高 崇，崔昌范，張貴峰，任廣偉，吳京姬，于東海

(1.延邊農業(yè)科學院，吉林龍井 134300；2.吉林省煙草公司，吉林長春 130000；3.中國農業(yè)科學院煙草研究所，山東青島 266101；4.白城市煙草公司，吉林白城 137000)

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不同消毒方法對煙草種子萌發(fā)和消毒效果的影響

高 崇1，崔昌范1，張貴峰2，任廣偉3，吳京姬1，于東海4

(1.延邊農業(yè)科學院，吉林龍井 134300；2.吉林省煙草公司，吉林長春 130000；3.中國農業(yè)科學院煙草研究所，山東青島 266101；4.白城市煙草公司，吉林白城 137000)

[目的] 探索簡便、安全、高效的煙草種子消毒方法。[方法] 采用7種物理和化學藥劑消毒方法對煙草種子進行消毒處理，篩選出簡便、安全、高效、消毒效果穩(wěn)定的消毒方法。[結果] 與藥劑消毒方法相比，溫湯消毒方法具有操作簡便、使用安全、消毒成本低廉、適用性廣泛等優(yōu)點，其綜合消毒效果最佳。[結論] 溫湯浸種消毒方法可用作煙草種子的消毒方法。

煙草種子；消毒；發(fā)芽率；發(fā)芽勢；發(fā)芽指數(shù)

作物種子是一個生命的起始，是農民獲得豐收的基礎[1]，煙草種子是保障煙農獲得優(yōu)質、穩(wěn)產煙葉的物質基礎[2]。種子消毒對某些煙草病害可以起到預防的作用，是防治措施中的一項重要環(huán)節(jié)[3]。許多科研人員對各種作物種子的消毒技術和方法做了大量的研究。華致甫等[3]用50 ℃溫水浸煙草種子10 min或15 min可將種子上的野火病及赤星病病菌殺死，而不影響其發(fā)芽勢和發(fā)芽率。胡重怡等[4]用10%H2O2處理煙草種子，達到煙草無菌苗培養(yǎng)前的種子消毒預期效果。魯黎明等[5]30%NaClO處理煙草種子30 min消毒效果較好，發(fā)芽率最高。楊云貴等[6]用10%H2O2浸泡20 min和0.5%KMnO4浸泡10 min高羊茅種子消毒效果較好。陳榮等[7]用氯氣消毒西南樺種子的萌發(fā)效果最佳。

高效、低危害或無危害的煙草種子消毒方法，是煙葉安全生產的重要前提，目前對其研究報道尚不多。為此，筆者以探索簡便、快捷、安全、高效為目標的煙草種子消毒方法，開展此項工作。

1 材料與方法

1.1 材料試驗用煙草種子為吉煙九號裸種。

1.2 消毒處理方法

1.2.1溫湯浸種法。在燒杯中加入50～55 ℃熱水若干毫升后，放入煙草種子浸種，待水溫降至30 ℃時；將種子放入恒溫水浴鍋中保持30 ℃水溫6 h后結束。

1.2.2干熱處理法。煙草種子在70 ℃的恒溫箱中處理48 h。

1.2.3濕熱處理法。將水鍋中的水燒開后，將煙草種子用紗布包好，用鑷子夾住包有種子的紗布包，將其放在水鍋上方，使水蒸氣通過裝有煙草種子的紗布15 min。

1.2.40.1%甲醛消毒處理法。將煙草種子裝入紗布中，放入0.1%甲醛液中消毒20 min后取出，用流水沖洗至紗布中淌出的水為澄清即可。

1.2.51%硫酸銅消毒處理法。用硫酸銅100倍液浸泡煙草種子5 min后取出, 用流水沖洗至紗布中淌出的水為澄清即可。

1.2.675%酒精消毒處理法。用75%酒精浸泡煙草種子1 min后取出, 用流水沖洗至紗布中淌出的水為澄清即可。

1.2.73%雙氧水消毒處理法。用3%雙氧水浸泡煙草種子10 min后取出, 用流水沖洗至紗布中淌出的水為澄清即可。

1.2.8CK處理。未經任何處理的煙草種子。

1.3 種子處理后在培養(yǎng)箱中的管理將處理后的煙草種子放入培養(yǎng)皿內，培養(yǎng)皿底部鋪有3層濕潤濾紙，上蓋1層濕潤濾紙作為保濕材料，在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)期間，保持培養(yǎng)箱溫度在28～30 ℃，注意給培養(yǎng)皿補水。以種子胚部破裂為萌動，以胚根突破種皮的下胚軸長超過種子自身的長視為發(fā)芽[8]。每種處理方法使用種子50粒，重復3次。

1.4 消毒效果檢測取各處理消毒后的煙草種子50粒，在無菌條件下，放入一個直徑10 cm的Murashige and Skoog(簡稱MS)培養(yǎng)基內，2 d和7 d后觀察被處理的煙草種子上有無細菌、真菌微生物長出，若有則認為其被污染，記錄被污染的種子數(shù)量[9]，重復3次。

1.5 指標測定[10]發(fā)芽率(%)=種子發(fā)芽粒數(shù)/每處理供試種子數(shù)量×100%

(1)

7 d發(fā)芽勢(%)=7 d種子發(fā)芽數(shù)/每處理供試種子數(shù)量×100%

(2)

7 d發(fā)芽指數(shù)(GI)=∑Gt/Dt

(3)

污染率(%)=被污染的種子/每處理供試種子數(shù)量×100%

(4)

式中，Gt為在時間t天的發(fā)芽數(shù)；Dt為相應的發(fā)芽天數(shù)。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析試驗數(shù)據(jù)使用DPS分析軟件進行統(tǒng)計分析，采用Dunce法進行差異顯著性檢驗。

2 結果與分析

2.1 不同消毒處理方法對種子發(fā)芽時間的影響從圖1可以看出，化學藥劑消毒方法(3%雙氧水處理、1%硫酸銅處理、0.1%甲醛處理、75%酒精處理消毒)在處理后的第2天達到發(fā)芽高峰期，物理消毒方法(干熱處理、溫湯處理)與對照均在處理后的第3天達到發(fā)芽高峰期；化學藥劑消毒方法比物理消毒方法早一天達到發(fā)芽高峰期。

在化學藥劑消毒方法中，3%雙氧水消毒處理方法在種子發(fā)芽高峰期數(shù)量最多；物理消毒方法中溫湯消毒方法在種子發(fā)芽高峰期數(shù)量最多。濕熱消毒方法直到處理后的第7天達到發(fā)芽高峰期，但其發(fā)芽種子數(shù)量與其他消毒處理方法相比較少。

2.2 不同消毒處理方法對種子發(fā)芽率、發(fā)芽勢及發(fā)芽指數(shù)的影響由表1可知，在發(fā)芽率、7 d發(fā)芽勢方面，1%硫酸銅消毒處理方法發(fā)芽率最好，其次為75%酒精消毒處理方法、3%雙氧水消毒處理方法和溫湯消毒處理方法，濕熱消毒處理方法最差。方差分析表明，除濕熱消毒處理方法外，其他各消毒處理方法與對照之間差異不顯著。

在7 d發(fā)芽指數(shù)方面，3%雙氧水消毒處理方法最好，其次為75%酒精消毒處理方法和溫湯消毒處理方法，濕熱消毒處理方法最差。方差分析表明，除濕熱消毒處理方法外，其他各消毒處理方法之間差異不顯著。

表1 不同消毒方法對種子發(fā)芽指標的影響

注：同列不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)；同列不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。

2.3 不同消毒處理方法對種子的消毒效果由表2可知，與對照(CK)相比，溫湯消毒方法、0.1%甲醛消毒方法與其他各處理消毒方法效果相比，消毒效果好，污染率低；其次為濕熱消毒方法；1%硫酸銅消毒方法是各處理消毒方法效果最差的，這與華致甫[3]在1995年研究論文中的結果相一致。方差分析結果表明，在5%水平上，各消毒處理方法與對照相比，差異顯著；溫湯消毒方法、0.1%甲醛消毒方法、濕熱消毒方法與其他處理方法相比，差異顯著；溫湯消毒方法、0.1%甲醛消毒方法、濕熱消毒方法三者之間，差異不顯著。在1%水平上，與對照方法相比，除1%硫酸銅消毒處理方法外，其他消毒處理方法與對照差異顯著；消毒效果較好的溫湯消毒方法、0.1%甲醛消毒方法、濕熱消毒方法與其它各處理消毒方法相比較，差異顯著；溫湯消毒方法、0.1%甲醛消毒方法、濕熱消毒方法三者之間相比，差異不顯著。

表2 不同消毒處理方法對種子消毒效果

注：同列不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)；不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。

3 結論與討論

綜合發(fā)芽率、發(fā)芽勢、消毒效果、操作簡便性、安全性等因素考慮，溫湯浸種方法是各綜合效果的最佳消毒方法，適合進行生產用種消毒。

化學藥劑消毒方法總體上較物理消毒方法發(fā)芽時間提早1 d，可能是因為化學藥劑將煙草種子種皮上的膠質成分破壞使其失去膠體的作用，有利于胚芽的生長，從而促使其快速發(fā)芽。

目前微生物的消毒滅菌大多是采用濕熱消毒的原理方法進行的，此次試驗中濕熱消毒方法除消毒處理指標外，其他發(fā)芽指標均不理想，可能是因為消毒時間過長，致使蒸汽將種子滅活所致，在后續(xù)研究中將繼續(xù)開展摸索恰當?shù)臐駸嵯緯r間試驗。

種子消毒方法以消毒環(huán)節(jié)少，消毒效果徹底為好[8]。目前煙葉生產用種消毒方法仍是以化學藥劑消毒方法為主，如采用甲醛、硝酸銀等，若技術人員操作不慎，可引起種子消毒不徹底或降低種子發(fā)芽率等問題。溫湯消毒方法與藥劑消毒方法相比，具有操作簡便、使用安全、消毒成本低廉、適用性廣泛等優(yōu)點，是種子消毒方法中最具性價比的。然而，溫湯消毒方法在實際煙草種子消毒上應用十分局限，需煙葉科技人員進一步大力宣傳推廣。

[1] 董海洲.種子貯藏與加工[M].北京：中國農業(yè)科技出版社，1996.

[2] 段智輝.煙草種子傳播的主要病害及種子消毒[J].云南農業(yè)，2008(8)：29.

[3] 華致甫，袁美麗，高潔，等.煙草種子消毒方法的研究[J].吉林農業(yè)大學學報，1995,14(4)：7-11.

[4] 胡重怡，鄭少清，陳興江，等.煙草無菌苗培養(yǎng)前的種子消毒技術研究[J].中國煙草科學，2007,28(2)：45-46,51.

[5] 魯黎明，安影.不同消毒劑對煙草種子消毒效果及萌發(fā)的影響[J].種子，2012, 31(4)：93-95.

[6] 楊云貴，王紅俊，楊雪嬌，等.消毒處理對高羊茅種子發(fā)芽的影響[J].草地學報，2014,22(2)：380-385.

[7] 陳榮，劉穎，馮立新，等.不同消毒方法對西南樺種子萌發(fā)效果的影響[J].廣東農業(yè)科學，2011(12)：51-52.

[8] 劉崇政，楊紅，詹永發(fā)，等.不同消毒方法對辣椒種子發(fā)芽的影響[J].長江蔬菜(學術版)，2009(22)：31-33.

[9] 李賈林，曾娟，王雪山，等.膏桐種子不同消毒方法效果比較[J].亞熱帶植物科學，2009,38(2)：41-43.

[10] 楊紅，姜虹，涂祥敏，等.不同干制法對辣椒種子活力的影響[J].貴州農業(yè)科學，2008,36(4)：150-151.

Influences of Different Kinds of Disinfection Methods on the Germination and Sterilization Effects of Tobacco Seeds

GAO Chong1，CUI Chang-fan1，ZHANG Gui-feng2et al

(1. Yanbian Academy of Agricultural Sciences，Longjing, Jilin 133400；2. Tobacco Company of Jilin Province, Changchun, Jilin 130000)

[Objective] The research aimed to discuss a simple, safe and efficient disinfection method of tobacco seeds. [Method] The tobacco seeds were disinfected by using seven physical and chemical disinfection methods. And a simple, safe, efficient disinfection method of tobacco seeds with stable disinfection effects were screened out. [Result] Compared with chemical disinfection methods, hot-water disinfection method had the advantages of simple operation, safety, low cost, wide application, etc. Its comprehensive disinfection effect was the best. [Conclusion] Hot-water disinfection method could be used as the disinfection method of tobacco seeds.

Tobacco seed；Disinfection；Germination rate；Germination potential；Germination index

吉林省煙草有害生物調查研究項目(110200902065)。

高崇(1981-)，男，吉林白山人，助理研究員，碩士，從事煙草有害生物綜合防治研究。

2014-12-17

S 572

A

0517-6611(2015)04-043-02