嵇海澄 李孝壁 李 琴 姜 濤 胡春勇

江蘇豪森藥業(yè)股份有限公司，江蘇連云港 222000

甲磺酸伊馬替尼（imatinib mesylate）化學(xué)名稱為4-（4-甲基-1-哌嗪)甲基-N-4-甲基-3-4-（3-吡啶）-2-嘧啶氨基苯基-苯甲酰胺甲磺酸鹽，是瑞士諾華公司（Novartis）研發(fā)的酪氨酸激酶抑制劑類藥物。2001 年5 月10 日，伊馬替尼以“具有突破性的抗腫瘤機(jī)制”獲得美國FDA 的特快審批，商品名為“Gleevec”（格列衛(wèi)），并于2001 年11 月7 日歐盟批準(zhǔn)格列衛(wèi)上市，最初用于α-干擾素給藥失敗胚細(xì)胞危象病期、慢性病期、加速病期的粒細(xì)胞白血?。怨撬柩┡R床治療用藥。隨后，美國FDA 又批準(zhǔn)了伊馬替尼的第二個適用癥，用于治療胃腸道間質(zhì)細(xì)胞瘤的治療。作為罕見病用藥，經(jīng)過全球廣泛的臨床使用后，獲得了醫(yī)學(xué)界的高度評價，于2002 年12 月23 日正式取得美國FDA 的全面認(rèn)可，批準(zhǔn)作為慢性粒細(xì)胞白血病一線治療用藥，從而被醫(yī)學(xué)界譽為近年“有重大突破性”的抗腫瘤靶向小分子口服藥物制劑[1-2]。二甲胺是廣泛存在于自然環(huán)境和食品中，與自然界中存在的亞硝酸根易形成具有很強(qiáng)的動物致癌性和致突變型的N-亞硝基化合物[3-4]，對人及動物有很大的危害，故此有必要對二甲胺進(jìn)行嚴(yán)格控制。另外二甲胺是甲磺酸伊馬替尼合成工藝過程中不可避免要產(chǎn)生的副產(chǎn)物，為了有效保證藥品質(zhì)量，有必要對甲磺酸伊馬替尼原料藥中可能殘留的二甲胺進(jìn)行嚴(yán)格控制。離子色譜[5-8]是作為有效分離和檢測陰、陽離子的液相色譜方法，已經(jīng)被廣泛的應(yīng)用在食品、藥品、化工、化妝品等多個行業(yè)，作為一種有效的分離手段，2010 年版中國藥典二部附錄對離子色譜法的原理、應(yīng)用及要求進(jìn)行了相關(guān)描述和規(guī)定[9-10]，而且離子色譜在藥物中使用的越來越多[11-14]。本論文根據(jù)二甲胺的特性，建立了離子色譜測定二甲胺殘留的方法，該方法快速、準(zhǔn)確，可對甲磺酸伊馬替尼的質(zhì)量進(jìn)行有效的控制。

1 儀器與試劑

儀器：電子分析天平，梅特勒XS105；熱電DIONEX ISC-2100 離子色譜，Dionex CERS500 抑制 器，DS6 Heated Conductivity Cell 電 導(dǎo) 檢 測 器；CHROMELEON 6.8 化學(xué)工作站；色譜柱：陽離子交換色譜柱（Dionex IonPac CS12A 4×250mm）。

試劑：鹽酸二甲胺為國藥集團(tuán)化學(xué)試劑股份有限公司；甲磺酸為SIGMA-ALDRICH，純化水由本公司生產(chǎn)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

照離子色譜法（中國藥典2010 年版二部附錄V J）測定。用陽離子交換色譜柱（Dionex IonPac CS12A 4mm×250mm）；采用以20mmol/L 甲磺酸溶液作為為流動相，流速為1.0mL/min；柱溫為30℃；檢測器為電導(dǎo)檢測器，檢測方式為抑制電導(dǎo)檢測，檢測器溫度為35℃。

2.2 專屬性試驗

考慮到樣品中含有一定量的常規(guī)離子會干擾測定，我們將Li+、Ca2+、Mg2+、Na+、K+、NH4+及二甲胺按一定比例混合。各離子的分離情況見表1，專屬性圖見圖1。從表和圖中可以看出常規(guī)陽離子不干擾二甲胺的測定，說明該方法的專屬性很好。

表1 方法專屬性

圖1 方法專屬性色譜圖

2.3 定量限與檢測限

在上述色譜條件下，精密稱取鹽酸二甲胺適量，置量瓶中，用水溶解，制成儲備液。逐步稀釋儲備液，分別進(jìn)樣至信噪比（峰高／基線噪聲）3±1 為檢測限，至信噪比10±2 為定量限，見表2。

表2 二甲胺的檢測限與定量限

2.4 線性關(guān)系試驗

按照標(biāo)準(zhǔn)限度濃度配制線性試驗溶液，二甲胺在0.10 ～9.84μg/mL，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，線性回歸方程為：A=0.1279C-0.0016，相關(guān)系數(shù)r=1.0000，說明本方法線性良好，見表3。

表3 線性關(guān)系

2.5 重復(fù)性

精密稱取鹽酸二甲胺適量，用水溶解并定量稀釋制成每1 毫升含二甲胺約3μg 的溶液，作為對照品溶液。按上述色譜條件，連續(xù)6 針進(jìn)樣對照品溶液，記錄色譜圖，計算峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD，見表4。

表4 重復(fù)性

由表可見，二甲胺的峰面積的RSD 為0.11%，表明方法的重現(xiàn)性好。

2.6 回收率測定

精密稱取鹽酸二甲胺21.31mg，置50mL 量瓶中，用水溶解稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 ～100mL 量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，作為二甲胺含量母液備用。

表5 回收率測定

以二甲胺含量限度（0.05%）的濃度為基準(zhǔn)100%，分別精密量取上述母液1.0mL、2.5mL、5.0mL、7.5mL 置 含 基 質(zhì) 樣 品 的20mL 量 瓶 中，用水稀釋至刻度，分別配制成限度為50%、100%和150%的溶液各三份，作為供試品溶液。另精密稱取鹽酸二甲胺適量，用水溶解并定量稀釋制成每1mL 含二甲胺約3μg 的溶液，分別精密量取上述溶液各25μL 注入離子色譜儀，記錄色譜圖，測量峰面積，采用外標(biāo)法計算回收率，結(jié)果見表5。

樣品測定的平均回收率為97.5%，RSD 為1.8%（n=9），表明該方法檢測甲磺酸伊馬替尼中二甲胺含量準(zhǔn)確、可靠。

3 討論

本研究建立了二甲胺的測定方法，并通過對二甲胺的專屬性、檢測限、定量限，線性范圍，重復(fù)性、回收率等項目的考察，充分說明本文確定的方法能有效、準(zhǔn)確的測定甲磺酸伊馬替尼中可能殘留的二甲胺。

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