謝 瓊，盧月月，易宏鋒

荊州市第一人民醫(yī)院1.內(nèi)分泌一科;2.消化二科;3.消化一科，湖北 荊州434000

胃癌為人類常見的惡性腫瘤，也是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一，極大的危害著人類的健康，目前對于胃癌的治療方法包括手術(shù)、化療、放療，但是仍有大量的胃癌患者治療后的生存率仍不高，主要原因在胃癌發(fā)生轉(zhuǎn)移或者分期太晚。大量的研究表明Caspase-3 和P53 與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及腫瘤患者的預(yù)后密切相關(guān)。本研究通過檢測胃癌組織及正常胃黏膜組織中Caspase-3 及P53 表達(dá)情況，探討其與胃癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013 年3 月-2014 年3 月就診于荊州市第一人民醫(yī)院普通外科的胃癌患者50 例，所有患者術(shù)后均經(jīng)病理證實，男35 例，女15 例，年齡40～75 歲，平均年齡(61.0 ±2.3)歲，根據(jù)患者的病理結(jié)果，確定胃癌患者的轉(zhuǎn)移情況、浸潤深度、分化程度。選取就診于荊州市第一人民醫(yī)院消化內(nèi)科行電子胃鏡檢查的胃潰瘍患者潰瘍周圍的組織，并且經(jīng)過病理檢查提示為正常胃黏膜組織，排除癌前病變等相關(guān)病變共20 例作為對照，男12 例，女8 例，年齡20 ～45 歲，平均年齡(31.0 ±3.5)歲。

1.2 實驗試劑 Caspase-3 鼠抗人單克隆抗體、P53鼠抗人單克隆抗體購自北京中山生物制品有限公司，S-P 試劑盒、DAB 顯色試劑盒購自福州市邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司，其余免疫組織所需要的試劑由荊州市第一人民醫(yī)院中心實驗室提供。

1.3 實驗方法 將所手術(shù)后采集的標(biāo)本固定在10%甲醛中，24 h 內(nèi)脫蠟，并編號，切片，然后依次采用烤片、脫蠟、水化、沖洗、抗原修復(fù)、4 ℃冰箱過夜、PBS 液沖洗、DAB 顯色、封片、閱片。陽性對照采用乳腺切片，陰性對照采用PBS 緩沖液。結(jié)果的判斷由兩位副主任醫(yī)師以上病理科醫(yī)生綜合判斷，若結(jié)果不統(tǒng)一時，由第3 位病理科醫(yī)生判斷。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 17.0 統(tǒng)計學(xué)方法對實驗所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗，當(dāng)理論頻數(shù)小于5，采用精確概率法，P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Caspase-3 在胃癌組織及正常胃黏膜組織的表達(dá)情況 Caspase-3 在顯微鏡下主要表現(xiàn)為細(xì)胞質(zhì)呈棕黃色染色物質(zhì)。Caspase-3 mRNA 在正常胃黏膜組織及胃癌組織的表達(dá)水平分別為0.41 ±0.13、0.78 ±0.22，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0. 05，見圖1、表1);Caspase-3 在胃癌組織中陽性表達(dá)率為30. 0% (15/50)，在正常胃黏膜組織中陽性表達(dá)率為70.0%(14/20)，胃癌組織與正常胃黏膜組織比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0.05)。

圖1 Caspase-3 在胃癌組織中表達(dá)情況(免疫熒光染色，400 ×) A:陽性表達(dá);B:陰性表達(dá)Fig 1 Expression of Caspase-3 in gastric cancer tissues (immunofluorescence staining，400 × ) A:postive expression;B:negative expression

表1 Caspase-3 在胃癌組織及正常胃黏膜組織的表達(dá)水平Tab 1 Expression of Caspase-3 mRNA in gastric cancer tissue and normal gastric tissue

2.2 Caspase-3 陽性表達(dá)率與其臨床病理特征的相關(guān)性分析 Caspase-3 在胃癌組織中的陽性表達(dá)率與胃癌的浸潤深度、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0.05)，表現(xiàn)為隨著浸潤深度的加深，其陽性表達(dá)率顯著降低;隨著分化程度的降低，其陽性表達(dá)率降低;隨著淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的出現(xiàn)，其陽性表達(dá)率也顯著降低(見表2)。

2.3 P53 在胃癌組織及正常胃黏膜組織的表達(dá)情況

P53 mRNA 在正常胃黏膜組織及胃癌組織的表達(dá)水平分別為0.40 ±0.11，0.81 ±0.21，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0.05);P53 在顯微鏡下呈紫色，P53 在胃癌組織中的陽性表達(dá)率為76.0%(38/50)，在正常胃黏膜組織中的陽性表達(dá)率為25.0%(5/20)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0.05，見表3、圖2)。

表2 Caspase-3 在胃癌組織中的陽性表達(dá)率與其臨床病理特征的相關(guān)性分析Tab 2 Correlation analysis of Caspase-3 positive rate and its clinicopathological features in gastric cancer tissues

圖2 P53 在胃癌組織及正常胃黏膜組織的表達(dá)情況(免疫熒光染色，400 ×) A:正常胃黏膜組織P53 少量表達(dá);B ～C:胃癌組織P53 表達(dá)明顯增多Fig 2 Expression of P53 in gastric cancer tissue and normal grastric tissue (immunofluorescence staining，400 ×) A:expression of P53 was low in normal gastric mucosa tissue;B ～C:expression of P53 increased significantly in gastric cancer tissue

2.4 P53 的陽性表達(dá)率與其臨床病理特征的相關(guān)性分析 P53 在胃癌組織中的表達(dá)水平與胃癌的浸潤深度、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0.05)，表現(xiàn)為隨著浸潤深度的加深，其陽性表達(dá)率顯著升高;隨著分化程度的降低，其陽性表達(dá)率增高;隨著淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的出現(xiàn)，其陽性表達(dá)率亦顯著增高(見表4)。

表3 P53 在胃癌組織及正常胃黏膜組織的表達(dá)水平Tab 3 Expression of P53 mRNA in gastric cancer tissue and normal gastric tissue

表4 P53 在胃癌組織中的陽性表達(dá)率及與其臨床病理特征的相關(guān)性分析Tab 4 Correlation analysis of P53 positive rate and its clinicopathological features in gastric cancer tissue

3 討論

目前大量研究表明Caspase-3 及P53 與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，Caspase-3 為參與凋亡重要的因子，是Caspase 酶解底物之一，為凋亡級聯(lián)反應(yīng)下游產(chǎn)物，研究表明當(dāng)Caspase-3 作用被受到抑制的時候，就會促進(jìn)腫瘤的產(chǎn)生或者加速腫瘤的發(fā)生。本研究，Caspase-3 在胃癌中的陽性表達(dá)率明顯低于正常胃黏膜組織。這與寇有為及劉勇等［1-2］的研究相一致。本研究中發(fā)現(xiàn)在伴有轉(zhuǎn)移的胃癌、低分化的胃癌、浸潤胃黏膜深的胃癌，其Caspase-3 的陽性表達(dá)率更低，這就說明Caspase-3 與腫瘤的發(fā)生及發(fā)展密切相關(guān)，這與鄔萬新等［3］的研究相一致。

P53 是發(fā)現(xiàn)較早的促進(jìn)細(xì)胞凋亡的因子，即野生型P53，可以監(jiān)視細(xì)胞的癌變發(fā)生，當(dāng)細(xì)胞基因DNA發(fā)生突變時，可以促進(jìn)修復(fù)，從而達(dá)到防治癌變的作用。因此當(dāng)P53 發(fā)生突變時，其監(jiān)視腫瘤的作用將會間接促進(jìn)腫瘤的發(fā)生，促進(jìn)正常細(xì)胞的轉(zhuǎn)化或者加速已經(jīng)轉(zhuǎn)化的細(xì)胞進(jìn)一步惡化。研究表明［4］，在胃癌、直腸癌、乳腺癌等惡性腫瘤中，都發(fā)現(xiàn)了突變型P53 基因的表達(dá)。本研究中，在胃癌組織中P53 基因陽性表達(dá)率為76.0%(38/50)，在正常胃黏膜組織中陽性表達(dá)率為25. 0% (5/20)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0.05)，因此可以認(rèn)為P53 與胃癌的發(fā)生密切相關(guān)。本研究還發(fā)現(xiàn)P53 在胃癌組織中的表達(dá)水平與胃癌的浸潤深度、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，表現(xiàn)為隨著浸潤深度的加深，其陽性表達(dá)率顯著升高;隨著分化程度的降低，其陽性表達(dá)率增高;隨著淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的出現(xiàn)，其陽性表達(dá)率亦顯著增高，這些說明P53 與胃癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，與胃癌患者的預(yù)后密切相關(guān)。這與王國利及李桂青［4-5］的研究一致。

綜上所述，Caspase-3 和P53 在胃癌組織中的表達(dá)水平與胃癌的浸潤深度、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)?？梢哉J(rèn)為，Caspase-3 和P53 與胃癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。

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