趙增虎，王明賢，李鳳玉，張 海，王小燕

放射性肝損傷是原發(fā)性肝癌放射治療最常見的并發(fā)癥之一［1］，重者出現(xiàn)肝儲備功能下降、肝纖維化，更嚴(yán)重者出現(xiàn)腹水、肝衰竭，甚至危及生命。本研究通過觀察益氣活血中藥對放射性肝損傷家兔血清轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)和血清內(nèi)皮素-1(ET-1)的影響，探討其在防治放射性肝損傷中的作用。

1 資料與方法

1.1 動物模型制備 20只成年家兔(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院動物實(shí)驗(yàn)中心提供)，雄雌不限，體重2．6～3．5 kg。隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對照組，每組10只，兩組均給予50 Gy X線照射，受照體積為自體肝臟的50%。照射前的定位、靶區(qū)勾畫、照射計(jì)劃制定及實(shí)施照射的過程均同三維適形放療:將家兔用10%水合氯醛［4～5 ml/(kg·F)］腹腔麻醉后，仰臥固定于特制的木板上，在64排CT下模擬定位，將圖像傳至有計(jì)劃系統(tǒng)的電腦，先勾畫全肝并計(jì)算肝臟的體積，再勾畫受照肝臟，從肝左葉開始，使受照肝臟體積為自體肝臟的50%，用6MV-X直線加速器前后兩野對穿同照，5 Gy/次，3次/周，總照射劑量50 Gy/10 F，每次照射定位采用計(jì)劃引導(dǎo)及體表靶區(qū)圖像相結(jié)合方法，力爭做到每次照射位置具有可重復(fù)性。據(jù)臨床研究證實(shí)，肝癌放療根治量為50～60 Gy/25～30 F，給予成年家兔50%肝臟照射50 Gy/10 F，3次/周，將不會出現(xiàn)嚴(yán)重放射性肝損傷，存活時間較長［2］。

1.2 中藥制備及給藥方式 自制益氣活血中藥，取黃芪 300 g，沙參 200 g，女貞子 200 g，當(dāng)歸120 g，香附 200 g，紅花 100 g，生地黃 200 g，川芎100 g，百部120 g，瓜蔞150 g，杏仁100 g，甘草60 g(解放軍251醫(yī)院中藥房)，水煎、醇沉、濃縮、分裝、消毒備用、生藥含量4 g/ml。實(shí)驗(yàn)組每日灌藥10 ml，對照組每日灌生理鹽水10 ml，其余飼養(yǎng)條件相同。

1.3 觀察指標(biāo)及檢測方法 X線照射前及X線照射后第 1、2、3、4 周分別采后腿靜脈血查 TGF-β1、ET-1，按酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測試劑盒說明書操作;X線照射4周后處死實(shí)驗(yàn)兔，取受照射肝臟部分組織病理檢查。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 17．0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，采用t檢驗(yàn)，α=0．05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 TGF-β1、ET-1 X 線照射前兩組 TGF-β1、ET-1比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);兩組X線照射后1周 ET-1 和照射后 2、3、4 周 TGF-β1、ET-1 均高于照射前(P＜0.05，P＜0.01);實(shí)驗(yàn)組照射后2周 TGF-β1和 X 線照射后 3、4 周 TGF-β1、ET-1 均低于對照組(P＜0.05，P＜0.01)。見表1。

表1 兩組放射性肝損傷家兔X線照射前、后血清轉(zhuǎn)化生長因子-β1和內(nèi)皮素-1變化(x±s)

2.2 肝臟病理檢查 實(shí)驗(yàn)組肝竇周圍成纖維細(xì)胞、肝靜脈閉塞征及肝細(xì)胞水腫變性壞死程度較對照組明顯減輕。見圖1。

圖1 兩組放射性肝損傷家兔肝臟組織病理變化(HE×100)A．實(shí)驗(yàn)組;B．對照組

3 討論

放射性肝損傷早期病理表現(xiàn)為肝竇內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，肝竇充血、出血，Disse隙水腫，肝臟微循環(huán)障礙［3］，然后出現(xiàn)肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞的損傷［4］，最后出現(xiàn)肝纖維化，晚期主要病理特征為肝靜脈閉塞征［5］。中醫(yī)認(rèn)為，射線是熱毒之邪，可損人體正氣、耗人體陰血，氣滯則血瘀，血瘀則不暢，組織間微循環(huán)障礙，肝細(xì)胞供血減少，細(xì)胞代謝紊亂，會出現(xiàn)肝細(xì)胞變性壞死。有研究報(bào)道，血瘀的本質(zhì)是纖維結(jié)締組織增生和肝微循環(huán)障礙［6］。

益氣活血中藥可以行氣活血，氣為血之帥，氣行則血行，血行則細(xì)胞代謝旺盛，放射損傷減少，經(jīng)臨床研究證實(shí)，益氣活血中藥能有效防治X線對肝臟儲備功能的損害［7］，并通過改善肝臟微循環(huán)減輕放射性肝損傷［8］。本方中黃芪含有豐富的谷氨酸、甘氨酸，具有保護(hù)和修復(fù)肝細(xì)胞膜的作用，改善肝臟微循環(huán)，促進(jìn)肝細(xì)胞增生，抑制膠原合成促進(jìn)其降解，達(dá)到抗纖維化作用［9］。川芎嗪是川芎的有效成分之一，能消除自由基、抗脂質(zhì)氧化及抑制成纖維細(xì)胞分裂增殖，減輕放射性肝損傷［10］。甘草酸是甘草的主要成分，具有類糖皮質(zhì)激素作用，有保肝、抗炎、抗氧化作用，還可阻斷TGF-β信號傳導(dǎo)，抑制肝星狀細(xì)胞(HSC)的激活，減少Ⅰ型膠原生成，發(fā)揮抗纖維化作用［11］。甘草酸還可通過減少微循環(huán)變化和阻止內(nèi)皮素相互作用，緩解肝臟微循環(huán)障礙誘導(dǎo)的肝損傷，減少肝細(xì)胞凋亡［12］。女貞子可減輕肝細(xì)胞變性壞死，促進(jìn)肝細(xì)胞再生，降低丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶［13］?？嘈尤受諡榭嘈尤实挠行С煞?，可通過抑制HSC-T6細(xì)胞分泌功能，促進(jìn)凋亡基因Bax的表達(dá)，降低Bcl-2/Bax比值，使活化的HSC-T6細(xì)胞提前進(jìn)入凋亡程序從而實(shí)現(xiàn)抗纖維化的作用［14］。因此益氣活血中藥可通過擴(kuò)張血管、增加血流、降低血液黏稠度、改善微循環(huán)、減輕血管內(nèi)皮細(xì)胞水腫、抑制纖維組織增生、減輕血管閉塞［15］，達(dá)到防治放射性肝損傷效果。

內(nèi)皮素是肝血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌的血管活性物質(zhì)，其中ET-1是目前所知體內(nèi)最強(qiáng)而且唯一可作用于直徑＜50 nm毛細(xì)血管的縮血管物質(zhì)，高水平的ET-1能使門靜脈和肝血竇持續(xù)收縮進(jìn)而引發(fā)肝循環(huán)及微循環(huán)障礙，造成肝組織損傷［16］。TGF-β1是調(diào)控肝纖維化發(fā)生、發(fā)展的核心物質(zhì)［17］，能使HSC分泌膠原纖維明顯增多，抑制膠原酶的降解，促進(jìn)纖維連接蛋白及蛋白多糖的合成［18］。肝損傷時HSC、Kupffer細(xì)胞及其他細(xì)胞通過自分泌或旁分泌的方式產(chǎn)生大量TGF-β1，炎癥或損傷過程中釋放的纖溶酶及其他蛋白酶可進(jìn)一步增強(qiáng)其活性，并通過自身調(diào)節(jié)機(jī)制，刺激上述細(xì)胞產(chǎn)生更多的TGF-β1，形成放大效應(yīng)，導(dǎo)致TGF-β1的大量生成和激活。本研究結(jié)果顯示，兩組X線照射后血清TGF-β1、ET-1均有不同程度升高，對照組X線照射后第2、3周較實(shí)驗(yàn)組升高明顯，實(shí)驗(yàn)組肝竇周圍成纖維細(xì)胞、肝靜脈閉塞征及肝細(xì)胞水腫變性壞死程度較對照組減輕。提示益氣活血中藥能降低血清TGF-β1、ET-1含量，具有防治放射性肝損傷作用。

綜上所述，益氣活血中藥能降低血清TGF-β1、ET-1水平，改善肝臟微循環(huán)，減緩肝纖維化進(jìn)程，減輕肝纖維化程度，可有效防治放射性肝損傷。

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