喻甫國

(重慶市萬州區(qū)中醫(yī)院，重慶 404000)

ELISA法梅毒抗體檢測與TRUST試驗(yàn)在梅毒診斷中的應(yīng)用價(jià)值

喻甫國

(重慶市萬州區(qū)中醫(yī)院，重慶 404000)

目的 探討ELISA法梅毒抗體檢測與TRUST試驗(yàn)在梅毒診斷中的應(yīng)用價(jià)值。方法 擇取行梅毒血清學(xué)試驗(yàn)的120例患者，留取空腹靜脈血并分離血清，均同時(shí)進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)和甲苯胺紅不加熱法(TRUST)檢測，并利用梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)(TPPA)法進(jìn)行確證。結(jié)果 共檢測血清標(biāo)本120例,采用TPPA法確診36例。TRUST法檢出24例陽性,其中22例經(jīng)TPPA確診陽性,2例為假陽性,檢測敏感度為61%(22/36),檢測特異性為92%(22/24)；ELISA法檢出37例陽性,其中34例經(jīng)TPPA確診為陽性,3例假陽性,檢測敏感度為94%(34/36),檢測特異性為92%(34/37)。ELISA法血清標(biāo)本陽性率、檢測敏感性顯著優(yōu)于TRUST法(P<0.05)。結(jié)論在梅毒診斷中，ELISA法敏感性優(yōu)于TRUST法，有助于提高梅毒診斷準(zhǔn)確率，對梅毒治療及預(yù)后判斷具有至關(guān)重要的作用，值得臨床廣泛推廣應(yīng)用。

ELISA法；梅毒抗體檢測；TRUST試驗(yàn)；梅毒

梅毒作為一種常見的性傳播疾病，多因梅毒螺旋體感染所致，其傳播方式主要包括性行為傳播、血液傳播和胎盤垂直傳播。在臨床上，梅毒癥狀較為復(fù)雜，存在多樣化特征。當(dāng)該病原體入侵人體后，通過血液循環(huán)及淋巴系統(tǒng)可播散至全身，可對全身臟器與組織形成侵犯作用，具有較大的危害性。近幾年，梅毒發(fā)病率呈逐年上升態(tài)勢，特別是發(fā)展中國家患病率極高。從某種角度上來講梅毒患者屬于梅毒關(guān)鍵傳染源，強(qiáng)化梅毒早期診斷與治療對改善患者預(yù)后具有重要的作用[1]。目前，針對診斷梅毒多施以梅毒血清學(xué)檢測，包括甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)、梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等，其中前者屬于非特異性試驗(yàn)，后兩者屬于特異性試驗(yàn)[2]。本研究擇取我院2010年3月—2014年3月行梅毒血清學(xué)試驗(yàn)的120例患者為研究對象，采用ELISA法、TRUST法進(jìn)行檢測，旨在探究這兩種方法在梅毒檢驗(yàn)中的應(yīng)用價(jià)值。

1 臨床資料

1.1 一般資料 120例中男78例，女42例；年齡22～46(34.67±2.68)歲。

1.2 檢測方法

1.2.1 試劑選擇 擇取TP-ELISA試劑盒(廈門英科新創(chuàng)科技有限公司產(chǎn)品)、TRUST試劑盒(上海榮盛生物藥業(yè)有限公司產(chǎn)品)、TPPA試劑盒(富士瑞必歐株式會(huì)社產(chǎn)品)，2NCU/mL梅毒質(zhì)控血清在重慶市臨床檢驗(yàn)中心提取。所有試劑均于有效期內(nèi)使用。

1.2.2 儀器選擇 采用科華ST-360酶標(biāo)儀、科華ST-36W洗板機(jī)、微量移液器、科恒37℃恒溫水浴箱等設(shè)備。所有設(shè)備均可正常應(yīng)用。

1.2.3 方法 參照試劑盒內(nèi)說明書進(jìn)行實(shí)際操作。120例血清標(biāo)本同時(shí)應(yīng)用ELISA法與TRUST法進(jìn)行檢測，檢測陽性標(biāo)本均應(yīng)用TPPA法進(jìn)行確證。

1.3 觀察指標(biāo) 對比分析兩種檢測方法陽性檢出率及特異性與敏感性差異。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對上述資料進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料采用2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

120例中經(jīng)由TPPA法確診36例陽性。ELISA法檢出37例陽性,34例確診陽性,3例假陽性,敏感度為94%,特異性為92%(34/37)；TRUST法檢出24例陽性,22例確診陽性,2例假陽性,檢測敏感度為61%(22/36),檢測特異性為92%(22/24)。ELISA法血清標(biāo)本陽性率、檢測方法敏感性顯著優(yōu)于TRUST法(P<0.05)。

3 討 論

由于梅毒具有較大的危害,且傳染性相對較大,癥狀呈多樣化,故臨床極其容易出現(xiàn)漏診或誤診等現(xiàn)象。同時(shí)，與正常人群比較，梅毒患者艾滋病感染危險(xiǎn)性上升5倍左右。一般而言，梅毒具有較大的傳染性，且潛伏期較長，隱性與二期梅毒臨床多為皮膚表現(xiàn)、無明顯癥狀,往往容易忽略。因此，術(shù)前或輸血前必須要強(qiáng)化梅毒螺旋體檢測。通常人體感染梅毒后2周左右,顯現(xiàn)血清學(xué)反應(yīng)。

在臨床上，梅毒檢驗(yàn)方法相對較多，各種方法都具有自身獨(dú)特的臨床應(yīng)用價(jià)值，如何科學(xué)擇取這些方法已成為了臨床實(shí)驗(yàn)室研究的重點(diǎn)問題。據(jù)美國疾病預(yù)防中心表示，在進(jìn)行梅毒試驗(yàn)時(shí)以TP特異性抗體檢測為初篩方法，可監(jiān)測梅毒療效，表明特異性試驗(yàn)已成為了一種有效的方法。

ELISA法主要利用雙抗原夾心法與酶聯(lián)免疫吸附測定法實(shí)驗(yàn)原理，對TP特異性抗原進(jìn)行重組，純度較高，已成為了當(dāng)前梅毒血清學(xué)診斷試驗(yàn)的有效方案。就ELISA法而言，其檢測對象為梅毒IgG與IgM混合抗體，具有較高的特異性與敏感性，一次可對多份樣本進(jìn)行綜合檢測，以酶標(biāo)儀為依據(jù)，最終可對結(jié)果進(jìn)行判斷，操作異常簡便，試劑廉價(jià)[3]。一般而言，檢測結(jié)果都具有客觀性，將原始數(shù)據(jù)輸入計(jì)算機(jī)，可實(shí)現(xiàn)長期保存的目的。但在臨床應(yīng)用中，ELISA法也存在一些缺陷，梅毒特異性抗體顯現(xiàn)早，而消失較為遲緩，即使通過抗梅毒治療，仍可發(fā)現(xiàn)特異性抗體。特定狀況下，呈終生檢出狀態(tài)。由此可見，ELISA法陽性僅表明曾經(jīng)被感染或正在感染，無法成為最終療效監(jiān)測方法。

TRUST法主要是指將VDRL抗原置入附有甲苯胺紅溶液中進(jìn)行煉制而成，可對血漿或血清中的反應(yīng)素進(jìn)行檢測，操作方法簡便，結(jié)果檢出十分迅速，在梅毒療效觀察、再感染、復(fù)發(fā)診斷中具有重要的應(yīng)用作用。如針對先天性梅毒而言，可采用TRUST法進(jìn)行檢測，每間隔30d檢測1次，持續(xù)半年后對反應(yīng)素效價(jià)變化進(jìn)行觀察。若效價(jià)呈穩(wěn)定或增高狀態(tài)，提示為先天性梅毒；若抗體源自母體IgG，一般2個(gè)月左右會(huì)消失[4]。但TRUST法亦存在不足之處，主要表現(xiàn)在敏感性相對較差，易耽誤臨床治療，不利于醫(yī)療質(zhì)量的提高。此外，輸血后無法對患者感染責(zé)任進(jìn)行界定，風(fēng)險(xiǎn)較大。

據(jù)報(bào)道，以Ⅰ期與潛伏期梅毒為研究對象，TRUST方法敏感性相對較低，且待晚期梅毒患者治療后，其結(jié)果有可能呈陰性，表明在早期與晚期梅毒輔助診斷中不宜采用TRUST方法[5]。但TRUST方法操作較為簡便，試劑廉價(jià)，同時(shí)檢測時(shí)間較短，無需特定儀器設(shè)備，并能對抗體滴度進(jìn)行測定，屬于梅毒患者治療效果的觀察指標(biāo)。若患者治療顯效，TRUST測定滴度呈下降趨勢，或轉(zhuǎn)為陰性。因此，在臨床梅毒療效觀察與復(fù)查中可采用TRUST方法。

而與ELISA、TRUST比較，TPPA的特異性與敏感性更勝一籌，臨床上往往應(yīng)用于梅毒確診試驗(yàn)，并可對效價(jià)進(jìn)行測定，但由于操作異常復(fù)雜，時(shí)間漫長，試劑價(jià)格高昂，故難以進(jìn)行大量標(biāo)本篩查。同時(shí)，TPPA法與ELISA方法具有一致性，以梅毒IgG與IgM混合抗體為主要檢測對象，無法對療效進(jìn)行判定，故在ELISA或TRUST陽性測定后的確診試驗(yàn)中應(yīng)用廣泛。

本研究結(jié)果顯示，ELISA法特異性、敏感性高,與TPPA法具有一定的相關(guān)性，但也具有假陰性或假陽性，多因梅毒螺旋體入侵人體后，梅毒抗體表面抗原刺激機(jī)體形成梅毒螺旋體特異性抗體，而某些患者血清中存在內(nèi)源性物質(zhì)，可故對ELISA檢測結(jié)果具有一定的影響。同時(shí)，抗體與抗原間存在交叉反應(yīng)，于ELISA試驗(yàn)中易形成非特異性吸附作用，最終誘發(fā)假陽性。而檢驗(yàn)人員的操作水平及抗體效價(jià)下降也易對測定結(jié)果產(chǎn)生影響。

此外，本研究發(fā)現(xiàn)TRUST敏感度低,特異性高，與黎金鳳等[6]學(xué)者研究結(jié)論存在差異(靈敏度與特異性均達(dá)80%左右)，多因病毒性肝炎、活動(dòng)性肺結(jié)核、硬皮病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕等各種疾病易對TRUST測定結(jié)果產(chǎn)生影響，導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)假陽性。因此，標(biāo)本來源屬于TRUST特異性與敏感性的重要影響因素。

而經(jīng)由臨床實(shí)踐證實(shí)，聯(lián)合TRUST與ELISA兩種檢測方法，可減少結(jié)果假陽性率，為臨床診斷與療效判定提供準(zhǔn)確依據(jù)。TRUST法與ELISA法聯(lián)合檢測主要存在4個(gè)方面的優(yōu)點(diǎn)：①試劑成本相對低廉，試劑易長期保存，且穩(wěn)定性高，輸血后糾紛少；②操作方法簡便；③檢測結(jié)果在臨床診斷與療效判定中具有重要的作用，于梅毒潛伏期即產(chǎn)生梅毒特異性抗體，故在梅毒早期輔助診斷中值得廣泛應(yīng)用；④聯(lián)合兩種檢測方法，可促使梅毒患者得到及時(shí)有效治療。當(dāng)檢測數(shù)據(jù)不一致時(shí)，可采用TPPA方法進(jìn)行復(fù)測，檢驗(yàn)人員必須要強(qiáng)化與臨床醫(yī)生的交流與溝通，建議醫(yī)生從患者臨床癥狀、病史、體征等方面出發(fā)，以此作出準(zhǔn)確診斷，從而將生物學(xué)因素誘發(fā)的假陽性排除，并強(qiáng)化疑似患者定期復(fù)查[7]?！度珖R床檢驗(yàn)操作規(guī)程》提示，梅毒TP試驗(yàn)陽性僅表明所測對象存在抗TP抗體或抗類脂抗體，不屬于患者梅毒螺旋體感染判斷的金標(biāo)準(zhǔn)，而陰性結(jié)果也無法完全將梅毒螺旋體感染排除在外，故測定結(jié)果要綜合臨床分析[8]。

綜上所述，在梅毒檢驗(yàn)中，ELISA法與TRUST法各自具有獨(dú)特的臨床應(yīng)用價(jià)值，綜合兩種檢測方法，可降低早期潛伏期梅毒漏診率，將生物學(xué)原因?qū)е碌募訇栃耘懦?，便于梅毒確診療效觀察。

[1] 熊文翠,馬雅英,劉士君.梅毒血清試驗(yàn)對梅毒診斷及療效的臨床價(jià)值[J].浙江醫(yī)學(xué)教育,2013，12(6):55-57

[2] 高凱.梅毒檢測的ELISA法、TPPA法、TRUST法比較[J].中國醫(yī)藥指南,2013，11(34):108-109

[3] 林蘋蘋,吳亞玲,董杰.ELISA法和TRUST法在梅毒篩查中的應(yīng)用[J].浙江預(yù)防醫(yī)學(xué),2011，23(1):94-95

[4] 王曉萍,涂彩霞,漆巍慶.TP-TRUST與TP-ELISA法檢測梅毒結(jié)果回顧分析[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2011，29(5):570-571

[5] 高風(fēng)蘭.梅毒ELISA法檢測RPR、TRUST試驗(yàn)比較及其在輸血檢測中的臨床意義[J].中國醫(yī)藥指南,2012，10(9):442-443

[6] 黎金鳳,陳遠(yuǎn)平.不同梅毒血清學(xué)檢測方法比較及臨床應(yīng)用價(jià)值[C]. 中華醫(yī)學(xué)會(huì)、中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)分會(huì)、中國醫(yī)院協(xié)會(huì)臨床檢驗(yàn)管理專業(yè)委員會(huì).中華醫(yī)學(xué)會(huì)第九次全國檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中國醫(yī)院協(xié)會(huì)臨床檢驗(yàn)管理專業(yè)委員會(huì)第六屆全國臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編，2011:1-1

[7] 吳麗婷,陳立剛,林哲.ELISA法與TRUST法、膠體金法檢測梅毒抗體的臨床應(yīng)用和方法學(xué)評價(jià)[J].海南醫(yī)學(xué),2010，12(22):57-59

[8] 花南霞,蘇志文.TP-ELISA法與TRUST法同步聯(lián)合檢測在梅毒診斷中的臨床應(yīng)用[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2012，9(16):2079-2080

10.3969/j.issn.1008-8849.2015.16.033

R446.6

B

1008-8849(2015)16-1798-02

2014-07-20