、年齡等一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 血常規(guī)檢測 采集兩組患者的外周靜脈血，采用Sysmex XE-5000血常規(guī)分析儀檢測血紅蛋白（Hb）和血小板計數（PLT），Hb檢測采用SLS-血紅蛋白測定法，PLT采用RF/DC測定法。

1.2.2 T淋巴細胞亞群檢測 采集兩組患者的外周血5 mL，肝素抗凝后加入淋巴細胞分離液，3 000 r/min離心10 min后分離得到外周血單核淋巴細胞后首先孵育FITC標記的CD4抗體，PBS洗滌后加入破膜劑，破碎細胞后加入PE標記的干擾素γ（IFN-γ）、白細胞介素（IL）10、IL-17及CD25抗體，分別用于檢測輔助性T淋巴細胞（Th）Th1、Th2、Th17、調節(jié)性T淋巴細胞（Treg）；室溫孵育30 min后用流式細胞儀檢測不同T淋巴細胞亞群的百分率。

1.2.3 炎性因子的檢測 采集兩組患者的外周靜脈血5 m L，室溫靜置30 min后于3 000 r/min離心10 min，收集血清后采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清干擾素（IFN-γ）、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17水平。試劑盒均為美國Biomedical公司產品，檢測方法為酶聯(lián)免疫法。

1.3 統(tǒng)計學處理 采用SPSS18.0軟件錄入和分析數據，計量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗，相關性分析采用一元線性回歸，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 外周血T淋巴細胞亞群 AA組患者外周血中Th1、Th17細胞百分率及Th1/Th2、Th17/Treg比例均高于對照組，而Th2、Treg細胞百分率低于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；AAA組外周血Th1、Th17細胞百分率及Th1/ Th2、Th17/Treg比例均高于CAA組，而Th2、Treg細胞百分率均低于CAA組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 各組受試者外周血T淋巴細胞亞群百分率或比值的比較（±s）

*：P＜0.05，與對照組比較；△：P＜0.05，與CAA組比較。

組別 n Th1（%） Th2（%） Th1/Th2 Th17（%） Treg（%） Th17/Treg AA組 40 25.48±2.98* 10.87±1.48* 2.34±0.32* 1.84±0.25* 8.84±0.95* 0.21±0.03*AAA組 20 27.32±3.45*△ 8.78±1.21*△ 2.54±0.42*△ 2.02±0.21*△ 7.65±0.75*△ 0.25±0.05*△CAA組 20 24.12±2.62* 11.32±1.54* 2.26±0.06* 1.73±0.23* 9.54±1.02* 0.19±0.04*對照組40 18.45±2.14 16.63±1.97 1.11±0.13 1.14±0.15 14.78±1.92 0.08±0.01

2.2 血清炎性因子水平 AA組患者血清IL-2、IFN-γ、IL-17水平高于對照組，IL-4、IL-6、IL-10水平低于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；AAA組血清IL-2、IFN-γ、IL-17水平高于CAA組，IL-4、IL-6、IL-10水平低于CAA組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2各組受試者血清炎性因子水平比較（pg/mL，±s）

*：P＜0.05，與對照組比較；△：P＜0.05，與CAA組比較。

IL-2 IL-4 IL-6 IL-10 IL-17 AA組 40 17.52±2.04*205.52±27.72* 4.74±0.22* 11.38±1.52* 13.49±1.85* 17.91±2.15組別 n IFN-γ * AAA組 20 19.12±3.21*△215.14±32.25*△4.52±0.14*△ 10.21±1.35*△12.12±1.65*△19.21±3.21*△CAA組 20 15.68±2.54*185.94±26.54* 5.12±0.23* 13.12±1.46* 14.65±2.01* 16.35±2.65*對照組40 10.48±1.28 127.48±17.58 7.58±0.92 17.79±2.34 22.29±2.58 7.85±0.94

2.3 血常規(guī)指標與T淋巴細胞百分率及炎性因子水平的相關性 Hb水平、PTL計數與Th1、Th17細胞百分率及IL-2、 IFN-γ、IL-17水平呈負相關，與Th2、Treg細胞百分率及IL-4、IL-6、IL-10水平呈正相關，見表3。

3 討 論

細胞免疫功能紊亂是造成AA發(fā)生和發(fā)展的關鍵環(huán)節(jié)；而CD4+T淋巴細胞作為體內最為重要的Th，是機體免疫功能調控的中心。Th1細胞和Th2細胞是最早被認識的兩類Th細胞亞群，正常條件下，體內Th1和Th2細胞的數目和功能互相影響并處于動態(tài)平衡的狀態(tài)，維持機體正常的細胞免疫功能和體液免疫功能［4］；當Th1/Th2細胞發(fā)生極化時，Th細胞不同亞群的平衡被打破、細胞免疫功能亢進，進而抑制造血干細胞的功能［5］。Th17細胞是近年來新發(fā)現(xiàn)的一類Th細胞，主要分泌IL17、IL-21、IL-23等細胞因子。在體內，Th17細胞與Treg互相調節(jié)并維持平衡；Treg的細胞表面表達CD4、CD25及CD39，經T細胞抗原受體（TCR）介導的信號激活后能夠抑制效應T淋巴細胞、維持免疫耐受［6］。Th17細胞功能增強、Treg的免疫抑制功能減弱會導致造血功能損傷［7］。AA組患者外周血Th1、Th17細胞百分率高于對照組，Th2、Treg細胞百分率低于對照組，且AAA組與CAA組間比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

如前所述，不同的T淋巴細胞亞群可以分泌不同的炎性細胞因子，進而通過細胞因子來發(fā)揮對細胞免疫功能的調控作用。Th1細胞主要分泌IL-2、IFN-γ并增強細胞免疫反應［8］；Th2細胞主要分泌IL-4、IL-6并主導體液免疫反應、抑制細胞免疫反應［9］。Treg細胞主要分泌IL-10、轉化生長因子（TGF）β，兩者均是免疫系統(tǒng)中十分重要的抑制因子，不僅可以直接抑制效應T細胞的功能，還能夠抑制Th17細胞的分化和成熟［10］；IL-17是Th17細胞分泌的最重要的炎性因子，能夠通過活化下游信號分子絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）、NF-κB來造成炎性細胞募集、抑制造血功能、破壞造血組織［11］。本研究分析了血清中T淋巴細胞分泌產生的炎性因子水平，AA組患者血清IL-2、IFN-γ、IL-17水平高于對照組，IL-4、IL-6、IL-10水平低于對照組，而且AAA患者與CAA患者間比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。這提示AA患者體內存在Th1細胞和Th17細胞的功能亢進，Th2和Treg細胞的功能減弱，而且與病情嚴重程度有關。

AA最主要臨床表現(xiàn)是嚴重的貧血、感染和出血征象，細胞免疫異常對骨髓造血功能的抑制直接表現(xiàn)為Hb水平和PLT減少。在臨床實踐中，Hb水平和PLT是判斷AA患者病情及預后的常用指標［12］。為了明確T淋巴細胞亞群及炎性因子水平對AA病情及預后的評估價值，筆者分析了血常規(guī)指標與T淋巴細胞及炎性因子水平的相關性，結果顯示：Hb水平、PTL計數與Th1、Th17細胞百分率及IL-2、IFN-γ、IL-17水平呈負相關，與Th2、Treg細胞百分率及IL-4、IL-6、IL-10水平呈正相關，與國內外文獻報道基本一致［13-14］。

本研究表明，AA患者外周血中T淋巴細胞亞群百分率及血清炎性因子水平存在異常，與反映病情嚴重程度及預后的指標具有良好的相關性。本研究的局限性在于選擇樣本量較少，缺少對相關性的深入研究，有待于今后擴大樣本加以完善。

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Application of T lymphocyte subsets and inflammatory factors in evaluating severity and prognosis of aplastic anemia

He Yali，Liang Shunrong，Zhong Yimei

（Department of Clinical Laboratory，Jiangmen Wuyi Traditional Chinese Medicine Hospital，Jiangmen，Guangdong 529000，China）

ObjectiveTo study the application value of T lymphocyte subsets and inflammatory factors in evaluating severity and prognosis of aplastic anemia.Methods40 patients with aplastic anemia in the hospital were enrolled in the study as AA group，which was further divided into acute aplastic anemia（AAA）subgroup and chronic aplastic anemia（CAA）subgroup.In addition to that，40 healthy people who

physical examination in the hospital during the same period were enrolled in the study as control group.Then blood routine tests were performed，T lymphocyte subsets content in peripheral blood and serum inflammatory factor content were detected and the results were compared.ResultsTh1，Th17 contents and Th1/Th2，Th17/Treg ratio in AA group were higher than those in control group（P＜0.05），while Th2，Treg contents were lower（P＜0.05）；Th1，Th17 contents and Th1/ Th2，Th17/Treg ratio in AAA group were higher than those in CAA group（P＜0.05），while Th2，Treg cells contents were lower. Serum IL-2，IFN-γ，IL-17 contents in AA group were higher than those in control group（P＜0.05），while IL-4，IL-6，IL-10 contents were lower（P＜0.05）；serum IL-2，IFN-γ，IL-17 contents in AAA group were higher than those of CAA group，while IL-4，IL-6，IL-10 contents were lower.Hb，PTL contents were negatively correlated with Th1，Th17 contents and serum IL-2，IFN-γ，IL-17 contents，while positively correlated with Th2，Treg cells contents and serum IL-4，IL-6，IL-10 contents.ConclusionPeripheral blood T lymphocyte subsets and serum inflammatory factors contents in aplastic anemia are abnormal and are correlated with the severity and prognosis related indicators.

aplastic anemia； helper T cell； regulatory T cells； inflammatory factor

10.3969/j.issn.1673-4130.2015.17.026

A

1673-4130（2015）17-2516-03

2015-01-08）

何亞利，主管檢驗技師，主要從事臨床血液學與檢驗的研究。