史藝文,李 欽,林崇熙

(1.河南大學(xué)藥學(xué)院,河南開封475001;2.北京大學(xué)化學(xué)與分子與工程學(xué)院,北京100871)

核磁共振氟譜對五氟利多的定量分析

史藝文1,2,李 欽1,林崇熙2*

(1.河南大學(xué)藥學(xué)院,河南開封475001;2.北京大學(xué)化學(xué)與分子與工程學(xué)院,北京100871)

目的建立核磁共振氟譜測定五氟利多定量分析的方法.方法Varian-300核磁共振譜儀,四核寬帶探頭,氟譜檢測觀察頻率:282.234 MHz;譜寬:150～―150 ppm;脈沖寬度:譜儀的90度脈沖值15μs;增益值: 30;采樣時間:1 s;采樣次數(shù):一般32次,濃度低時數(shù)百次直到信號峰清晰;樣品溶劑為氯仿,毛細(xì)管內(nèi)標(biāo)含稀釋的三氟乙酸。結(jié)果氟譜信號峰的積分顯示五氟利多在水與鹽酸中完全不溶,在氯仿中的溶解度最好。在氯仿中,Varian-300氟譜的靈敏度可以檢測出16 ppm的五氟利多溶液,但需要合適的檢測參數(shù)與掃描3 000次。檢測不同濃度的氟譜,以毛細(xì)管內(nèi)標(biāo)標(biāo)定,獲得CF3氟信號峰的相對積分值,作圖獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線,線性關(guān)系良好,r= 99.95%。標(biāo)準(zhǔn)曲線法測定藥片中五氟利多的含量為20.05 mg,與說明書的實(shí)值20 mg基本一致,實(shí)驗(yàn)RSD值為0.48%,平均回收率為99.70%。結(jié)論測定方法簡便快速,結(jié)果準(zhǔn)確,可以用于未知樣品或藥片中五氟利多的定量分析.

五氟利多;核磁共振氟譜法;毛細(xì)管內(nèi)標(biāo);標(biāo)準(zhǔn)曲線;定量分析

五氟利多(Penfluridol)的IUPAC中文命名為1―[4,4―雙(4―氟苯基)丁基]―4―[4―氯―3― (三氟甲基)苯基]―4―哌啶醇。五氟利多常用來治療各型精神分裂癥,對幻覺妄想、孤僻、淡漠、退縮等癥狀具有療效。適用于急、慢性各型精神分裂癥,以及病情緩解者的維持治療[1]。其副作用主要為錐體外系反應(yīng),如靜坐不能、急性肌張力障礙和類帕金森病等。長期服用可能導(dǎo)致運(yùn)動障礙、嗜睡、焦慮抑郁等副反應(yīng)。不能和其他抗精神藥或乙醇合用服藥等.藥物過量會導(dǎo)致心肌受損及干擾心內(nèi)傳導(dǎo),出現(xiàn)嚴(yán)重心律不齊、胸悶,超量中毒時應(yīng)特別注意對癥治療及支持療法,尚無特殊解毒藥[2]。因此,五氟利多的藥理性質(zhì)與分析方法一直受到廣泛的重視。其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于中國藥典2005年版第二部[3]。

對五氟利多的分析,常見的有反相高效液相色譜法、反向流動注射化學(xué)發(fā)光法、分光光度法、熒光光譜法、電位滴定法等[4-7]。這些方法都存在配樣或操作復(fù)雜的缺點(diǎn)。搜查文獻(xiàn),沒有發(fā)現(xiàn)有使用核磁共振進(jìn)行分析研究的報導(dǎo)?？紤]到中國藥典已經(jīng)將核磁共振波譜法納入檢測與推廣對象,而且由于五氟利多含有氟原子,我們著手探討利用靈敏度高的19F NMR對五氟利多進(jìn)行定量分析。

核磁共振檢測具有不破壞樣品結(jié)構(gòu)、保持體系完整的優(yōu)點(diǎn)。核磁共振氟譜具有和氫譜一樣高的檢測靈敏度[8-9],但是化學(xué)位移范圍更寬,不易發(fā)生信號重疊情況,有利于信號峰的辨識以及強(qiáng)度的比較。檢測氟譜不必受限于氘代試劑種類的選擇,可以在任何溶液體系下進(jìn)行檢測探討。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

核磁共振譜儀為Varian-300 MHz,型號Mercury Plus,四核寬帶探頭;電子天平(奧豪斯儀器上海有限公司)。

1.2 試劑

五氟利多純品(純度＞99.9%),購自徐州市天承化工有限公司;五氟利多藥片(120 mg/片,含五氟利多20 mg),生產(chǎn)批號:20110801,購自一般藥店,江蘇恩華藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn);水為北大化學(xué)學(xué)院處理的去離子水;氯仿、三氟乙酸等其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 試驗(yàn)條件

譜儀測定溫度:25℃;氟譜觀察頻率:282.234 MHz;譜寬:150～―150 ppm;脈沖寬度:使用譜儀的90度脈沖值15μs;增益值:30;采樣時間:1 s;采樣次數(shù):一般32次,濃度低時可能數(shù)百次直到信號峰清晰。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取五氟利多純品52.40 mg置入50 m L容量瓶中,加氯仿適量進(jìn)行溶解,然后稀釋至刻度,搖勻即得2.00 mmol/L的對照品儲備溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 隨機(jī)取五氟利多藥片1片,稱重記錄,用干燥研缽進(jìn)行研磨至粉末,置于50 m L的容量瓶,加氯仿適量進(jìn)行充分溶解,再用氯仿稀釋至刻度,搖勻即得供試品溶液。

2.3 譜儀操作方法

取0.5 m L的待測樣品置于核磁管中,然后加入含三氟乙酸(加水稀釋500倍)內(nèi)標(biāo)毛細(xì)管,再將加有內(nèi)標(biāo)的核磁管放入核磁共振譜儀中,使用標(biāo)準(zhǔn)鎖場、標(biāo)準(zhǔn)勻場以及標(biāo)準(zhǔn)氟譜參數(shù)進(jìn)行氟譜檢測,得到有三個氟信號峰的譜圖。對譜圖進(jìn)行相位以及基線的調(diào)整。標(biāo)定三氟乙酸的信號峰積分值為100,得到CF3的相對積分值。每張譜圖反復(fù)進(jìn)行3次積分,取其平均值為最終積分結(jié)果。氟譜譜圖見圖1。

圖1 五氟利多在氯仿溶液中的核磁共振氟譜,附加含稀釋的三氟乙酸毛細(xì)管內(nèi)標(biāo)

五氟利多的氟譜解析:除了毛細(xì)管內(nèi)標(biāo)的信號峰外(三氟乙酸定位0 ppm),得到兩個F信號峰,化學(xué)位移分別為―41.67 ppm與12.87 ppm,積分比為2∶3,各歸屬為化合物F與CF3信號峰。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性關(guān)系―標(biāo)準(zhǔn)曲線制作 對上述的2.00 mmol/L的對照品溶液通過氯仿稀釋的方式配制成2.00 mmol/L～0.20 mmol/L的一系列濃度。在2.3所述的譜儀操作方法下,對配制的一系列濃度的溶液進(jìn)行氟譜掃描,得到三個氟信號峰。定三氟乙酸的信號峰為100,得到CF3的相對積分值。以此值為縱坐標(biāo),五氟利多溶液系列濃度為橫坐標(biāo)(結(jié)果見表1),作圖,得到標(biāo)準(zhǔn)曲線圖(見圖2)。使用Origin軟件進(jìn)行線性回歸,回歸方程式為:CF3峰Y= 34.898 79X+39.375 33,r=0.999 5。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:五氟利多在0.20～2.00 mmol/L濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

表1 五氟利多線性關(guān)系數(shù)據(jù)表

圖2 五氟利多的CF3積分―濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.4.2 精密度實(shí)驗(yàn) 吸取上述的同一對照品溶液(1.20 mmol/L)放入核磁管進(jìn)行氟譜掃描,按照2.3的操作方法,同一對照品分別測定5次,每次譜圖反復(fù)積分3次,得到積分值。所得的RSD為0.54%。表明該方法的精密度良好,實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。

表2 五氟利多精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.4.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 選取上述的供試品溶液,分別在0、2、4、8、12、24 h后按照2.3的操作方法進(jìn)行測定,觀察氟譜,沒有發(fā)現(xiàn)任何異變?；?分析氟信號峰的積分值,得到RSD為1.14%。表明五氟利多溶液在室溫下24 h內(nèi)是穩(wěn)定的。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。

表3 五氟利多穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.4.4 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 隨機(jī)選取五氟利多片6片,按照2.2.2的操作方法制備供試品溶液6份,分別加入一定量的五氟利多對照品,按照2.3的操作方法進(jìn)行測定,得到信號峰積分值,求得平均回收率為99.70%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4。

2.4.5 檢出限實(shí)驗(yàn) 配制五氟利多溶液濃度為0.03 mmol/L,此時相當(dāng)于每升氯仿中溶解15.70 mg,在2.1所述最佳參數(shù)條件下掃描3 000次可以得到明確的氟譜信號峰。此檢測靈敏度符合一般藥典要求能檢測每升含20 mg的要求標(biāo)準(zhǔn),即對氟的檢出限可以達(dá)到2×10―4g/L。

表4 五氟利多加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.4.6 樣品含量測定 選取上述2.4.4任意一份供試品溶液(五氟利多片重120 mg),然后按照2.3的操作方法進(jìn)行測定,連續(xù)測定3次,利用毛細(xì)管內(nèi)標(biāo)標(biāo)定以及標(biāo)準(zhǔn)曲線法分別計(jì)算出每次五氟利多的含量,實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表5。

表5 五氟利多樣品含量測定實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3 討論

3.1 溶劑的選擇

我們比較了10種不同的溶劑對五氟利多的溶解情況,采用氟譜與毛細(xì)管內(nèi)標(biāo)比較法,實(shí)驗(yàn)操作如下:將十根試管分別加入以下十種溶劑各1 m L(氯仿,水,二甲亞砜,乙腈,丙酮,鹽酸,硫酸,甲醇,乙醇,乙酸),然后每個試管加入20 mg的五氟利多(純品)。攪拌后吸取上層0.5 m L溶液到核磁管,然后按照2.3的操作方法進(jìn)行測定。將內(nèi)標(biāo)三氟乙酸(水稀釋40倍)的氟信號峰積分定為10,比較各種溶液所得氟譜信號峰(CF3)的大小。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在水或鹽酸中,樣品完全不溶,信號峰的積分值為0,對于藥物,這是頗特殊的現(xiàn)象。溶解度最好的為氯仿,氟譜信號峰較強(qiáng),因此我們選用氯仿作為溶劑,見表6。

表6 常用溶劑對五氟利多的溶解度氟譜積分值

3.2 毛細(xì)管內(nèi)標(biāo)的選擇

三氟乙酸是目前較流行的氟譜檢測參考外標(biāo),逐漸取代不好獲得的三氟甲苯或三氯氟甲烷(CFCl3)。我們實(shí)驗(yàn)涉及選用兩種三氟乙酸的水溶液作為毛細(xì)管內(nèi)標(biāo),分別是加水稀釋500倍與40倍,適應(yīng)五氟利多的樣品溶液濃度,考慮對照峰與樣品峰的強(qiáng)度在合適的對比范圍。進(jìn)行溶解度實(shí)驗(yàn)時,樣品溶液氟濃度高,因此,選用濃度相對高的只稀釋40倍的三氟乙酸溶液為內(nèi)標(biāo)。進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線制作時,涉及到的樣品濃度相對較稀(例如0.60 mmol/L),因此,選用加水稀釋500倍的三氟乙酸溶液為內(nèi)標(biāo)。

3.3 定量峰的選擇

由五氟利多的氟譜圖1可以看出,有兩種氟信號峰,分別為CF3和F信號峰,積分比為3∶2,考慮到濃度較稀時F信號峰會相對較小,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,而且CF3鄰近三氟乙酸信號峰,適合積分比較。因此,選用CF3信號峰作為定量峰來進(jìn)行積分。

3.4 藥片含量測定結(jié)果

經(jīng)過檢測,得到藥片(總重120 mg)含有五氟利多約20.05 mg,和說明書提到的含有20 mg的含量,比較符合,說明本方法準(zhǔn)確可靠。利用氟譜的積分值來判斷五氟利多的含量,具有很高的精確度。

[1]張義.五氟利多暗服藥與氟哌啶醇治療Tourette綜合征對照研究[J].中國藥房,2007,18(23):1803―1804.

[2]黃麟,楊作成.五氟利多中毒致意識障礙誤診為病毒性腦炎[J].臨床誤診誤治,2008,21(12):82.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:45―46.

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[責(zé)任編輯 李武營]

The quantitative analysis of Penfluridol by 19 F NMR

SHI Yiwen1，2，LI Qin1，LIN Shrongshi2*
（1.Phɑrmɑceuticɑl College of Henɑn University，Kɑifeng，Henɑn 475001，Chinɑ；2.College of Chemistryɑnd Moleculɑr Engineering of Peking University，Beijing 100871，Chinɑ）

ObjectiveStudy on the quantitative analysis of Penfluridol by 19F NMR.MethodsVarian-300 NMR instrument，with broadband auto-switchable probe，19F detection frequency：282.234 MHz；spectral width：150–―150 ppm；pulse width：15μs，the 90 degree pulse of the instrument；gain value：30；acquisition time：1 s；scan time：regularly 32，may increase to hundreds until the F signals becomes clear and intense；solvent：chloroform；reference standard：long capillary tube containing dilute CF3CO2H.ResultsThe integration of F signals showed that Penfluridol was insoluble in H2O or HCl，and soluble best in chloroform.The sensitivity test showed that Varian-300 could detect 16 ppm of penfluridol in chloroform at around 3000 scans with optimum parameters. Standard curve was obtained by plotting concentration versus CF3 integration，straight line was observed with excellent fitting，r=99.95%.Penfluridol in pill was determined to be 20.05 mg from standard curve and which was consistent with the true value of 20 mg.Experiments showed that RSD was 0.48%and average recovery was 99. 70%.ConclusionThis method is accurate and reliable，and can be used to determine the amount of Penfluridol in unknown samples or pills.

Penfluridol；19F NMR；internal standard capillary tube；standard curve；quantitative analysis.

TQ460.7

A

1672―7606(2015)04―0252―04

2015-08-26

史藝文(1988―),女,河南鄭州人,碩士生,從事中藥質(zhì)量評價與新藥開發(fā),核磁共振在藥物的分析應(yīng)用工作。

*通訊作者:林崇熙(1958―),男,臺灣高雄人,博士,教授,碩士生導(dǎo)師,從事有機(jī)化學(xué)與核磁共振的應(yīng)用研究工作。