段和祥 程奇珍 楊毅生 王曉青
1.江西省藥品檢驗檢測研究院,江西省藥品與醫(yī)療器械質(zhì)量工程技術(shù)研究中心,江西南昌 330029;2.解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院藥劑藥理科,北京100048
止汗擦劑為醫(yī)院制劑[1],具有消毒、殺菌作用,處方由5%甲醛、2%苯酚、3.75%乙醇組成的水溶液。它可使皮膚發(fā)赤,改善皮下血液循環(huán),有利于藥物的滲透與吸收,是臨床使用較廣的藥物,主治手足多汗癥。止汗擦劑由苯酚和乙醇等組成,原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對苯酚采用紫外吸收系數(shù)法進行控制,未對乙醇含量進行控制,為更好的控制產(chǎn)品的質(zhì)量,建立專屬性好、準(zhǔn)確度高的氣相色譜法對止汗擦劑中苯酚[2-6]和乙醇[7-12]的含量進行控制,并進行方法學(xué)考察。結(jié)果表明,所建立的方法簡便、快捷,靈敏度高,準(zhǔn)確度好。
Agilent 6890N 型氣相色譜儀,氫火焰離子化檢 測 器(FID),Sartorius BP211D 精 密 電 子 天 平(德國賽多利斯股份公司)。苯酚、乙醇對照品(中國食品藥品檢定研究院,批號100509-201203、130106-201202);止汗擦劑(某醫(yī)院,批號130311、131108-1、131108-2、131108-3);N,N-二甲基甲酰胺為色譜純。
色譜柱HP-5 石英毛細(xì)管柱(30mm×0.53mm,5.0μm);程序升溫:初始柱溫90℃,保持6min,以20℃/min 的速率升至170℃,保持7min。進樣口溫度220℃,檢測器溫度250℃,分流比為2 ∶1,氮氣流速2mL/min,氫氣的流速40mL/min,空氣流速400mL/min。
供試品溶液:精密量取本品1mL,置50mL 量瓶中,加N,N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度,搖勻,作為供試品溶液。
對照品溶液:精密稱取對照品苯酚0.1986g、乙醇0.3013g,置50mL 量瓶中,加N,N-二甲基甲酰胺溶解并稀釋至刻度,搖勻,作為對照品貯備溶液。精密量取對照品貯備溶液各1mL,置同一10 量瓶中,用N,N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度,搖勻,作為對照品溶液。
陰性樣品溶液:按處方比例取甲醛溶液5mL,置100mL 量瓶中,用蒸餾水稀釋至刻度,作為空白輔料;再精密量取空白輔料1mL,置50mL 量瓶中,加N,N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度,作為空白輔料溶液。
分別吸取“2.2”項下制備的供試品溶液、對照品溶液和陰性樣品溶液,按“2.1”項下色譜條件,測定,記錄色譜圖。結(jié)果苯酚和乙醇色譜峰的理論板數(shù)均大于5000,分離度均大于2.0,陽性樣品溶液對測定無干擾,見圖1(A、B、C)。
圖1 氣相色譜圖
精 密 量 取 對 照 品 貯 備 溶 液2.0、1.0、1.0、2.5、2.5、2.5mL,分別5、5、10、50、100、200mL 量瓶中,用N,N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度,搖勻,作為線性供試液。精密量取上述線性供試液各1μL,按“2.1”項下色譜條件測定,以各自測得的峰面積為縱坐標(biāo)(A),濃度為橫坐標(biāo)(c)進行線性回歸。苯酚、乙醇回歸方程分別為:A=5861 c -73.487(0.9998)和A=2561.6 c -9.5617(0.9999)。結(jié)果表明苯酚在0.0497 ~1.59mg/mL 濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好;乙醇在0.0753 ~2.41mg/mL 濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。另取對照品溶液,采用逐步稀釋法,按上述色譜條件測定和方法進樣分析,檢測限以S/N=3 計算。結(jié)果苯酚、乙醇的檢出限分別為0.32、0.61μg/mL。
取“2.2”項下對照品溶液6 份,照“2.1”項下色譜條件,分別進樣,計算峰面積相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)。結(jié)果苯酚、乙醇的RSD 分別為0.63%、0.94%。
取止汗擦劑(批號為130311)樣品6份,按“2.2”項下方法制備供試品溶液,依法測定,按外標(biāo)法以峰面積計算含量,結(jié)果苯酚和乙醇的RSD 分別為0.71%、1.47%。
取“2.2”項下供試品溶液(批號130311),照“2.1”項 下 色 譜 條 件,分 別 于0、6、12、18、24h 進樣,計算峰面積的RSD。苯酚、乙醇的RSD 分別為0.54%、0.82%。結(jié)果表明供試品溶液在24h 內(nèi),穩(wěn)定性良好。
精密量取9 份按處方比例配制的空白輔料各1mL,分別置50mL 量瓶中,分別精密加入對照品貯備溶液4.0、5.0、6.0mL,用N,N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度,搖勻,進行回收率測定。苯酚、乙醇的平均回收率為102.8%(RSD=1.44%)、101.0%(RSD=1.45%)。結(jié)果表明方法的準(zhǔn)確性良好,見表1。
表1 回收率試驗結(jié)果(n=9)
取對照品溶液及供試品溶液,按上述色譜條件進樣,記錄色譜圖,以外標(biāo)法按峰面積計算,結(jié)果:批號130311、131108-1、131108-2、131108-3 的苯酚含量(g/mL)分別為1.64%、1.80%、1.81%、1.79%;乙醇含量(g/mL)分別為2.82%、3.05%、3.00%、3.00%。
乙醇與水、乙醚、氯仿、酯、烴類衍生物等有機溶劑混溶;苯酚微溶于冷水,可在水中形成白色混濁,易溶于65℃以上的熱水,易溶于醇、醚等有機溶劑。N,N-二甲基甲酰胺與水、醇、醚、酮、不飽和烴、芳香烴烴等混溶,溶解能力強??紤]水與氣相色譜柱的固定液反應(yīng)或溶解造成柱流失,降低柱效,不宜用水作為溶劑,而選擇N,N-二甲基甲酰胺作為溶劑。
苯酚與乙醇均為弱極性分子,均含有羥基,當(dāng)苯酚受到苯環(huán)π 鍵的影響,使氧和碳形成p-π 共軛,使得羥基強度減小,也能夠電離,所以也呈酸性,乙醇不電離,所以它的羥基強度最大,而碳氧單鍵強度最小,故乙醇的極性強于苯酚。根據(jù)相似相溶原則-即待測組分與固定液極性匹配原則選擇色譜柱:(1)選擇DB-5 和HP-5 毛細(xì)管柱,從分離度和分離效果來分析,HP-5 的效果較好;(2)同時考察了非極性DB-1、HP-1 毛細(xì)管柱;中等極性毛細(xì)管柱DB-1701、DB-17;強極性毛細(xì)管柱DBWAX、DB-FFAP、HP-INNOWAX 共7 種色譜柱的分離效果,結(jié)果均不理想。
常壓下乙醇的沸點78.4℃,苯酚的沸點182℃,兩組份的沸點相差較大,在恒溫條件下,假如柱溫較低,則低沸點組合分離得好,而高沸點組分的流出時間會太長,造成峰展寬,甚至滯留在柱中造成柱污染,反之柱溫太高,低沸點組分又難以分離,故采用程序升溫條件。
本實驗方法簡便、快捷,靈敏度高,結(jié)果準(zhǔn)確??捎糜谥购共羷┵|(zhì)量的有效控制。
[1] 中國醫(yī)院制劑規(guī)范(西藥制劑第二版)[S].北京:中國醫(yī)院科技出版社,85-86.
[2] 國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典(二部)[S].2010 年版.北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:443.
[3] 馬延慧,程麗萍,郇瑜,等.氣相色譜法測定止癢洗劑中苯酚和薄荷腦的含量[J].中國藥物與臨床,2014,24(9):1162-1163.
[4] 王玉飛,金米聰,李繼革.頂空固相微萃取-氣相色譜法測定尿中苯酚[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2011,21(10):2401-2402.
[5] 徐道華,張紅偉.氣相色譜法測定復(fù)方薄荷腦苯酚酊中薄荷腦和苯酚的含量[J].西北藥學(xué)雜志,2011,26(6):427-429.
[6] 蘭文,劉雁鳴,石笑弋.氣相色譜法測定樟酚酊中樟腦及苯酚的含量[J].中南藥學(xué),2013,11(12):931-934.
[7] 國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典(二部)[S].2010 年版.北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:10-11.
[8] 施俊輝,史亞軍,唐梅,等.氣相色譜內(nèi)標(biāo)法測定黃芩提取物亞微乳中的乙醇?xì)埩鬧J].中國實驗方劑學(xué)雜志,2011,17(15):66-68.
[9] 王坤,翟宇,王英華.頂空毛細(xì)管氣相色譜法測定苦參素中丙酮和乙醇?xì)埩袅縖J].藥物分析雜志,2010,30(7):1258-1260.
[10] 趙美艷,徐琛,呂燕平,等.氣相色譜法測定聚維酮碘溶液中乙醇和乙酸的殘留量[J].中國臨床藥學(xué)雜志,2014,23(2):103-106.
[11] 姜姍,倪健,黃淑惠,等.毛細(xì)管柱氣相色譜法測定10個廠家養(yǎng)陰清肺糖漿中乙醇的含量[J].中華中醫(yī)藥雜志,2011,26(7):1609-1611.
[12] 孔霽,臧恒昌,王彥厚.氣相色譜法測定阿莫西林克拉維酸鉀片中的乙醇?xì)埩袅縖J].食品與藥品,2014,16(2):120-122.